臨床細(xì)菌學(xué)檢驗的質(zhì)量控制流程

1、臨床細(xì)菌學(xué)檢驗的質(zhì)量控制流程1、質(zhì)量的概念和質(zhì)量保證影響檢驗結(jié)果質(zhì)量的因素很多 ,實驗過程中 , 儀器、試劑和操 作等均會引起試驗結(jié)果的誤差 , 衡量檢驗結(jié)果的質(zhì)量常用準(zhǔn)確度和 精確度 , 或特異性和靈敏度。具體采用哪一種指標(biāo)應(yīng)根據(jù)實驗的性 質(zhì)決定 , 目前臨床細(xì)菌學(xué)檢驗的工作內(nèi)容大致有 3類, 衡量起質(zhì)量的 技術(shù)指標(biāo)不完全相同。第一類是檢出細(xì)菌的實驗 , 包括標(biāo)本直接涂片檢查和細(xì)菌分 離培養(yǎng)?，F(xiàn)代的細(xì)菌感染 , 混合菌較常見 , 一份標(biāo)本中 , 會有 2 種以 上細(xì)菌存在。無論標(biāo)本直接涂片還是分離培養(yǎng) , 檢驗結(jié)果必須如實 反映感染病灶中細(xì)菌的真實情況。這類實驗的質(zhì)量 , 應(yīng)該用細(xì)菌檢 出率

2、或細(xì)菌分離率來衡量。第二類是鑒定細(xì)菌的實驗。通過一系列生理生化及形態(tài)學(xué)、 血清學(xué)的手段來鑒定病原菌。 對分離到的病原菌都做出準(zhǔn)確的鑒定 是反映細(xì)菌事工作質(zhì)量的一個重要方面。第三類是藥敏實驗。 有稀釋法和紙片法 , 前者是半定量的實驗 可以用準(zhǔn)確度和精密度來衡量 , 后者以敏感或耐藥的形式報告 , 屬 于定性的實驗 , 但實驗過程中測量抑菌環(huán)是定量的指標(biāo)。也應(yīng)以準(zhǔn) 確度和精確度衡量。所以實驗室人員必須清楚認(rèn)識到以上這一點 , 在實驗室的設(shè) 計和管理方面就應(yīng)該主動設(shè)置誤差檢測系統(tǒng) , 實驗中一旦出現(xiàn)誤差 及時發(fā)出警報 , 查明原因及時糾正。2、室內(nèi)質(zhì)量控制2.1 在職人員2.1.1 須受過細(xì)菌學(xué)檢

3、驗的專門基礎(chǔ)教育以及相關(guān)的生物交全防護(hù) 知識,并以細(xì)菌檢驗為專業(yè) , 及時終結(jié)并積累工作經(jīng)驗。2.1.2 作人員必須具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度 , 技術(shù)操作須完全遵守操作 規(guī)程 ,并直接參與質(zhì)量控制工作。2.1.3 工作人員應(yīng)不斷加強自身的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí) , 及時了解本領(lǐng)域的新 進(jìn)展 ,將所掌握的新知識應(yīng)用到實際工作中。2.1.4實驗室管理人員應(yīng)注意利用一切機會培養(yǎng)技術(shù)人員，積極參加國際、國內(nèi)學(xué)術(shù)會議、專業(yè)培訓(xùn)班，獲取新信息。因為細(xì)菌學(xué)檢驗,投資人員培訓(xùn)遠(yuǎn)比投資與儀器設(shè)備更重要。22操作手冊及參考書221細(xì)菌室可以根據(jù)自己的實際情況制訂一本指導(dǎo)日常工作、簡 明扼要的操作手冊，并在工作中不斷完善和修改。2.2

