微柱凝膠免疫技術(shù)及其在臨床輸血中的應(yīng)用(輸血規(guī)程)

1、第 章 微柱凝膠免疫技術(shù)及其在臨床輸血中的應(yīng)用1990年法國學(xué)者Y.lapierre發(fā)表文章介紹一種檢測紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)的新技術(shù)(new way to detect red cell antigen-antibody reaction)凝膠試驗(Gel test),現(xiàn)稱之為微柱凝膠免疫試驗(Micro column gel immuno-accay,MGIA )。紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的免疫凝集反應(yīng)。MGIA與試管（玻片、紙片）鹽水介質(zhì)血凝試驗一樣簡便、準(zhǔn)確，但卻比試管血凝試驗敏感性高，且易標(biāo)準(zhǔn)化。美國輸血協(xié)會自輸血技術(shù)手冊第12版（1996年）起就已經(jīng)將該技術(shù)列入

2、紅細(xì)胞血型檢測的常規(guī)技術(shù)中。而今，該新技術(shù)正在取代百年的傳統(tǒng)血凝技術(shù)，應(yīng)用在紅細(xì)胞血型血清學(xué)臨床常規(guī)檢驗工作中，MGIA解決了紅細(xì)胞血型血清學(xué)臨床檢測工作中長期存在的兩個問題，即對不完全抗體的檢測和對混合血樣本的檢測。一、 MGIA的原理：1、 人紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)（其本質(zhì)為血凝反應(yīng)）。2、 檢測系統(tǒng)是在微柱中（載體）將反應(yīng)介質(zhì)凝膠（sephdexG-100或50葡聚糖膠）或小玻璃裝入微柱中。3、 凝膠或小玻璃珠的間隙具有分子篩作用。4、 凝集的紅細(xì)胞（結(jié)合的）被留在微柱上面成帶狀或凝集顆粒散布凝膠中間。5、 未凝集的紅細(xì)胞（即未結(jié)合、游離的）通過離心后沉入微柱的底部。二、

3、MGIA試劑分類：微柱凝膠實驗試劑依其凝膠中有無抗體及抗體性質(zhì)分為中性膠、特異性膠和抗人球蛋白膠。1、 中性膠 微柱腔及膠中不含特異性抗體，也不含抗人球蛋白。此膠用于檢測IgM類抗體與紅細(xì)胞抗原的反應(yīng)。如ABO血型反定型。2、 特異性膠 微柱腔中及膠中含有特異性抗體，用于血型抗原檢測。3、 抗人球蛋白膠 微柱腔及膠中含有抗人球蛋白，此膠是應(yīng)用廣泛的一種微柱凝膠卡。用于檢測IgM類完全抗體及IgG類不完全抗體的檢測。三、MGIA的臨床應(yīng)用：（一）ABO血型1、原理：根據(jù)紅細(xì)胞表面有無A或B抗原將血型分為A、B、O、AB四種。（1）ABO、Rh(D)血型正定型試劑卡（該卡主要用于體檢及新生兒血型鑒

4、定）原理：正定型用已知抗A和抗B血清試劑檢測被檢者紅細(xì)胞中有無相應(yīng)抗原。圖一、ABO、Rh（D）血型正定試劑卡反定型：用已知A、B細(xì)胞（抗原）來檢測被檢者血清中有無相應(yīng)抗體。（2）ABO、Rh(D)正反定型試劑卡。（該卡主要用于檢測受檢者與供血者血型鑒定與復(fù)查）。圖二、ABO及Rh(D)正反定型試劑卡A、為什么要強調(diào)在ABO血型鑒定時一定要做正反定型？常規(guī)的ABO定型必須包括正定型（即用抗A、抗B作紅細(xì)胞定型）和反定型（即用A、B細(xì)胞作血清定型）互相驗證，使血型鑒定結(jié)果準(zhǔn)確無誤。僅做正定型可能存在的問題如標(biāo)準(zhǔn)血清效價偏低，室溫放置過久，類B現(xiàn)象，紅細(xì)胞多凝凝或全凝集。某些疾病原因抗原減弱，器官

