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1、ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般使用專門的曲線擬合工具,如:Curve Exert1.3下面以Curve Exert1.3為例說明怎么樣制作:1 啟動“Curve Expert1.3”2 X軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值,Y軸輸入所對應(yīng)的濃度值,如圖:3單擊運行 按鈕(上圖紅圈圈),出現(xiàn)如下對話框 4單擊ok按鈕,出現(xiàn)如下兩個對話框,關(guān)閉下面一個對話框 關(guān)閉下面一個對話框 5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線,。 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊,出現(xiàn)如下對話框:注意:選擇系數(shù)(即“r”值)最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框右
2、上角有“r”值 ,當(dāng)“r”值越接近1擬合度越好 7按Ctrl鍵+L鍵,(或者在上圖的界面上點擊鼠標(biāo)右鍵,出現(xiàn)analyze選項),出現(xiàn)如下對話框: 8輸入標(biāo)準(zhǔn)的OD值,單擊Calculate按忸,即可得到待測蛋白的實際含量。(標(biāo)本稀釋了N倍,運算出的數(shù)值應(yīng)再乘以N)。9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程,可在步驟6的對話框空白處右擊,選擇”Information” 10. 得到如下對話框:點擊“Copy”在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù):Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx2)當(dāng)抗原或抗體濃度過高時,對應(yīng)的ELISA讀數(shù)不會再顯著升高,這時會達到一個平臺期,同樣在低濃度時也有一個平臺期。只有在適當(dāng)?shù)臐舛葧r才會出現(xiàn)類似直線的曲線,所以一般數(shù)據(jù)都要進行多參數(shù)擬和,才能得到能更準(zhǔn)
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