纖維素分解菌的分離和鑒定教學(xué)提綱

1、纖維素分解菌的分離和鑒定精品資料纖維素降解菌類的分離與鑒定系列實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)背景纖維素是植物細(xì)胞壁主要成分，屬于多糖類物質(zhì)，是地球上數(shù)量最大的可 再生資源。如能利用微生物將其轉(zhuǎn)化為生物產(chǎn)品或生物能源，即可緩解能源短 缺、解決環(huán)境污染，又能形成新的產(chǎn)業(yè)。由于在自然界中存在著大量產(chǎn)纖維素 酶的細(xì)菌和真菌，因而纖維素的生物降解主要依賴于微生物的作用。從 20世紀(jì) 40-50年代起，針對產(chǎn)纖維素酶的微生物的分離篩選就進(jìn)行了大量的工作，并 逐步建立起一套較完整的分離篩選方法。迄今為止有關(guān)纖維素降解菌分離篩選 的研究報(bào)導(dǎo)已有很多，如細(xì)菌中的生抱噬纖維菌屬、噬纖維菌屬及纖維單胞菌 屬等；放線菌由于能形成芽抱，

2、與真菌相比較耐高溫和各種酸堿度，故在高溫 階段放線菌對分解木質(zhì)素和纖維素起著重要的作用。主要有諾卡氏菌屬、鏈霉 菌屬、芽抱桿菌屬及小單胞菌屬等；真菌中研究較多的是青霉屬、根霉屬、曲 霉屬等，其中以木霉屬的菌株纖維素酶活較高。以竣甲基纖維素鈉和添加少量 葡萄糖作為碳源，培養(yǎng)纖維素酶產(chǎn)生菌株，培養(yǎng)一定時(shí)間后，經(jīng)剛果紅染色和 稀堿液固定，在菌落周圍形成透明水解圈，根據(jù)透明圈的大小，快速定性鑒定 纖維素酶產(chǎn)生菌酶活大小。與傳統(tǒng)纖維素酶活檢測方法比較，本方法菌絲生長 快，兩天后菌落經(jīng)染色，透明圈邊緣清晰，直觀性強(qiáng)，與酶活力成一定線性關(guān) 系。纖維素是世界上所有植物的組成部分，是地球上最為豐富且可再生的資

3、源。隨著世界能源形勢趨于惡化，環(huán)境問題日益加劇，利用纖維素生產(chǎn)有高附 加值資源的以維持人類可持續(xù)發(fā)展的研究方向近年來逐步成為科學(xué)研究的熱點(diǎn) 方向。利用微生物將纖維素、半纖維素降解轉(zhuǎn)化為生物產(chǎn)品或生物能源即可緩僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝2精品資料解能源短缺、解決環(huán)境污染，又能形成新的產(chǎn)業(yè)。因此分離和篩選高酶活性的菌株是有效利用纖維素物質(zhì)的關(guān)鍵。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膹哪繕?biāo)試樣中分離篩選出具有降解纖維素能力的菌株。三、實(shí)驗(yàn)材料：1、樣品的采集1）風(fēng)干土樣 E4-1、E2-6、E2-6 試樣。2）潮濕土樣 E4-1、E2-6、E2-6 試樣。3）牛糞樣品2份以上實(shí)驗(yàn)材料全部取自三教微生物實(shí)驗(yàn)室

4、冰箱中；2、2） LB培養(yǎng)基3）高氏1號培養(yǎng)基4） PDA養(yǎng)基3、其他物品天平，稱量紙，藥匙，試管架，涂布器、搖床、烘箱、滅菌鍋、瓶子、 45ml無 菌水（帶玻璃珠），含9ml無菌水的試管，無菌培養(yǎng)皿，1ml及0.08ml移液 管。四、實(shí)驗(yàn)步驟：（牛糞中纖維素降解菌類的分離與鑒定）僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除 謝謝3精品資料1、牛糞取樣于冰箱取2個(gè)牛糞樣品各5g。2、選擇培養(yǎng)(1)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：將實(shí)驗(yàn)所需平板約 60個(gè)，兩個(gè)錐形瓶(各45ml無菌水加少量 玻珠)，14支9ml無菌水滅菌。(2)培養(yǎng)基的配置：參照配方配制培養(yǎng)基竣甲基纖維素鈉培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基高氏一號培養(yǎng)基。在121c下高壓滅