5、移植患者紅細(xì)胞上抗原不易檢出，易被誤定。但其血清中含有與血型相對的抗體，所以反正型可防止某些A、B亞型漏檢。B、 ABO正反定型結(jié)果不一致的常見原因：（1）人為因素、試劑不標(biāo)準(zhǔn)、失效或污染。操作中加錯樣品或試劑離心速度不足或過度，或報結(jié)果時間倉促、細(xì)胞與血清比例不當(dāng)，結(jié)果誤判等。（2）客觀原因：1，因某些疾病導(dǎo)致抗原減弱，紅細(xì)胞發(fā)生多凝集現(xiàn)象及產(chǎn)生抗原；2，抗體含量低（如嬰兒、老人、低丙球血癥等）體內(nèi)有不規(guī)則抗體、某些藥物干擾等。C、 為什么出生3個月內(nèi)的嬰兒可不做反定型？出生3個月內(nèi)的嬰兒，其血清中所有能檢出的抗體均來自母體，自身未產(chǎn)生抗體，當(dāng)母嬰血型不同時，ABO正反定型常不一致，所以出生

6、3個月內(nèi)的嬰兒ABO定型僅做正定型，即使6個月內(nèi)的嬰兒由于自生抗體較弱亦可不做反定型。（二）Rh（C、D、E、c、e）血型。原理：Rh血型系統(tǒng)主要有五種抗原即C、c、D、E、e抗原，在臨床檢測中一般只要求做D抗原鑒定，凡被檢紅細(xì)胞和抗D血清凝集為Rh(D)陽性，反之為Rh（D）陰性。A、 Rh抗原檢測原則：對受血者一般只測Rh（D）抗原，而對供受者不僅要檢查Rh（D）抗原，并在其為陰性之前提下，必須進(jìn)一步確定是否為Rh弱D型。B、 Rh（D）抗原陰性受血者的輸血原則：供受者雙方ABO血型相同，還要求Rh（D）抗原陰性相同。C、 新生兒溶血病患兒輸血或換血原則，ABO血型同患兒相同，Rh血型同母

7、親相同。D、 Rh弱D型輸血原則，Rh弱D型為供者應(yīng)視為Rh（D）陽性使用。作為受者應(yīng)輸Rh（D）陰性血。E、 Rh弱D型婦女與Rh（D）陽性丈夫生育的嬰兒可能會產(chǎn)生新生兒溶血病。F、 Rh弱D型受者血小板輸注原則：盡管血小板表面無Rh抗原，但制劑中仍含有一定量的紅細(xì)胞（可使受血者致敏）故Rh（D）陰性生育期婦女（含女童）應(yīng)輸Rh（D）陰性血小板。（三）不規(guī)則抗體篩查及鑒定：不規(guī)則抗體也稱為不完全抗體額外抗體意外抗體等，是除ABO系統(tǒng)以外的抗體如Rh系，MN系，P系，Kidd系Duffy系等等的抗體，是引起交叉配血不合的重要原因，也是引起輸血反應(yīng)，新生兒溶血病的重要原因之一，目前不規(guī)則抗體篩查

8、已列為輸血前常規(guī)檢測，且廣泛應(yīng)用于輸血反應(yīng)診斷，預(yù)防母嬰血型不配合所致新生兒溶血病診斷等方面。 鑒定方法是用一組篩選試劑細(xì)胞(篩選譜細(xì)胞)該組試劑細(xì)胞應(yīng)包括大部分有臨床意義的抗原。至少有以下常見的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb、抗體篩查陽性則提示可能被檢者體內(nèi)存在有臨床意義的不規(guī)則抗體，應(yīng)再用一組鑒定試劑細(xì)胞（鑒定譜細(xì)胞）進(jìn)一步鑒定抗體的特異性，以便事先選擇缺乏與之相對應(yīng)抗原的供者。1、不規(guī)則抗體（主要為IgG類抗體）反應(yīng)的基本原理。由于紅細(xì)胞表面含有唾液酸而帶負(fù)電荷，互相之間因靜電斥力保持一定的距離（大于24nm）1個Ig

