體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則(化學(xué)發(fā)光報批稿)

1、體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則發(fā)光免疫分析試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報批稿）2009-05-15 09:00 發(fā)光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應(yīng)等生物學(xué)原理，利用發(fā)光信號的強弱來判斷樣本中相應(yīng)抗原或抗體是否存在來進行檢測的一類試劑。主要包括化學(xué)發(fā)光（酶促、非酶促），電化學(xué)發(fā)光和時間分辨熒光等法。 該指導(dǎo)原則主要適用于利用發(fā)光分析技術(shù)對蛋白質(zhì)等被測物質(zhì)進行檢測的第三類試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制，第二類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行，國家食品藥品監(jiān)督管理部門將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時組織修訂。 一、基本原則 （一）研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當制定相應(yīng)的質(zhì)量標準，并符

2、合有關(guān)法規(guī)的要求。 （二）診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準。 （三）診斷試劑的研制應(yīng)當按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 （四）研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。 （五）試劑生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目

3、標：保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可控，使用有效。 二、原材料質(zhì)量控制 （一）主要生物原料 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標反應(yīng)板、標記相關(guān)酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準品（標準品）等。一般按工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質(zhì)量標準。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進行變更申請。 主要生物原料的常規(guī)檢

4、驗項目一般包括： 1外觀 肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標準。 2純度和分子量 主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為5g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標準，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。 3蛋白濃度 蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進行

5、檢測。 4效價 效價的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進行。效價應(yīng)達到規(guī)定的要求。 5功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。 （二）生物輔料 生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料、主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標準應(yīng)符合2000年版的中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準規(guī)定的標準要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 建議作以下檢驗： 1. 牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物 無菌試驗：將血清直接37度放置

6、7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。 總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量不小于32mg/ml。 球蛋白含量：取待測血清1ml，采用飽和硫酸銨法進行沉淀，沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法測定，蛋白含量應(yīng)2mg/ml。 2. 牛血清白蛋白： 外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在18-26時，溶解時間應(yīng)不大于15分鐘。1%牛血清白蛋白水溶液的pH值應(yīng)為6.5?7.1。 總蛋白含量：用雙縮脲方測定，質(zhì)量標準為95。 總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為95%。 B

7、SA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標準為90%。 3. 酪蛋白： 酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。 4標記用酶 應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標準中明示所使用的標記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標準進行檢驗，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于3.0。 對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進行測定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。 （三）化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標準，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液pH

8、值、重金屬檢測、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 1無機類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。 2有機類：主要包括有吐溫20、三羥基氨基甲烷等。 3. 特殊化學(xué)原料：Eu-DTTA，魯米諾等。 Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求Eu-DTTA各功能團符合分子結(jié)構(gòu)，純度在96%以上。 （四）其他原輔料 1微孔板條 外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。 材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加200?L增強液，用發(fā)光免疫分析儀檢測其

9、熒光值，平均本底熒光值1500。 吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值，CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標準，一般批內(nèi)CV5,批間CV10。 2其他 粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量控制標準。 三、試劑盒各組分的生產(chǎn) 發(fā)光免疫分析試劑主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。 (一固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以

10、標準96孔微孔反應(yīng)板為例進行描述） 1包被板的準備 準備經(jīng)檢驗合格的包被板，記錄批號、數(shù)目、狀態(tài)標識。 質(zhì)控項目：尺寸，外觀，包裝。 2包被液的配制 配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)使用。 質(zhì)控項目：包被緩沖液配方，pH值，包被物成份。 3包被板的包被 包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。 質(zhì)控項目：包被體積，溫度，時間，過程監(jiān)控。 4洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板） 按配方配制洗板工作液。 質(zhì)控項目：洗板工作液配方，pH值。 5封閉液的配制 按配方配制封閉液。 質(zhì)控項目：封閉液配方，pH

