推薦沙門菌屬和志賀菌屬檢驗(yàn)

1、沙門菌屬和志賀菌屬檢驗(yàn)步驟和方法1 .形態(tài)觀察(1)革蘭染色：沙門菌屬細(xì)菌為革蘭陰性細(xì)長桿菌。志賀菌屬細(xì)菌為革蘭陰性桿菌，散在分布。(2)觀察鞭毛染色標(biāo)本片：鏡下可見沙門菌屬細(xì)菌具有周鞭毛。志賀菌屬細(xì)菌無鞭毛。2 .菌落觀察(1)沙門菌屬：將本菌接種在 S& MA評(píng)板上經(jīng)35c孵育1824h。由于本菌不分解乳糖并產(chǎn)堿，故 在SS和MA評(píng)板上形成無色、半透明、光滑濕潤、凸起的小菌落，產(chǎn)生H2s的菌落可在SS平板上形成中心帶黑褐色的小菌落。(2)志賀菌屬：將本菌接種在 SS和MA評(píng)板上經(jīng)35 c孵育1824h。由于志賀菌不分解乳糖，宋內(nèi) 志賀菌某些菌株可遲緩發(fā)酵乳糖，故其在SS平板和MA評(píng)

2、板上形成無色透明的、中等大小的菌落。除宋內(nèi) 志賀菌菌落外均為光滑型菌落。3 .生化反應(yīng)氧化酶試驗(yàn)：方法同大腸埃希菌。沙門菌屬和志賀菌屬細(xì)菌氧化酶試驗(yàn)均為陰性。初步試驗(yàn)鑒定：挑取志賀菌和沙門菌的單個(gè)菌落分別接種在KIA、MIU和硝酸鹽培養(yǎng)基上，經(jīng)35c孵育1824h,同時(shí)做觸酶試驗(yàn)其結(jié)果見表2 4。表2-4志賀菌屬和沙門菌屬的基本生化反應(yīng)KIAMIU氧化 酶觸 酶硝酸鹽還 原斜面底層產(chǎn) 氣H2S、動(dòng) ,力咪月尿 酶志賀苗KA-/+-+/-+傷寒沙門菌KA-+/-+-+乙型副傷寒 菌KA+-+最終鑒定：須做全面生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗(yàn)。4 .血清學(xué)試驗(yàn)(1)志賀菌屬的分型鑒定：凡生化反應(yīng)符合志賀菌屬者

3、均需做血清學(xué)鑒定。取1環(huán)志賀菌四種多價(jià)血清于載玻片一端，再取少許待測菌與之混合，同時(shí)在玻片另一端取待測菌與生理鹽水混合對(duì)照。結(jié)果：對(duì) 照呈均勻混濁，待檢菌與志賀菌四種多價(jià)血清混合后，數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的顆粒狀凝集物即為陽性。繼之用A、B、C、D群最常見的單價(jià)血清凝集定種。結(jié)果判斷、解釋和報(bào)告：分離培養(yǎng)未見可疑菌落或經(jīng)鑒定不符合志賀菌屬鑒定依據(jù)者可報(bào)告“未分離到志賀菌屬細(xì)困 。經(jīng)分離鑒定后符合鑒定依據(jù)者，可報(bào)告“分離出XX志賀菌”，若進(jìn)一步做多種生化反應(yīng)及因 子血清分型后，可報(bào)告：“分離出X X志賀菌X型”。(2)沙門菌屬的分型鑒定：如果生化反應(yīng)及形態(tài)學(xué)檢查疑為沙門菌，可選用沙門菌的多價(jià)診斷血

4、清進(jìn)行玻片凝集。首先選用 AF組多價(jià)"O'診斷血清做玻片凝集試驗(yàn)。在試驗(yàn)時(shí)應(yīng)以生理鹽水作對(duì)照。血清 凝集試驗(yàn)在510min內(nèi)不出現(xiàn)凝集者可確定為陰性。但若生化反應(yīng)比較典型，應(yīng)考慮選用Vi凝集試驗(yàn)若凝集，則用無菌生理鹽水將菌洗下，制成濃厚的懸液，加熱 100C、30min,再與AF組多價(jià)"O'診斷血清做凝集試驗(yàn)。若與 AF組多價(jià)"O'血清發(fā)生凝集，應(yīng)再與沙 門菌單價(jià)因子血清分別做玻片凝集試驗(yàn)，以確定該菌株屬于哪一組。一般先選用本地區(qū)檢出率最高菌型的 相應(yīng)血清做玻片凝集反應(yīng)。若已確定哪一沙門菌種后，再分別先用H因子血清檢查第I相抗原，然后檢查第