9、G分子（跨度僅約14 nm）不能同時連接2個紅細(xì)胞，因此不能直接造成紅細(xì)胞的凝集。必須應(yīng)用特定的方法使被IgG抗體致敏的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。這些特定方法及其原理分別是：（1） 酶介質(zhì)（通常用木瓜酶菠蘿酶）是通過降低紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷的原理，縮短細(xì)胞間的最小距離（其缺點是該技術(shù)的復(fù)雜性以及在制備試劑條件和判讀結(jié)果時所需要的技巧）。（2） 膠體介質(zhì)：如人血白蛋白，AB型人血清（該實驗亦不用）。（3） Polybrene (聚凝膠)介質(zhì)是利用Polybrene中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷的原理（缺點是該法可受患者體內(nèi)冷凝集素及血漿蛋白的影響，靈敏度過度，易出現(xiàn)假陽性。（4）抗人球蛋白試驗（Coombs）通過在

10、紅細(xì)胞表面的致敏的IgG分子之間搭橋，形成凝集（Coombs）試驗是最經(jīng)典的最準(zhǔn)確的不規(guī)則抗體檢測方法。為理論上的金標(biāo)準(zhǔn)。但為什么發(fā)現(xiàn)至今半個多世紀(jì)末在臨床常規(guī)應(yīng)用。其主要原因是耗時長，需要反復(fù)洗滌紅細(xì)胞。實驗過程過于煩瑣且需用陽性抗體致敏的紅細(xì)胞做陽性對照，易出現(xiàn)假陰性，不利于普及和推廣，特別是在急診情況下易延誤治療。 而今，應(yīng)用MGIA則完全克服以上方法之缺點，使理論上的金標(biāo)準(zhǔn)成為現(xiàn)實。2、試劑(1).抗人球蛋白微柱凝膠卡(MGIACoombs卡)(2).篩選譜細(xì)胞(一般為3組)(3).鑒定譜細(xì)胞(一般為11組)圖四:不規(guī)則抗體篩檢卡不規(guī)則抗體篩檢用于不規(guī)則抗體篩檢和鑒定 可以檢出更多的臨

11、床有意義抗體,保證臨床輸血安全,避免溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。A、 不規(guī)則抗體篩檢試驗在臨床輸血中是很有價值的,但仍有其局限性,其原因有二,一是低頻抗原的抗體可能被忽略,二是以往免疫的抗體已降到難以檢出的水平.因此抗體篩檢試驗不可能檢出有臨床意義的全部抗體.B、 不規(guī)則抗體篩檢.必須對有輸血史,妊娠史或短期內(nèi)需要接受多次輸血者及交叉配血不合者進(jìn)行篩檢.C、 不規(guī)則抗體篩檢的重要性,有利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體并可在配血前鑒定此抗體,以獲得充足的時間來選擇缺乏相應(yīng)抗原的相配合的供者,以避免因?qū)ふ也坏较嗪系难炊诱`受血者的治療.D、 不規(guī)則抗體篩查的技術(shù)要求1) 盡可能多的檢測出有臨床意義

12、的抗體。2）盡可能少的檢測出無臨床意義的抗體。3）盡可能快的完成抗體檢測。（四）、 交叉配血試驗 1.原理：交叉配血是指檢測供血者的血液或血制品與受血者的血液在免疫血液方面“相溶性”避免受血者發(fā)生急性或遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，以確保受血者輸血安全。交叉配血分“主側(cè)”交叉配血，即受者血清與供者紅細(xì)胞的相容試驗，“次側(cè)”交叉配血，即受者紅細(xì)胞與供者血清的相容試驗，交叉配血使用的檢測方法必須是能檢測IgM和IgG型抗體的方法。 2試劑：抗人球蛋白微柱凝膠（MGIA-Coombs）卡圖五，抗人球蛋白交叉配血卡抗人球蛋白交叉配血用于交叉配血可同時檢出IgM和IgG類抗體，保證臨床輸血安全，避免輸血反應(yīng)的發(fā)