4、.2細(xì)菌室應(yīng)準(zhǔn)備一些細(xì)菌學(xué)參考書，解決某些少見的菌種的分 離鑒定，判斷細(xì)菌的致病性及向臨床醫(yī)生解釋結(jié)果時用。3、設(shè)備質(zhì)量控制3.1溫箱、冰箱每日工作開始，在打開溫箱或冰箱等控溫設(shè)備前，以 及下午下班前須觀察當(dāng)時設(shè)備的溫度并記錄。3.2高壓滅菌器須定期檢查滅菌器的滅菌效果，至少每月1次。測試方法可用留點溫度計或嗜熱芽抱菌等，并定期維修。3.3生物安全柜新安裝必須由生產(chǎn)廠家提供安裝檢測報告,以后每年必須檢測一次，若須更換濾網(wǎng)，須由專門技術(shù)人員進(jìn)行，并提供檢 測報告。工作時檢測氣流、紫外燈正常與否，可用營養(yǎng)瓊脂檢測空氣中細(xì)菌的沉降數(shù)，紫外線必須有使用記錄，每3個月檢查一次性能3.4接種環(huán)要求長5-8

5、cm,環(huán)直徑約3mm接種針長5-8cm。3.5顯微鏡應(yīng)做好常規(guī)的清潔和保養(yǎng)。所有的技術(shù)人員必須對顯微 鏡的對光、應(yīng)用和清潔正確步驟掌握。3.6細(xì)菌鑒定儀應(yīng)及時更新系統(tǒng)操作軟件。定期清浩儀器的探測部 位,并用標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行校正，必要時按照菌株對每批號的鑒定卡、 條、板進(jìn)行一次測定,并核對每個反應(yīng)和藥敏試驗的結(jié)果。4. 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制每批培養(yǎng)基應(yīng)有配制記錄，并對不同性能的培養(yǎng)基要用以知 特性的、穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行測定并記錄,符合要求方可應(yīng)用。培養(yǎng)基的一般質(zhì)量控制項目檢測標(biāo)準(zhǔn)檢測頻率(1)外觀液體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基含指示劑 的培養(yǎng)基各種培養(yǎng)基都應(yīng)有名 稱、標(biāo)記和制備日期 顏色、透明度、失水情 況無菌

6、落、不干裂無每周菌、顏色符合要求(2)平板深度般培養(yǎng)基3mmMH 為 4-6mm每批(3)雙糖斜面底層與斜面之間至少 有1cm的直立段,長度 不得過2/3試管,不可 干裂每批(4)無菌試驗 經(jīng)病壓火菌后的培養(yǎng) 基無菌分裝的試管或 平板 選擇性培養(yǎng)基隨機取10個,放35度 孵箱24h無菌每批(5)硬度試驗 固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基劃線接種應(yīng)無碎裂 穿刺接種后能區(qū)分有 動力或無每批監(jiān)控常規(guī)培養(yǎng)基及試劑的菌種培養(yǎng)基陽性(或生長)陰性(或不生長)監(jiān)測頻率第一套：A(每月一次)賴氨酸脫酶 鳥氮酸脫羧酶 精氨酸雙水解酶 靛基質(zhì)v - p櫞酸鹽(西蒙氏) 苯丙氨酸脫氨酶葡萄糖0-F 氧化遲緩愛德華菌 產(chǎn)氣腸

7、桿菌 陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌 陰溝腸桿菌 產(chǎn)氣腸桿菌雷氏變形桿菌銅綠假單胞菌弗氏構(gòu)櫞酸菌 弗氏構(gòu)橡酸菌 普通變形桿菌 陰溝腸桿菌 大腸埃希氏菌 遲緩愛德華菌 弗氏枸櫞酸菌每批發(fā)酵不活動硝酸鹽還原氧化酶觸酶膽汁七葉酸 丙二酸鹽 尿素動力大腸埃希氏菌 洛非氏不動桿菌 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌ATCC27853 金黃色葡萄球菌 糞鏈球菌 產(chǎn)氣腸桿菌 雷極氏變形桿菌（快） 肺炎克雷伯氏菌（慢） 大腸埃希氏菌洛菲氏不動桿菌 大腸埃希氏菌ATCC25922化膿性鏈球菌 化膿性鏈球菌 遲緩愛德華菌 大腸埃希氏菌肺炎克雷伯氏菌第二套:B（每批一次）巧克力球脂（HN） 羊血瓊脂平板麥康凱雙糖鐵培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂

