FDA沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法

1、沙門(mén)氏菌屬簡(jiǎn)介1880年E. Berth首先發(fā)現(xiàn)傷寒沙門(mén)氏菌，1885年Salmon與Smith又分離出豬霍亂沙門(mén)氏菌，以后取Salmon氏之名為本菌屬之名。沙門(mén)氏菌屬是一群符合腸桿菌科定義并與其血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性、需氧性、無(wú)芽孢桿菌。本菌屬種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)2000多個(gè)血清型，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)血清型近200個(gè)。沙門(mén)氏菌屬生物學(xué)特性形態(tài)特征：革蘭氏陰性，大小為13×0.40.9m的兩端鈍圓的短桿菌，無(wú)芽孢，一般無(wú)莢膜，除雞沙門(mén)氏菌和雛沙門(mén)氏菌以外，都有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)力強(qiáng)。培養(yǎng)特性：沙門(mén)氏菌需氧或兼性厭氧，10-42 都可生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為37，最適pH為6.87.8。營(yíng)

2、養(yǎng)瓊脂平板上：3537培養(yǎng)1824h，其菌落大小一般為23mm，光滑、濕潤(rùn)、無(wú)色、半透明、邊緣整齊。血平板上：中等大小的灰白色菌落。沙門(mén)氏菌屬的抗原菌體抗原（O抗原）表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原鞭毛抗原（H抗原）纖毛抗原FDA BAM沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)流程1、 前增菌：25g樣+225mL乳糖肉湯 （肉制品、肉副產(chǎn)品、動(dòng)物產(chǎn)品），勻質(zhì)2min，室溫放置60 ±5min，混合均勻，測(cè)定調(diào)節(jié)PH6.8 ±0.2，在35下培養(yǎng)24 ± 2h。2、 選擇性增菌：(1) 0.1ml+10mlMM（RV）在，42下培養(yǎng)24h。（水浴培養(yǎng)）(2)1ml+10mlTTB，在43

3、下培養(yǎng)24h（水浴培養(yǎng)）含菌量低在35下培養(yǎng)24h含菌量高3、分離培養(yǎng)：選擇含菌量高的劃線接種，選擇性培養(yǎng)基（BS、XLD、HE）在35下培養(yǎng)2448h（BS）4、生化鑒定：（1）每個(gè)平板挑取至少2個(gè)可疑菌（包括典型和非典型各2個(gè)），接種TSI三糖鐵、LIA賴氨酸鐵高層斜面（LIA高層深4cm），（松蓋以保持有氧條件防止產(chǎn)生過(guò)多H2S），在35下培養(yǎng)24±2h。（2）尿素酶試驗(yàn)：陽(yáng)性：棄去。陰性：衛(wèi)矛醇、 氰化鉀、丙二酸鈉、吲哚試驗(yàn)5、血清學(xué)：血清學(xué)試驗(yàn)沙門(mén)氏菌的分類6、報(bào)告結(jié)果。ISO6579沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)流程1、前增菌： 25g樣+225mLBPW，勻質(zhì)，在37±1下培養(yǎng)

4、18 ± 2h。2、選擇性增菌：（1）0.1ml+10mlRVS，在41.5 ± 1下培養(yǎng)24 ± 3h（水浴培養(yǎng)）。（2）1ml+10mlMKTTn，在37 ± 1下培養(yǎng)24 ± 3h。3、分離培養(yǎng)：劃線接種選擇性培養(yǎng)基（XLD和第二種選擇性培養(yǎng)基，如 BS），在37下培養(yǎng)2448h（BS），每個(gè)平板挑取至少5個(gè)可疑菌進(jìn)行純培養(yǎng)和確認(rèn)試驗(yàn)，在37下培養(yǎng)24±3h。4、生化鑒定：TSI、尿素酶、賴氨酸脫羧酶、-牛乳糖、V-P、 吲哚試驗(yàn)。5、血清學(xué)：血清學(xué)試驗(yàn)沙門(mén)氏菌的分類6、報(bào)告結(jié)果。沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)選擇性分離培養(yǎng)XLD瓊脂：FDA B

5、AM典型菌落：粉色菌落，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物可呈現(xiàn)大的具光澤的黑色中心或幾乎為全部黑色的菌落。非典型菌落：黃色帶或不帶黑色中心。ISO中心黑色、周?chē)捎谥甘緞╊伾母淖兌霈F(xiàn)紅色的輕微透明帶。沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)選擇性分離培養(yǎng)BS瓊脂：FDA BAM典型菌落：產(chǎn)硫化氫菌落黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周?chē)呐囵B(yǎng)基通常開(kāi)始呈褐色，但伴隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而變?yōu)楹谏?，并有暈環(huán)效應(yīng)；非典型菌落：有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色菌落，周?chē)囵B(yǎng)基不變色。沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)選擇性分離培養(yǎng)HE瓊脂：FDA BAM典型菌落：蘭綠色至蘭色，多數(shù)菌株產(chǎn)硫化氫，菌落帶或不帶黑色,中心或幾乎全黑色。 非典型菌落：乳糖陽(yáng)性的菌株為黃色中心黑色或全黑色。沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)生化鑒定TSI：典型反應(yīng)：斜面產(chǎn)堿（K）：紅色；底部產(chǎn)酸（A）：黃色；產(chǎn)H2S：黑色（少數(shù)不產(chǎn)）沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)幾點(diǎn)注意冷凍樣品解凍需在45以下，有自動(dòng)調(diào)溫器自控的水浴鍋內(nèi)不斷攪拌進(jìn)行15min或在2-8，18小時(shí)內(nèi)軟化。為保證檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，必須在選擇性培養(yǎng)基上挑取足夠數(shù)量的菌落進(jìn)行生化和血