13、生。（五）、抗人球蛋白(Coombs)試驗1.原理:不完全抗體與相應(yīng)紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中結(jié)合后不表現(xiàn)凝集反應(yīng),這種結(jié)合了不完全抗體的紅細(xì)胞稱為致敏紅細(xì)胞,由于不完全抗體分子量小,分子距離短,不能克服紅細(xì)胞彼此的排斥力.所以紅細(xì)胞不能靠攏而顯凝集,但人球蛋白本身又是很好的抗原,可用來免疫動物使之產(chǎn)生抗人球蛋白,將抗人球蛋白試劑加入已致敏紅細(xì)胞鹽水懸液中,由于人球蛋白與抗人球蛋白的特異性反應(yīng)(俗稱搭橋)可以與紅細(xì)胞上的不完全抗體產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng).而使紅細(xì)胞顯示肉眼可見凝集亦證實不完全抗體的存在。2. 試劑:抗人球蛋白微柱凝膠(MGIA-Coombs)卡本試驗分直接和間接二種,(1).直接抗人球蛋白試

14、驗(DAT),用于檢查受檢者紅細(xì)胞上是否已結(jié)合了不完全抗體,主要為IgG和補體C3,在臨床上應(yīng)用于胎母血型不合的新生兒溶血病(HDN),免疫溶血性輸血反應(yīng)(LHTR),自身免疫溶血性貧血(AIHA),藥物導(dǎo)致的免疫溶血性貧血等.(2).間接抗人球蛋白試驗(IAT)紅細(xì)胞在體外與不完全抗體結(jié)合后,在應(yīng)用抗人球蛋白進(jìn)行檢測的試驗(證實被檢者體內(nèi)存在游離不完全抗體),在臨床上應(yīng)用于紅細(xì)胞血型定型,不完全抗體篩查及鑒定,抗體效價檢測,紅細(xì)胞放散試驗中對抗體的檢測和鑒定,相溶性配血試驗等。Coombs卡（六）、新生兒溶血病（HDN）試驗診斷新生兒溶血病是一種母嬰血型不合而引起的免疫性溶血病，在我國常見為

15、ABO HDN，其次為Rh HDN，MN等血型系統(tǒng)引起的HDN也有報導(dǎo)，胎兒或新生兒的紅細(xì)胞被來自母親的IgG抗體所包被（致敏）并使胎兒或新生兒單核巨細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)受到免疫性破壞。1.HDN發(fā)病機(jī)理，胎兒的血型基因一半來自母親，另一半來自父親，來自父親的基因恰好是母親所缺乏的，胎兒的細(xì)胞就有可能刺激母親產(chǎn)生抗體，這種抗體的性質(zhì)為免疫性抗體，并能通過胎盤，一旦這種抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，就可能與胎兒紅細(xì)胞結(jié)合并破壞紅細(xì)胞而發(fā)生溶血現(xiàn)象。 2.臨床癥狀：HDN有水腫，黃疸，流產(chǎn)，死胎，貧血和肝脾腫大，黃疸深者可能并發(fā)核黃疸，病情取決于母親抗體量，抗體與細(xì)胞結(jié)合的程度，胎兒代償性造血能力及免疫功能

16、狀況等諸多因素。 3 .試劑：抗人球蛋白微柱凝膠卡（MGIA-Coombs）HDN試驗操作程序 ABO系HDN與非ABO系（ABO系之外）HDN都須做三項試驗：(1).直接抗人球蛋白試驗。用于確定嬰兒紅細(xì)胞是否被母親IgG抗體包被（致敏）ABO系HDN直接抗人球蛋白試驗常常較弱或陰性，因此，直抗試驗結(jié)果僅起參考作用，而ABO系以外的HDN直抗試驗一般為陽性對臨床診斷起決定性作用。(2).游離IgG抗體測定（間接Cooms試驗）用間接抗人球蛋白試驗檢測嬰兒血清中是否有游離的IgG抗體，在ABO系HDN中，A型新生兒血清中可有少量抗A和較多的抗B，B型新生兒血清中可有少量的抗B和較多的抗A?！癘”

17、細(xì)胞是用來檢測ABO系統(tǒng)以外的IgG抗體，總之，A型嬰兒血清中檢出抗A（IgG），B型嬰兒血清中檢出抗B（IgG）或檢出ABO以外的IgG抗體，都是HDN的重要診斷依據(jù)。(3).放散試驗。ABO系HDN用加熱放散法，其它血型系統(tǒng)的HDN用乙醚放散法，A型患兒紅細(xì)胞上放散出抗A，B型患兒紅細(xì)胞上放散出抗B，或放散出ABO以外的抗體都是陽性指征。ABO系HDN(1).采集35ml新生兒和母親抗凝血，分離血漿備用。(2).用N.S三洗紅細(xì)胞，末次壓積后吸凈鹽水。(3).取小量紅細(xì)胞做ABO、Rh定型。(4).取MGIA-Coombs卡一張（8孔），加患兒35%紅細(xì)胞懸液10 ul 至第一孔，立即離心