5、菌20min。(3)將2份牛糞樣品于超凈工作臺(tái)內(nèi)放入 45ml錐形瓶內(nèi)，即為10-1懸液，于1500r/min 搖床 15min。(4)用移液槍吸取10-1懸液1ml打入9ml無菌水中，即為10-2懸液，如此重復(fù)，依次制成10-3至10-8懸液。(5)倒平板：將滅菌后的各個(gè)培養(yǎng)基在無菌操作下倒20ml左右于培養(yǎng)基中，凝固后待用。(6)涂布平板：將稀釋度為10-6至10-8懸液各取0.08ml涂布到平板培養(yǎng)基上，每個(gè)梯度需涂布2個(gè)平板，設(shè)為對照。置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察，持續(xù)觀察，直到出現(xiàn)明顯的菌落。3、挑菌保種將出來的明顯菌類按照類別分別保種到不同的斜面培養(yǎng)基中。4、剛果紅鑒定配制剛果紅培養(yǎng)基，將

6、菌株點(diǎn)樣與剛果紅培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。觀察各個(gè)菌株是否具有分解纖維素的能力。(從濕土中提取纖維素菌)僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝4精品資料1、分別配制竣甲基纖維素鈉培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基高氏一號培養(yǎng)基PDA培 養(yǎng)基各500ml,裝進(jìn)5個(gè)瓶子中。在14根試管中分別加入9ml蒸儲(chǔ)水，并用試 管塞塞緊。在兩個(gè)錐形瓶中分別加入 45ml蒸儲(chǔ)水，并且放如玻璃球，用封口膜 封好。包90個(gè)平板。準(zhǔn)備1ml和0.1ml移液槍的槍頭。將以上5種物品用報(bào)紙 包好后放入滅菌鍋中121c滅菌30分鐘。同時(shí)將操作臺(tái)的紫外線打開。2、待滅菌完后，將物品取出，放入烘箱烘干。3、將烘干后的平板、試管、錐形瓶、槍

7、頭放入操作臺(tái)里。兩種濕土樣分別稱取5g,在操作臺(tái)里加到錐形瓶中，封口，放到搖床上搖30分鐘。4、搖好后取回，關(guān)閉操作臺(tái)的紫外線。取 7支試管并分別標(biāo)號-2、-3、-4、-5、-6、-7,用1ml移液槍從一個(gè)錐形瓶中吸取1ml菌液，射到-2號試管中，換 槍頭，從-2號試管中吸取1ml菌液射到-3號試管中，以此類推。另一個(gè)錐形瓶 的菌液也要經(jīng)過同樣的操作。5、取一個(gè)培養(yǎng)基（例如LB培養(yǎng)基），倒24個(gè)平板，立即用1ml移液槍移取 一種菌液-5號試管中的液體，注射到一個(gè)平板中，搖勻（混菌法）。標(biāo)號。一 個(gè)菌液，一個(gè)梯度做兩個(gè)平板.剩下12個(gè)平板做涂布。其他4個(gè)培養(yǎng)基同理。6、待要涂布的平板干了以后，進(jìn)

8、行涂布。每個(gè)平板加 0.1ml菌液，用涂布器抹 勻，到看不見水印為止，將涂布完的平板倒置在超凈臺(tái)里。標(biāo)號。一個(gè)菌液， 一個(gè)梯度做兩個(gè)平板。7、將做好的所有平板，放入恒溫箱中培養(yǎng)，每天觀察有沒有長菌，及時(shí)將有菌 的平板挑出保種。（從干土中提取纖維素菌）1、土壤處理僅供學(xué)習(xí)與交流，如有侵權(quán)請聯(lián)系網(wǎng)站刪除 謝謝5精品資料于冰箱取3個(gè)土壤樣品置于實(shí)驗(yàn)室中風(fēng)干 7天左右。2、選擇培養(yǎng)(1)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：將實(shí)驗(yàn)所需平板約 90個(gè)，兩個(gè)錐形瓶(各45ml無菌水加少量 玻珠)，21支9ml無菌水滅菌。(2)培養(yǎng)基的配置：參照配方配制培養(yǎng)基：竣甲基纖維素鈉培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基高氏一號培養(yǎng)基。在 121c下高壓滅菌20min。(3)將3份土壤樣品于超凈工作臺(tái)內(nèi)放入 45ml錐形瓶內(nèi)，即為10-1懸液，于1500r/min 搖床 15min。(4)用移液槍吸取10-1懸液1ml打入9ml無菌水中，即為10-2懸液，如此重復(fù)，依次制成10-3至10-8懸液。(5)倒平板：將滅菌后的各個(gè)培養(yǎng)基在無菌操作下倒20ml左右于培養(yǎng)基中，凝固后待用。(6)涂布平板：將稀釋度為10-6至10-8懸液各取0.08ml涂布到平板培養(yǎng)基上，每個(gè)梯度需涂布2個(gè)平板，設(shè)為對照。置