5、口相抗原，最后確定該菌種屬于哪一型沙門菌。結(jié)果判斷、解釋和報(bào)告：分離培養(yǎng)未發(fā)現(xiàn)可疑菌落或經(jīng)鑒定不符合沙門菌屬細(xì)菌鑒定依據(jù)者，可報(bào)告“未分離出沙門 困 。生化反應(yīng)符合沙門菌、 玻片凝集試驗(yàn)結(jié)果陽性， 可初步報(bào)告為：“分離到XX沙門菌”， 或“X 群沙門菌”。5 .肥達(dá)試驗(yàn)(1)原理：用已知的傷寒沙門菌 Q H抗原，甲、乙型副傷寒沙門菌的H抗原(PA、PB)與腸熱癥患者血清做定量試管凝集試驗(yàn)，以出現(xiàn)“ 2+”凝集的最高血清稀釋度為效價(jià)，測定相應(yīng)抗體含量，用以輔助診 斷腸熱癥。(2)試驗(yàn)方法：為單管稀釋法。準(zhǔn)備 4排小試管，每排3. 8ml及被檢血清 O. 2ml,混勻，即為1： 20稀釋，總量為

6、排小試管中的第1支試管中。再于上述中號(hào)試管內(nèi)加生理鹽水 此稀釋度血清2ml,按每管0.5m1分別加到各排小試管中的第7支并標(biāo)記，另取中號(hào)試管4ml o然后取出2ml按每管2ml混勻，此種血清即為1支，加生理鹽水0.5m1分別放人各1: 40稀釋，吸取2支試管中。以此類推連續(xù)稀釋到各排小試管第6支試管為止，第7支小試管只加入0.5ml生理鹽水做陰性對(duì)照。然后按表 2-5操作。表2-5血清學(xué)試驗(yàn)(肥達(dá)試驗(yàn))方法試驗(yàn)管(每管0.5ml稀釋血清)對(duì)照管1: 201: 401: 801 : 1601 : 3201: 640生理鹽 水O抗原0.50.50.50.50.50.50.5H抗原0.50.50.5

7、0.50.50.50.5PA抗原0.50.50.50.50.50.50.5PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血涓取終稀 釋1: 401 : 801 : 1601 : 3201 : 6401 : 1280-振蕩片刻，置于45c水浴箱中2h或37c水浴箱4h,取出置室溫或放冰箱中過夜，次日觀察并記錄 結(jié)果。(3)結(jié)果判斷解釋和報(bào)告：先觀察對(duì)照管，正確結(jié)果應(yīng)無凝集反應(yīng)， 再分別與對(duì)照管比較觀察各試管 凝集情況。根據(jù)液體透明度和凝集塊多少，以 4+、3+、2+、+、-符號(hào)記錄4+:上清液完全澄清，細(xì)菌凝集塊全部沉于管底。3+:上清液澄清度達(dá)75%,大部分細(xì)菌凝集成塊沉于管底。2+:上清

8、液澄清度達(dá)50%,約50 %細(xì)菌凝集成塊沉于管底。25 %+ :上清液體混濁，管底僅有少部分細(xì)菌凝集成塊，上清液澄清度僅有-:液體均勻昆濁，無凝集塊。以呈現(xiàn)2+凝集現(xiàn)象的血清最高稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價(jià)。一般認(rèn)為，傷寒沙門菌O抗體凝集價(jià)在1: 80以上，H抗體在1: 160以上，甲、乙、丙型副傷寒沙門菌凝集價(jià)在1: 80以上才有診斷意義。注意事項(xiàng)1 .加入診斷菌液時(shí)，由對(duì)照管開始往前，每管各加O. 5ml o2 .結(jié)果觀察時(shí)不要振蕩試管，先觀察，必要時(shí)再輕搖試管使凝塊從管底升起，最后按液體的清濁，凝 塊的大小進(jìn)行記錄，對(duì)照管（不凝集）與試驗(yàn)管同時(shí)對(duì)著光線往暗處看液體透明度和凝集塊。3 . “H'凝集呈絮狀，以疏松之