18、10分鐘（直抗試驗），（24孔）做游離試驗，分別編A .B. O，（57孔）做放散試驗，分別編AC、BC、OC，24孔各加患兒血漿（或母親血漿）40ul，57孔加患兒放散液40ul（附患兒放散液提取法）。(用以上N.S三洗壓積紅細(xì)胞加等量或1/2量N.S，置56水浴10分鐘,其間輕輕搖動二次,離心,上清即為放散液)。(5)分別在2、4孔加入10 ul 3-5%A紅細(xì)胞懸液，3、6孔加入3-5%B紅細(xì)胞懸液，5、7孔加入3-5%O紅細(xì)胞懸液，8孔加入患兒血漿40ul, 3-5%患兒紅細(xì)胞懸液10ul(做自身對照)。(6)37孵育15，離心10,觀察并記錄結(jié)果。 AB0系之外HDN(1) .標(biāo)本采

19、集,制備壓積三洗紅細(xì)胞及其懸液,定血型,直抗試驗同ABOHDN。(2) .當(dāng)直抗陽性強度達(dá)到或超過2+或用篩選譜細(xì)胞檢測患兒血清中有AB0系以外的抗體時進(jìn)行以下試驗。(3) .取患兒三洗紅細(xì)胞進(jìn)行乙醚放散,取一體積三洗紅細(xì)胞加一體積AB血漿(或N.S),2體積分析純乙醚,顛倒搖勻10分鐘,然后13001500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘 ,離心后分三層,上層為乙醚,中層為紅細(xì)胞基質(zhì),下層是具有抗體放散液,為淺深紅色,用干凈的吸管吸取放散液,若有混濁,可再離心一次.將放散液置于37水浴中30分鐘,以除盡乙醚，離心上清即為放散液,做抗體鑒定。(4) .用母親血漿和新生兒放散液作抗體鑒定,取MGIA-Coom

20、bs卡,分別加母親血漿40ul,患兒放散液40ul各加一套篩選譜細(xì)胞至卡內(nèi)各孔， 37孵育15分鐘,離心10分鐘,觀察并分析結(jié)果，判斷母親血漿中和新生兒放散液中存在抗體(如夫婦或母嬰的ABO血型相合,則將母親血漿直接與其嬰兒紅細(xì)胞作抗體篩選試驗,如為陽性,就需用一組鑒定譜細(xì)胞確定抗體的特異性,抗體的特異性確定后,檢查母親紅細(xì)胞上是否缺乏與其相對應(yīng)的抗原.以驗證抗體的可靠性,并測定抗體的效價。 HDN陽性實例及加樣模擬圖 附表：新生兒溶血病血清學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)直抗試驗游離試驗釋放試驗結(jié) 論OOO不能證實為由血型免疫抗體引起的新生兒溶血病+OO可疑為新生兒溶血病O+O可疑為新生兒溶血病OO+可以證實為A

21、BO新生兒溶血病+O+可以證實為ABO新生兒溶血病+O可以證實為ABO新生兒溶血病+可以證實為ABO新生兒溶血病O+可以證實為ABO新生兒溶血病血型(IgG)抗體引起的HDN有哪些特點:1. ABO HDN在新生兒血型不合溶血病中發(fā)病率最高,主要發(fā)生在母親是O型,嬰兒是A型或B型的嬰兒中。2. ABOHDN常發(fā)生在第一胎,而ABO之外HDN則多發(fā)生在第二胎以后的嬰兒。3. ABOHDN的癥狀輕重差別很大,ABOHDN一般發(fā)病較輕,輕癥僅出現(xiàn)輕度黃疸,易被視為生理性黃疸而漏檢,有的僅在晚期出現(xiàn)貧血,重癥可發(fā)生死胎,重度黃疸或重度貧血,但總的癥狀和體癥與RhHDN相比,不論從黃疸程度,貧血輕重,肝