8、流感血桿菌 化膿性鏈球菌（小菌落）肺炎鏈球菌（中等菌 落）大腸埃希氏菌（粉紅 菌落）奇異變形桿菌（無色 菌落）金黃色葡萄球菌每批5.試劑、染色液的質(zhì)量控制試劑的質(zhì)量控制試劑陽性控制菌種陰性控制菌監(jiān)測頻率氧化酶銅綠假單胞菌ATCC 2 7 8 5 3大腸埃希氏面ATCC 2 5 9 2 2每次凝固酶金黃葡萄球菌表皮葡萄球菌每次桿菌肽紙片A群鏈球菌B群鏈球菌每次Optochin 紙片肺炎鏈球菌草綠色鏈球菌每次染色液的質(zhì)量控制染色液陽性控制菌種陰性控制菌監(jiān)測頻率革蘭氏染色液金黃色葡萄球菌 ATCC 2 5 9 23大腸埃希氏菌ATCC 2 5 9 2 2每天萋納抗酸染液TB陽性的痰液不作每次鞭毛染色

9、液普通變形桿菌福氏志賀氏每次6、藥敏試驗的質(zhì)量控制瓊脂擴散法為藥敏試驗直接測定抑菌環(huán)直徑。參考菌株分別選 擇金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希氏菌ATCC2592刑銅綠假 單胞菌ATCC27853由于有很多因素均能影響藥敏試驗擴散法的結(jié) 果,因此對以下每一可變因素均應(yīng)按要求加以控制:6.1培養(yǎng)基的成分、PH及深度:成分為水解烙蛋白瓊脂:PH為7.2+0.1 ;深度為4mm 只9cm直徑的平板約需25ml培養(yǎng)基。6.2抗生素紙片含量及有效期:庫存的抗生素紙片儲存在 20度,小 量使用抗生素紙片密圭寸后存放于冰箱的冰格內(nèi)。使用時取出，放置室溫平衡后再開啟。6.3菌落濃度:挑取分純的菌落 5-

10、10個移種于合適的液體培養(yǎng) 基,35度46h后，校正菌液濃度與標(biāo)準(zhǔn)0.5麥?zhǔn)媳葷峁芟嗤瑸橹埂?.4將菌液均勻的涂好，每只9cm平極至多貼7張紙片,測試平板最 多兩只疊在一起，不得過多，量取抑菌環(huán)用毫米尺。6.5參考菌種的抑菌環(huán)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是:藥物對該菌株的排菌環(huán)直 徑平均值+2標(biāo)準(zhǔn)差:簡明的說:將這個指標(biāo)換算成抑菌環(huán)直徑質(zhì)量 控制允許范圍。實驗室連續(xù) 30次監(jiān)測的結(jié)果允許最多 3次超過質(zhì) 量控制范圍，并且這3次失控不應(yīng)該連續(xù)出現(xiàn)。 如超出圍，成查明誤 差原因并予以糾正。6.6質(zhì)控菌株:大腸埃希氏菌ATCC25922大腸埃希氏菌 ATCC35218用于B內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑);金黃色葡萄球菌ATCC2592：銅綠假單胞菌ATCC27853等。6.7質(zhì)控測定次數(shù):每批新的M-H瓊脂和含藥紙片必須用質(zhì)控菌株 進(jìn)行檢測。每大與臨床標(biāo)本一起測定質(zhì)控菌株以監(jiān)控整個過程，NCCLS規(guī)定只有在符合以下條件時才可減少測定次數(shù)：與常規(guī)標(biāo)本一起連續(xù)測定質(zhì)控菌株 30日。每種藥物與相應(yīng)的每種細(xì)菌的 30個抑菌環(huán)直徑（3個結(jié)果超 出規(guī)定范圍）。達(dá)到以上要求以后，可執(zhí)行每周一次檢測。如發(fā)現(xiàn)有一個不符 合的結(jié)果，應(yīng)立即尋找原因，如果發(fā)現(xiàn)諸如質(zhì)控菌錯誤、 含