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文檔簡介

1、利多卡因氯己定氣霧劑無菌檢查法的驗證試驗Validation of sterility test of Lidocaine and Chlorhexdine acetate aerosolHU Wen?hong , WANG De?li? Shangdong Provincial Institute for Drug Control, Jinan 250101,China【】 ObjectiveThe establishment of Lidocaine and Chlorhexdine acetate aerosol sterility test method?MethodsAccordin

2、g to the 2010 edition of Chinese Pharmacopoeia sterility test method validation testing the requirements, positive test strains by inoculation, add neutralizer removal of Lidocaine on the Chlorhexidine antimicrobial activity of the experimental methods and conditions to verify the establishment of t

3、he sterile checks standard method of operation? ResultsDilution fluid or washing fluid by adding 1% polysorbate 80, the use of membrane filtration, washing each cartridge capacity of 300 ml, Lidocaine and Chlorhexidine can remove the inhibitory effect on bacteria?ConclusionThe method is accurate and

4、 reliable.1 儀器與材料1.1儀器BSC?150(EA2?X生物潔凈安全柜;MJ?250l生化培 養(yǎng)箱;GHP?9270隔水式恒溫培養(yǎng)箱; SartoriusCP225 d 電子天 平;HTY?2000B集菌儀(杭州泰林醫(yī)療器械廠生產(chǎn));PY220、PY330 一次性全封閉集菌器 (杭州泰林醫(yī)療器械廠生產(chǎn) )。1.2 培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 (100409) 、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng) 基(090518) 、營養(yǎng)肉湯 (090922) 、改良馬丁培養(yǎng)基 (100108) 、 硫 乙醇酸鹽培養(yǎng)基 (100323) 均購于北京三藥科技開發(fā)公司1.3稀釋液(沖洗液)pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液

5、購于 北京三藥科技開發(fā)公司、含1嘛山梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉? 蛋白胨緩沖液 (自配)。1.4 實驗用樣品利多卡因氯己定氣霧劑 ( 規(guī)格: 60 g/ 瓶 ) 分 別為山東京衛(wèi)制藥 XX公司(批號:0904008)、濟南為民制藥XX 公司(批號: 091020)1.5 菌株大腸埃希菌 (Eschrichia coli) CMCC(B)44102、生抱梭菌(Clostridium sporogenes) CMCC(B)6494、枯草芽 抱桿菌(Bacillus subtilis) : CMCC(B)63501 、金黃色葡萄球 菌(Staphylococcus aureus) CMCC(B)

6、 26 003 、白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F)98 001 、黑曲霉 (Aspergillusniger) CMCC(F) 98 003均購于中國生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌 種保藏中心,以上菌種均為第 3 代菌種。2 方法與結(jié)果2.1 菌液制備 1按中國藥典 20 1 0年版二部附錄“無 菌檢查法”項下方法制成小于 100 cfu/ml 的菌懸液。2.2 驗證試驗2.2?1 樣品的取樣量根據(jù) 中國藥典 2010 年版二部無菌檢 查法的有關(guān)規(guī)定 1,驗證試驗時每一株驗證菌株需要的樣品 量相當(dāng)于每一濾筒的樣品量。按此樣品的規(guī)格: 60 g/ 瓶,取樣 量為5瓶/筒,且每瓶

7、取樣量不少于1 g/瓶,共5 g,混勻后,備 用。2.2?2 稀釋液的選擇試驗取本品 5 瓶/筒,且每瓶取樣量不 少于 1 g/ 瓶,共 5 g ,混勻后,分別轉(zhuǎn)移至 200 ml pH7?0 無菌氯 化鈉?蛋白胨緩沖液、含1%聚山梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉?蛋 白胨緩沖液作稀釋液中,振搖后,取PY220次性全封閉集菌器 (兩聯(lián))一套,按薄膜過濾法處理,用pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液作沖洗液分別沖洗濾膜 3次,每次 100 ml/ 膜,泵入相同 培養(yǎng)基后,于兩筒中分別接入小于 100 cfu/ml 的試驗菌。前者 作為陽性對照筒,后者作為試驗筒。各試驗菌同法操作。再取硫 乙醇酸鹽培養(yǎng)

8、基及改良馬丁培養(yǎng)基分別泵入另兩筒集菌器中, 作 為陰性對照筒。按規(guī)定溫度將述集菌器培養(yǎng)35 d。其結(jié)果見表1。表1 稀釋液的選擇試驗結(jié)果稀釋液名稱培養(yǎng)天數(shù)試驗菌金葡枯草大腸生孢白念?曲試驗對照試驗對照試驗對照試驗對照試驗對照試驗對照陰性對照硫乙醇酸鹽改良馬丁 pH7?0 無菌氯化鈉 ?蛋白胨緩沖液 1 d?+?+?+2 d?+?+?+3 d?+?+?+ 1%聚山 梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液1 d+2 d+3 d+注+: ?: “無菌生長”; +:“有菌生長”,加號個數(shù)表示細(xì)菌生長程度2?2?3表1結(jié)果表明,用pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液 作稀釋液,在規(guī)定溫度培養(yǎng)后,對金