22、脾大小和核黃疸發(fā)生率都比較輕.此外,ABOHDN的輕重與胎次的關(guān)系不大,并不因胎次增加而加重癥狀，而且不同胎次中癥狀輕重可能相隔出現(xiàn)。4. 黃疸方面 ABOHDN比RhHDN輕,出現(xiàn)時間也較晚,多數(shù)患兒出后第2天或3天才逐漸出現(xiàn)黃疸.而RhHDN在出生24小時可能出現(xiàn)黃疸.5. ABOHDN時有不同程度的貧血,周圍血象中有核紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞增多,紅細(xì)胞呈多染性,但程度比RhHDN輕。6. 總膽紅素增加,以未結(jié)合膽紅素為主。7. 抗體檢查時,由于胎兒和新生兒紅細(xì)胞密度小,直接抗人球蛋白試驗常為弱陽性或陰性,如將被檢血加熱,使紅細(xì)胞上的抗體釋放出來再測抗體則陽性率可以增高,另外ABOHDN時血清

23、中有游離抗體,因此間接抗人球蛋白試驗常呈陽性,但游離抗體只在出生后幾天存在,之后會逐漸消失,因些晚期診斷意義不大.8. 治療分三類,換血,光療和藥物治療,凡黃疸深,血清總膽紅素在342427umol/L以上者都需換血,總膽紅素在以上濃度以下者以光療為主。9. 預(yù)后,ABOHDN中有重型病例發(fā)生死胎和新生兒死亡,A型和B型的發(fā)病率相仿.但總的死胎發(fā)生率和病死率比RhHDN低得多。（七）、孕婦產(chǎn)前抗體(IgG)效價監(jiān)測 由于ABOHDN的發(fā)病程度與母親(孕婦)體內(nèi)IgG抗A(B)的效價有一定相關(guān)性,因此可定期檢測孕婦體內(nèi)IgG抗A(B)的效價來判斷胎兒的受害情況,如果母體內(nèi)IgG的效價隨著孕期的增

24、加而增高,提示胎兒受害的可能性增大,產(chǎn)前監(jiān)測孕婦血清IgG抗體水平并及早采取相應(yīng)的防治措施對優(yōu)生優(yōu)育具有重要價值。試劑 微柱凝膠抗人球蛋白卡(MGIA-Coombs)卡1.配制中和血清200ul孕婦血清+200ul二巰基乙醇(2-Me應(yīng)用液)(KH2PO4 1.73g，Na2HPO4.12H2O19.35g，NaCl 8g加蒸鎦水到1000ml)，稀釋至100ml(或加生理鹽水（N.S）至100ml)2.將中和血清放37水浴30分鐘(或1小時)3.將丈夫,孕婦(自制A、B、O（3人）紅細(xì)胞)配成35%紅細(xì)胞懸液，并分別測定ABO及Rh血型。4.孕婦IgG抗體滴度檢測排6支小管(1).第一管：2

25、0ul中和血清+1280ul PBS(或N.S)(2).第2-6管分別各加入200ul PBS(或N.S)(3).從第1管吸出200ul加入第二管,混勻,再從第二管吸出200ul加入第3管,依次倍比稀釋至第6管(效價分別為1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 1:5096)(4).于MGIA-Coombs卡中加入35%丈夫紅細(xì)胞懸液或與丈夫ABO同型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液10ul，再分別加40ul上述16管經(jīng)中和并稀釋后的血清放37水浴1015分鐘。(5).專用離心機(jī)離心10分鐘。(6).結(jié)果以出現(xiàn)凝集1+的前一管的滴度報告。5.孕婦不規(guī)則抗體篩檢(1).取MGIA-Coom

26、bs卡(2).于一孔內(nèi)加入35%自制“”型紅細(xì)胞懸10ul，再加入40ul孕婦血清(3).37水浴10分鐘(4).專用離心機(jī)離心10分鐘(5).判斷結(jié)果如為陽性則應(yīng)用譜細(xì)胞作抗體鑒定，以確定抗體的特異性，注：1.父親為型測抗（IgG），父親為型測抗B（IgG）父親為AB型測抗A(IgG) 、抗B（IgG） 2.“O”細(xì)胞篩檢如為陽性則說明孕婦體內(nèi)可能含有ABO以外的不規(guī)則抗體3.采用MGIA法比試管Coombs試驗靈敏度高，因此建議 正常值應(yīng)為IgG抗A（B）效價1：128而不能定為1：644.A、B、O細(xì)胞的配制：取正常健康A(chǔ)、B、O型各3人紅細(xì)胞用N.S三洗(需重新復(fù)核血型無誤后)配成35