11、值。 6洗板和封閉 包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。 質(zhì)控項目：封閉體積，溫度，時間，過程監(jiān)控。 質(zhì)檢項目：封閉前檢驗包被均一性。 7抽干 封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。 質(zhì)控項目：過程監(jiān)控。 8干燥 反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進行干燥。 質(zhì)控項目：溫度，濕度，時間，過程監(jiān)控等。 9密封包裝 將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。 質(zhì)控項目：密封性能，標示及效期等。 10反應(yīng)板（半成品）檢驗 對裝袋密封后的反應(yīng)板進行抽樣檢驗，外觀、板內(nèi)變異、板間變異。 (二滴配過程 1酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實際情況

12、，該步驟可不進行） 采用常規(guī)過碘酸鈉乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶標記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當?shù)谋Ｗo劑保存于低溫。 質(zhì)控項目：標記方法，過程控制。 2酶結(jié)合物的鑒定 (1 功能性實驗 將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標準。 (2 穩(wěn)定性 將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋，進行2-8，及熱穩(wěn)定性實驗，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標準。 3酶結(jié)合物稀釋液 按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在2-8保存，并于規(guī)定時間內(nèi)使用。 質(zhì)控項目：酶結(jié)合物稀釋液配方，pH值。 4酶結(jié)合物工作濃度的滴配 取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的

13、濃度，用已制備好的反應(yīng)板進行滴配。測定系列標準品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達到最優(yōu)的酶結(jié)合物工作濃度。 5酶結(jié)合物工作液配制 將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。 質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，用配套的反應(yīng)板進行檢驗，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準品線性檢測。 6酶結(jié)合物工作液的分裝 按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。 質(zhì)控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。 7酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗 對分裝后的酶結(jié)合物工作液進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、靈敏度、校準品劑量-反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測定值。 (三 校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品的制備 1稀釋液 按稀釋液

14、的配方配制，存放在2?8或-20保存，并于有效期內(nèi)使用。 質(zhì)控項目：稀釋液配方，pH值。 2校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品的配制 校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品的配制應(yīng)具有量值溯源性，可參照國家標準品、WHO標準品或其他級別的標準物質(zhì)進行配制。 質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，準確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。 3校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品的分裝 按工藝要求分裝校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品。 質(zhì)控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量。 4校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品（半成品）檢驗 對分裝后的校準品、陰/陽性對照或質(zhì)控品進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、準確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品

15、）、質(zhì)控品測定值。 (四 化學(xué)發(fā)光底物的制備 1底物緩沖液 按底物緩沖液的配方配制，存放在2-8保存，并于有效期內(nèi)使用。 質(zhì)控項目：底物緩沖液配方，pH值。 2化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制 分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑 質(zhì)控項目：氧化劑和發(fā)光劑配方。 質(zhì)檢項目：分裝前檢驗，本底、發(fā)光強度。 3化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝 按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）。 質(zhì)控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。 4化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗 對分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強度。 （五

16、）銪標記物的制備 針對不同的標記生物原料，確定不同的標記制備工藝，包括銪-DTTA與標記生物原料的比例，標記溫度和標記時間、標記得率的計算標準等。在實際操作過程中要求嚴格按照SOP進行操作 （六）凍干 各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。 （七）分裝、燈檢和貼簽 分裝量用減重稱量法進行測量，把質(zhì)量換算成體積后進行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。 （八）包裝 根據(jù)試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進行包裝。包裝時應(yīng)嚴格檢查品名、批號、裝量，認真核對各物料數(shù)量

17、，并在關(guān)盒前進行復(fù)核。 四、質(zhì)量控制 （一）半成品質(zhì)量控制 1半成品抽樣 檢驗人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號標記、待檢。 2質(zhì)控品的要求 用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陰/陽性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性，檢測范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標，如具有國家標準品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標準品（參考品）或經(jīng)國家標準品（參考品）標化的企業(yè)參考品進行檢驗。如無國家標準品（參考品），可采用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 3半成品檢驗 根據(jù)各個試劑盒的企業(yè)標準或者制檢規(guī)程進行半成品的檢驗，檢驗指標一般包括準確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性等，均應(yīng)達到相應(yīng)的質(zhì)量標準。 企業(yè)應(yīng)對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8定期作穩(wěn)定性考核，同時作37熱穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標準。 （二）成品質(zhì)量控制 1成品抽樣 產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實際包裝量、抽樣申請單