膀胱癌的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)、微血管計(jì)數(shù)及其臨床意義

1、    膀胱癌的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)、 微血管計(jì)數(shù)及其臨床意義        【摘要】目的尋求與膀胱移行細(xì)胞癌預(yù)后相關(guān)的新診斷方法。方法以SABC免疫組化及親和組化法研究83例膀胱移行細(xì)胞癌的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)、微血管計(jì)數(shù)及其與病理分級(jí)、預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果VEGF表達(dá)強(qiáng)度、微血管計(jì)數(shù)在與級(jí)癌間、在有復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及5年死亡組與無復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移組間有極顯著性差異(P0.01)。VEGF表達(dá)、微血管計(jì)數(shù)在級(jí)癌組、在有復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及5年死亡組有相關(guān)性。結(jié)論VEG

2、F是血管形成的重要因子，VEGF高表達(dá)、微血管計(jì)數(shù)高是輔助預(yù)測(cè)膀胱癌患者預(yù)后不佳的新指標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】膀胱腫瘤癌免疫組化新血管形成 Expression of VEGF and microvessel counts in bladder cancer and the clinical implication Zhao Guofan*, Sun Rui, Liu Wuying, et al. Department of Pathology, Tianjin Medical University, Tianjin 300203【Abstract】 Objective To investigate a

3、 new diagnostic method for the prognosis of bladder transitional cell cancer. Method Using immunohistochemistry and lectin binding histochemical methods (SABC), the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and tumor angiogenesis were studied on archival specimens of 83 cases of human

4、bladder transitional cell carcinoma and 6 cases of normal bladder mucosa, and their relation to the pathological grading and prognosis was analyzed. Result There was a significant difference in the intensity of VEGF staining or microvessel counts between grade and grade carcinoma, or metastatic, rec

5、urrent, 5-year death group and the group without metastasis and recurrence (P0.01). The expression of VEGF was correlated with microvessel counts in grad carcinoma or in cases of metastasis, recurrence, 5-year death (P0.05). Conclusion VEGF is an important angiogenic factor, and high expression of V

6、EGF and microvessel counts may aid in predicting at risk for metastasis, recurrence and 5-year death.【Key words】 Bladder neoplasms Carcinoma Immunohistochemistry Neovascularization我們通過觀測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)，并以荊豆凝集素(UEA-1/Bio)為標(biāo)記物計(jì)數(shù)腫瘤組織中的微血管，以探討其與BTCC分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系。材料和方法1.標(biāo)本選取天津醫(yī)大三院、天津市泌尿外科研究所、

7、天津天和醫(yī)院的BTCC組織蠟塊114例，去除材料不全者余83例供研究用。其中男62例、女21例，年齡2880歲，平均54歲。正常膀胱移行上皮6例，取自非膀胱癌患者。組織皆為福爾馬林固定，石蠟包埋，切片厚45m。2.試劑兔多抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、生物素化荊豆凝集素UEA-1均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司，分別系美國(guó)Santa Cruz及ZYMED產(chǎn)品。采用新一代SABC法及親和組化法。一抗的工作濃度分別為150與1200。陽性對(duì)照：為已知的腎癌陽性切片，陰性對(duì)照：用TBS代替一抗。3.觀測(cè)(1)BTCC的HE切片按WHO分級(jí)法分為：級(jí)21例，級(jí)35例，級(jí)27例。(2)VEGF表達(dá)的

8、評(píng)估：以腫瘤細(xì)胞及其附近的血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿出現(xiàn)黃色的為性表達(dá)，依其染色呈不著色黃深棕黃，其強(qiáng)度依次記分為0-5-10。(3)微血管計(jì)數(shù)法：UEA-1將小靜脈及微血管的內(nèi)皮細(xì)胞染成黃色或棕黃色，40×光鏡下選微血管分布熱點(diǎn)(hot spot)，再在200×(0.739mm+2)光鏡下計(jì)數(shù)微血管，每張切片計(jì)數(shù)一個(gè)視野。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：t檢驗(yàn)，卡方檢驗(yàn)及相關(guān)系數(shù)的統(tǒng)計(jì)意義檢驗(yàn)。結(jié)果1.VEGF表達(dá)及微血管計(jì)數(shù)(MC)與BTCC病理分級(jí)及不同預(yù)后組的關(guān)系見表1。正常移行上皮不表達(dá)或輕表達(dá)VEGF，正常移行上皮內(nèi)MC為0。表1組別例數(shù)VEGF表達(dá)強(qiáng)度微血管計(jì)數(shù)*214.86

9、7;2.1751.67±31.56356.41±2.3753.91±28.66277.44±1.9792.56±33.29N1*357.69±1.6297.63±23.18N2375.14±2.5339.81±17.65N3197.53±1.78101.79±22.00N4167.50±1.7992.68±29.36     注：*、為BTCC病理分級(jí)的三個(gè)級(jí)別*N1：有轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)及5年死亡組， N2：無轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)組N3：5年內(nèi)