27、%紅細(xì)胞懸液配用。四、MGIA可能出現(xiàn)的問題：1.假陽性反應(yīng)：（1）未完全去除纖維蛋白原的血清標(biāo)本，在凝膠中形成纖維蛋白,阻礙紅細(xì)胞沉降而浮于膠中或表面。（2）抗凝劑不足或不含抗凝劑的血清標(biāo)本如臨床上常用血袋上的接管中的標(biāo)本,其中可能無抗凝劑或很少抗凝劑,而離心后取出血液中含纖維蛋白原,在MGIA反定型或次側(cè)配血中出現(xiàn)假陽性。(3) 被檢標(biāo)本染菌也使紅細(xì)胞浮于膠中或表面。(4) 被檢標(biāo)本紅細(xì)胞破碎常常是因為該紅細(xì)胞陳舊，此時即使應(yīng)是陰性結(jié)果，但破碎的紅細(xì)胞膜浮于膠中或膠面呈弱陽性。2假陰性反應(yīng)(1).抗原或抗體過少、過弱。(2).抗原,抗體比例不合適,如前帶或后帶現(xiàn)象。(3).離心力過大,使弱

28、陽性成為陰性結(jié)果。(4).末加入抗原或抗體等人為實驗操作錯誤。3溶血反應(yīng)(1).可能是實驗操作者錯誤或?qū)嶒灅?biāo)本有問題。發(fā)生溶血反應(yīng)不一定就是抗原抗體特異反應(yīng)所致。(2).可能是因為紅細(xì)胞抗原抗體溶血反應(yīng)。(3).溶血的臨床意義一定不能把溶血標(biāo)本認(rèn)定為陰性反應(yīng)。要記錄為溶血反應(yīng).(1).發(fā)生溶血標(biāo)本所相應(yīng)的血液中可能存在陽性的紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)可能是受供者血型不同所致，此時抗體應(yīng)明確為有臨床意義的抗體。(2).也可能在工作中發(fā)生錯誤如采血針太細(xì)，實驗離心力過大，致使血樣溶血，要找出溶血的原因。4混合反應(yīng)混合反應(yīng)一般是指反應(yīng)體系中同時有抗原陽性和陰性紅細(xì)胞。反應(yīng)格局必須為陽性和陰性結(jié)果同時存在的情

29、況。(1).不同抗原紅細(xì)胞混合標(biāo)本，如標(biāo)本中有A型血也有O型血,對此標(biāo)本用抗A檢測出現(xiàn)的反應(yīng)格局。(2).多凝集紅細(xì)胞（如T/Tn），對此標(biāo)本用人血清抗體試劑抗A和（或）抗B檢測時應(yīng)出現(xiàn)的結(jié)果。(3).紅細(xì)胞血型亞型紅細(xì)胞（如A3）對此標(biāo)本血清抗A、B檢測的反應(yīng)格局。(4).應(yīng)用指示紅細(xì)胞的MGIA間接試驗陽性結(jié)果。5混合反應(yīng)意義及注意事項：(1).微柱凝膠免疫檢測技術(shù)的主要功績一是能夠?qū)旌蠘?biāo)本的不同抗原性紅細(xì)胞進(jìn)行分離與鑒定，它是一個簡便，易行，準(zhǔn)確的分析混合標(biāo)本的血型血清學(xué)的免疫檢測方法.(2).對出現(xiàn)混合反應(yīng)的標(biāo)本,一定要認(rèn)真分析其原因,千萬不可在原因未查明之前,輕易判斷血型或血型相容性.(3).在排除標(biāo)本污染細(xì)菌,血液纖維蛋白析出以及不是應(yīng)用指示紅細(xì)胞的MGAIA間接血凝試驗等情況后,可判斷出現(xiàn)混合反應(yīng)格局的標(biāo)本中可能含有兩種或以上特異性抗