唾液淀粉酶的活性觀察

1、唾液淀粉酶的活性觀察【實驗?zāi)康摹?. 了解環(huán)境因素對酶活性的影響及酶的高效性。2. 掌握酶定性分析和注意事項。【基本原理】酶是生物催化劑，具有極高的催化效率，具催化率比一般催化劑高io6io13。 在生物體內(nèi)，過氧化氫酶能催化過氧化氫很快地分解成為HO和Q，使H2Q不致在體內(nèi)大量積累。鐵粉也是過氧化氫分解反應(yīng)的催化劑， 但其催化效率僅為過氧 化氫的100億分之一。酶的催化作用受到溫度的影響。在一定的溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，酶 促反應(yīng)速度增加，直至最大值。由于酶是一種蛋白質(zhì)，溫度過高會導(dǎo)致酶的失活， 因此，反應(yīng)速度到達(dá)最高值以后，溫度繼續(xù)升高，酶促反應(yīng)速度反而急劇下降， 直至完全停止酶促反應(yīng)

2、。反應(yīng)速度達(dá)到最大值時的溫度稱為酶作用的最適溫度。酶活性受環(huán)境pH值的影響。通常各種酶只有在一定的pH值范圍才表現(xiàn)出活 力。酶活性達(dá)到最高的pH值，稱為最適pH值。低于或者高于最適pH值時，酶 的活性均降低或者失去活性。唾液淀粉酶的最適 pH值為6.8。酶活性受環(huán)境中某些物質(zhì)的影響，有些物質(zhì)能使酶的活性增加，稱為激活劑； 有些物質(zhì)能使酶的活性降低，稱為抑制劑。值得注意的是，激活劑和抑制劑不是 絕對的，有些物質(zhì)在低濃度時為酶的激活劑，而在高濃度時則為該酶的抑制劑。 例如，0.9%的氯化鈉是唾液淀粉酶的激活劑，但氯化鈉達(dá)到1/3飽和度時就可抑 制唾液淀粉酶的活力。本實驗以唾液淀粉酶為材料來觀察環(huán)境

3、因素對酶活性的影響情況。唾液中含有a -淀粉酶，該酶屬于內(nèi)切酶。淀粉在該酶的催化作用下或隨著時間的延長而 出現(xiàn)不同程度的水解產(chǎn)物，從而得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等產(chǎn)物。而碘液能指示淀粉的水解程度，淀粉及淀粉不同程度的水解產(chǎn)物遇到碘可呈 藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色，而麥芽糖遇碘液則不呈顏色反應(yīng)。如圖所示：淀粉酶淀粉酶淀粉紫色糊精暗褐色糊精紅色糊精芽糖+少量葡萄糖加碘后：藍(lán)色紫紅色暗褐色紅棕色黃色（碘本身顏色）【實驗試劑、材料和器材】（一）試劑（1）0.5%淀粉溶液：稱取 0.5g 可溶性淀粉，加入少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后緩慢倒入沸騰的 60mL 蒸餾水中，攪動煮沸1min。冷卻至室溫后加水

4、至100mL置冰箱中存放。（2）碘液：稱取2g碘化鉀溶于5mL蒸餾水中，隨后加1.2g碘，待碘溶解后，加蒸餾水至 200mL混合均勻后保存于棕色瓶中，用前稀釋 5倍。（3）不同pH值溶液A液 0.2mol/L Na 2HPO溶液：稱取35.62 gNazHPG 12HO,溶于蒸餾水后定 容至 1000mL。B液一一0.1 mol/L檸檬酸溶液：稱取21.01g 一水檸檬酸，溶于蒸餾水后定容至1000mL。 pH3.8緩沖液一一取 A液71.0mL、B液129.0mL混合而成。 pH6.8緩沖液一一取 A液145.5mL、B液54.5mL混合而成。 pH8.0緩沖液一一取 A液194.5mL、B

5、液5.5mL混合而成。（ 4） 1%（ W/V） CuSO4 溶液：稱取無水硫酸銅1g （或者稱取五水硫酸銅約1.5625g），溶解后用蒸餾水稀釋至100mL。（5）0.9% （W/V NaCl 溶液：稱取氯化鈉 0.9g ，溶解后用蒸餾水稀釋至 100mL。（6）2% HO溶液。（7）鐵粉（二）材料馬鈴薯（生的，熟的各一份）（三）儀器白比色板，恒溫水浴箱，制冰機(jī)，電爐，電子天平，棕色試劑瓶，研缽，試管（30mL，刻度吸管（移液槍），燒杯，容量瓶，水果刀，計時表，一次性杯子等 【操作步驟】（一）唾液淀粉酶的制備每人先用自來水水漱口，將口腔內(nèi)的食物殘渣清除干凈。然后用一次 性杯子取蒸餾水約20m

6、L含入口中，做咀嚼動作34分鐘，以分泌較多的唾 液。將口腔中的蒸餾水吐入干凈的小燒杯中，此即為稀釋的唾液淀粉酶液。（二）酶的高效性及環(huán)境因素對酶活性的影響1. pH對酶活力的影響 取3只試管編號，按表1操作。表1 pH值酶活力的影響mL編號123pH=3.8緩沖溶液3pH=6.8緩沖溶液3pH=8.0緩沖溶液30.5%淀粉溶液111唾液淀粉酶111將上述各管溶液混勻后在37C水浴中保溫5min每隔1min，從2號試管中取出1滴溶液置于白瓷板上，檢查淀粉水解程度用碘液檢查淀粉的水解程度，待溶液不再變色時，從水浴中取出所有試管向各管中均加碘液12滴，搖勻觀察，記錄并解釋各管的現(xiàn)象2.溫度對酶活性的

7、影響取3只試管編號，按表2操作。表2溫度對酶活力的影響編號123淀粉酶液（mL0.50.50.5pH6.8的緩沖溶液（mL1110.5%淀粉溶液（mL111反應(yīng)溫度C, 10mi n）037100取出各試管冷水冷卻向各管中均加碘液13滴，搖勻觀察，記錄并解釋各管的現(xiàn)象3. 酶的激活劑和抑制劑對酶活性影響取3只試管編號，按表3操作表3酶的激活劑和抑制劑對酶活性的影響mL編號1230.9%NaCI 溶液11%CuSOg 液1蒸餾水10.5%淀粉溶液111唾液淀粉酶液111將上述各管溶液混勻后在37 r水浴中保溫檢查淀粉水解程度每隔1mi n，從1號試管中取出1滴溶液置于白瓷板上，用碘液檢查淀粉的水解程度，待溶液不再變色時,從水浴中取出所有試管向各管中均加碘液勻 搖 ,2觀察，記錄并解釋各管的現(xiàn)象【注意事項】（1）做pH值對酶活性的影響實驗項目時，為確保實驗的效果，各試劑加完 后再加唾液淀粉酶液。（2）做