10、死亡組， N4：5年內(nèi)有轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)而依然存活組2.BTCC患者在有隨訪結(jié)果的72例中發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及5年死亡的百分率與VEGF染色強(qiáng)度記分及MC的關(guān)系：VEGF表達(dá)記分為26，預(yù)后不佳發(fā)生率為32.4%(11/34)；710時(shí)，預(yù)后不佳發(fā)生率為63.2(24/38)。兩者相比有非常顯著性差異(P0.01)。微血管計(jì)數(shù)小于100時(shí)，預(yù)后不佳發(fā)生率為35.7%(20/56)；計(jì)數(shù)大于100時(shí)，預(yù)后不佳發(fā)生率為93.8(15/16)；兩者相比有非常顯著性差異(P0.01)。3.VEGF表達(dá)強(qiáng)度與微血管密度的關(guān)系級(jí)癌組及N1組的VEGF表達(dá)與微血管密度有相關(guān)性(r=0.354、P0.05及r=0.36

11、6、P0.05)。N2組無相關(guān)性(r=0.314、P0.05)。其余組標(biāo)本過小不宜比較。研究中發(fā)現(xiàn)VEGF表達(dá)記分在7以上或血管密度每200×視野高于100個(gè)，其不佳預(yù)后的發(fā)病率顯著高于VEGF在7以下，血管計(jì)數(shù)在100/×200(63.16%或93.75% P0.01)。討論我們觀察到BTCC腫瘤細(xì)胞幾乎皆表達(dá)VEGF，只是強(qiáng)度不同，與、與級(jí)癌的VEGF表達(dá)未見顯著性差異，而級(jí)癌的VEGF表達(dá)強(qiáng)度顯著大于級(jí)癌。研究中發(fā)現(xiàn)由于生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞VEGF過表達(dá)，級(jí)及有侵襲性的級(jí)癌中這種細(xì)胞多，而級(jí)癌中少，故導(dǎo)致了上述結(jié)果。有轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及5年內(nèi)死亡組的VEGF表達(dá)強(qiáng)度顯著高于無轉(zhuǎn)移

12、、復(fù)發(fā)組(P0.01)，5年死亡組的VEGF表達(dá)強(qiáng)度與伴有轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的5年存活組無顯著性差異(P0.05)，揭示VEGF表達(dá)可輔助估價(jià)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)而不宜直接預(yù)測(cè)5年生存與否。VEGF表達(dá)強(qiáng)度在7以上，發(fā)生轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)甚至死亡的百分率顯著高于7以下組(P0.01)，進(jìn)一步證實(shí)了VEGF表達(dá)對(duì)估測(cè)患者預(yù)后的意義。Jaeger等1研究了膀胱癌的MC與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的意義，與我們報(bào)道不同的是MC與分級(jí)無關(guān)，考慮為組織塊的構(gòu)成不同所致。MC在5年死亡組與伴有轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的5年存活組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及5年死亡組的MC顯著高于無轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)組，提示高M(jìn)C是轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及5年死亡的參考指標(biāo)。MC為100+/&

13、#215;200視野，患者發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及5年死亡的百分率高達(dá)93.75%，是否可考慮200×鏡下見100個(gè)以上微血管是預(yù)后不佳的輔助指標(biāo)。VEGF表達(dá)強(qiáng)度與微血管密度在級(jí)癌及在有轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及5年死亡組有相關(guān)性(r=0.354、P0.05， r=0.366、P0.05)，這證實(shí)了VEGF可能是癌轉(zhuǎn)移的重要血管形成因子的推斷2。我們依據(jù)Dvorak等3及Waleh等4等學(xué)者的實(shí)驗(yàn)推測(cè)，VEGF表達(dá)與MC相關(guān)性的發(fā)生機(jī)理可能是腫瘤細(xì)胞內(nèi)V-Src等基因直接上調(diào)VEGF表達(dá)，同時(shí)/或突變型p53等調(diào)控瘤細(xì)胞異常增殖，瘤體迅速增大，造成缺氧環(huán)境而誘發(fā)VEGF合成、分泌及對(duì)血管內(nèi)皮的粘附，從而

14、過表達(dá)。VEGF增多則與其KDR受體結(jié)合者多，后者通過一系列調(diào)控機(jī)制導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂、增殖、促使內(nèi)皮細(xì)胞遷移，毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)、血漿外滲，而利于新血管以出芽方式大量形成。無轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)組二者無相關(guān)性，考慮為VEGF表達(dá)與微血管的形成尚存有一時(shí)間差所致。其它組有待增大樣本數(shù)，以便深入研究。作者單位：300203天津醫(yī)科大學(xué)病理教研室參考文獻(xiàn)1.Jaeger TM, Weidner N, Chew K, et al. Tumor angiogenesis correlates with lymph node metastases in invasive bladder cancer. J Ur

15、ol, 1995, 154:69-71.2 Ellis LM, Liu W. Vascular endothelial growth factor (VBGF) expression and alternate splicing in non-metastatic human colon cancer cell lines. Cancer Res, 1995,36:88-89.3 Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, et al. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis. Am J Pathol, 1995,146:1029-10