9、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿 菌、生孢梭菌均有抑制作用,各試驗筒均未有菌生長,陽性對照 筒生長良好; 但對大腸埃希菌、 白色念珠菌和黑曲霉無抑制作用, 試驗筒和陽性對照筒均生長良好; 而用含 1%聚山梨酯 80的 pH7?0 無菌氯化鈉 ?蛋白胨緩沖液作稀釋液,在規(guī)定溫度培養(yǎng)后,對驗 證試驗用的 6 種標(biāo)準(zhǔn)菌株均無抑制作用, 各試驗筒和陽性對照筒 均生長良好。2?2?4沖洗液的選擇試驗取本品 5 瓶/筒, 且每瓶取樣量不少于1 g/瓶,共5 g,混勻后,轉(zhuǎn)移至200 ml pH7?0 無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液中,振搖后,取PY220次性全封閉集菌器(兩聯(lián))一套,按薄膜過濾法處理,分別用pH7?0無

10、菌氯化 鈉?蛋白胨緩沖液、含 1%聚山梨酯 80的 pH 7?0 無菌氯化鈉 ?蛋 白胨緩沖液作沖洗液分別沖洗濾膜 3 次,每次 100 ml/ 膜。以下 操作步驟同前。其結(jié)果見表 2。表 2 沖洗液的選擇試驗結(jié)果沖洗液名稱培養(yǎng)天數(shù)試驗菌金葡枯草大腸生孢白念?曲試驗對照試驗對照試驗對照試驗對照試驗對照試驗對照陰性對照硫乙醇酸鹽改良馬丁 pH7?0 無菌氯化鈉 ?蛋白胨緩沖液 1 d?+?+?+2 d?+?+?+3 d?+?+?+ 1%聚山 梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液1 d+2 d+3 d+注+: ?: “無菌生長”; +:“有菌生長”,加號個數(shù)表示細(xì)菌生長程度2?2?5表 2

11、結(jié)果和表 1 結(jié)果完全一致。從以上試驗結(jié)果可知, 把 1%聚山梨酯 80 加在稀釋液或沖洗液中作為中和劑來消除藥品 的抑菌作用效果是一樣的。 兩個生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品同法操作, 結(jié)果 也完全一致。2?2?6 中和劑的驗證試驗 2證明一種中和劑是否適當(dāng)主 要基于兩點,一是對微生物生長的毒副作用,二是有效性。毒副作用:方法同上。取1%聚山梨酯80的pH7?0無菌氯化 鈉?蛋白胨緩沖液 300 ml 濾過集菌器,分別泵入 100 ml 硫乙醇 酸鹽培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基,再分別接入小于 100 cfu/ml 的 各試驗菌。 按規(guī)定溫度培養(yǎng)、 觀察。 結(jié)果見表 3。表 3 結(jié)果顯示, 用于無菌檢查驗證試驗用

12、的 6 株試驗菌株在此條件下均生長良 好。表 3 毒副作用試驗結(jié)果培養(yǎng)天數(shù)1%聚山梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖 液金葡枯草大腸生孢白念 ?曲 1 d+2 d+3 d+注:?:“無菌生長”;+ : “有菌生長”,加號個數(shù)表示細(xì)菌生長程度有效性:由表1、2中可見,在pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩 沖液中添加 1%聚山梨酯 80,不筒當(dāng)稀釋液還是沖洗液,都能有 效地降低藥品的抑菌性,使檢驗方法簡化、便于操作,提高準(zhǔn)確 性,符合驗證試驗要求,可以作為中和劑。3 利多卡因氯己定氣霧劑無菌檢查方法取本品 15瓶/3 筒,且每瓶取樣量不少于 1 g/ 瓶,共 15 g,混勻后,轉(zhuǎn)移至 200

13、ml pH7?0 無菌氯化鈉 ?蛋白胨緩沖液 (或含 1%聚山梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液)稀釋液中, 振搖,經(jīng)薄膜過濾法處理,用含 1%聚山梨酯80的pH7?0無菌氯 化鈉?蛋白胨緩沖液(或pH7?0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液)作沖 洗液分次沖洗 ( 每膜不少于 300 ml) ,每次 100 ml/ 膜,以金黃色 葡萄球菌為陽性對照菌, 依法檢查 (中國藥典 201 0年版二部附錄 幻H),應(yīng)符合規(guī)定。4 討論4?1 中和劑的濃度在實驗過程中, 筆者還分別對 1%聚山梨酯 80、3%聚山梨酯80、5%聚山梨酯80的pH7?0無菌氯化鈉?蛋白 胨緩沖液進(jìn)行了考察, 試驗結(jié)果顯示, 三個濃度的中和劑均有一 定的中和作用。 但隨著濃度的增加, 緩沖液的粘稠度也隨之增強, 振搖后,泡沫也隨之更加豐富,對濾膜過濾不利。因此,一般情 況下,建議選用1%- 3艦山梨酯80

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