第五章黃酮類化合物

1、第五章第五章 黃酮類化合物黃酮類化合物第一節(jié)第一節(jié) 概述概述一、黃酮類化合物的基本母核一、黃酮類化合物的基本母核 苯基色原酮苯基色原酮 兩個(gè)具有兩個(gè)具有ph-OH的苯環(huán)（的苯環(huán)（A-與與B-環(huán)）通過(guò)中央三環(huán)）通過(guò)中央三碳原子相互連接而成的一系列化合物碳原子相互連接而成的一系列化合物 注意各碳原子的編號(hào)注意各碳原子的編號(hào)二、結(jié)構(gòu)分類二、結(jié)構(gòu)分類（一）、黃酮（醇）類（一）、黃酮（醇）類 *黃芩素（黃酮類）黃芩素（黃酮類） *木犀草素木犀草素 *槲皮素（黃酮醇類）槲皮素（黃酮醇類）OOOHOHOHOHOHOOHOHOHOOHOOHOHOHO（二）、二氫黃酮類（二）、二氫黃酮類 *甘草素甘草素 （三）

2、、異黃酮類（三）、異黃酮類 *大豆素大豆素OHOOHOOHOOOH123567823564（四）、雙黃酮類（四）、雙黃酮類 R1=CH3 R2=H 銀杏素銀杏素 R1=H R2=CH3 異銀杏素異銀杏素（五）、查耳酮（五）、查耳酮 鄰羥基（鄰羥基（6-羥基）查耳酮羥基）查耳酮 二氫黃酮二氫黃酮OHOOOH+OH-例：紅花苷例：紅花苷（六）、花色素類（六）、花色素類 飛燕草素飛燕草素 例：山楂中的黃酮例：山楂中的黃酮 花色素的性質(zhì)：水溶性、極性花色素的性質(zhì)：水溶性、極性O(shè)OOHOHOglcOHOHOHOOHOHOglc異構(gòu) 化O+母核OOHOHOHOHOHOH（七）、黃烷醇類（七）、黃烷醇類 兒

3、茶素兒茶素 茶多酚是兒茶素的多聚體茶多酚是兒茶素的多聚體 （八）、二氫黃酮醇類（八）、二氫黃酮醇類 水飛薊素水飛薊素OHOHOHOHOHHOHOOOOHOHOHCH2OHOOHOH（九）、山酮類（九）、山酮類 異芒果素（石葦）異芒果素（石葦） （十）、橙酮類（噢哢類）（十）、橙酮類（噢哢類） 硫磺菊素硫磺菊素OOHOHOHOHOglcOHOCHOOHOH（十一）、高黃酮類（十一）、高黃酮類本章要求掌握的結(jié)構(gòu)共本章要求掌握的結(jié)構(gòu)共5個(gè)：個(gè)：黃芩素、木犀草素、槲皮素、甘草素、大豆素黃芩素、木犀草素、槲皮素、甘草素、大豆素OO(母核）四 碳鏈第二節(jié)第二節(jié) 黃酮類化合物的理化性質(zhì)及顯色反應(yīng)黃酮類化合物

4、的理化性質(zhì)及顯色反應(yīng)一、性狀一、性狀 1、多數(shù)為結(jié)晶性固體，少數(shù)為無(wú)定形粉末、多數(shù)為結(jié)晶性固體，少數(shù)為無(wú)定形粉末 2、游離的苷元中，二氫黃酮、二氫黃酮醇、游離的苷元中，二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷醇有旋光性（苷類、糖多為左旋）黃烷醇有旋光性（苷類、糖多為左旋） 3、因有交叉共軛體系，而顯現(xiàn)出顏色、因有交叉共軛體系，而顯現(xiàn)出顏色 4、花色素及其苷元的顏色隨著、花色素及其苷元的顏色隨著pH不同而不同而改變（類似石蕊試紙的變化）改變（類似石蕊試紙的變化） pH8.5藍(lán)藍(lán) 二、溶解性二、溶解性 黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)(苷或苷苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖

5、苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷)不同而有很大的差異不同而有很大的差異（一）、苷元（一）、苷元 游離苷元：難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、游離苷元：難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿水溶液中醋酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿水溶液中（有（有ph-OH） 即具一定的親脂性，但不強(qiáng)，苷元又分即具一定的親脂性，但不強(qiáng)，苷元又分 1、平面型分子、平面型分子黃酮、黃酮醇、查耳酮（無(wú)手黃酮、黃酮醇、查耳酮（無(wú)手性碳）性碳） 分子與分子之間排列緊密分子與分子之間排列緊密,分子間引力較大，分子間引力較大，難溶于水；難溶于水； 2、非平面型分子、非平面型分子二氫黃酮、二氫黃酮醇（手二氫黃

6、酮、二氫黃酮醇（手性碳）分子與分子間排列不緊密，分子間引力降低，性碳）分子與分子間排列不緊密，分子間引力降低，有利于水分子進(jìn)有利于水分子進(jìn) 入，溶解度稍大入，溶解度稍大 3、特殊情況、特殊情況 1） 花色苷元花色苷元平面性結(jié)構(gòu)，但因以離子形式存在平面性結(jié)構(gòu)，但因以離子形式存在,具有鹽的通性，親水性較強(qiáng)，水溶度較大具有鹽的通性，親水性較強(qiáng)，水溶度較大 2） 苷元分子中引入苷元分子中引入-OH，則增加在水中的溶解度則增加在水中的溶解度 3） -OH經(jīng)甲基化后，則增加在有機(jī)溶劑中的溶解度經(jīng)甲基化后，則增加在有機(jī)溶劑中的溶解度 4） 一般的黃酮類化合物不溶于石油醚中，但川陳皮一般的黃酮類化合物不溶于石

7、油醚中，但川陳皮素（素（5，6，7，8，3,4-OH均均CH3化），則可溶于化），則可溶于石石油醚中油醚中 二、苷（黃酮類苷元糖）二、苷（黃酮類苷元糖） 黃酮類化合物的黃酮類化合物的OH糖苷化后，水溶性增加，而在糖苷化后，水溶性增加，而在有機(jī)溶劑中的溶解度下降，因有有機(jī)溶劑中的溶解度下降，因有ph-OH，則可溶于堿則可溶于堿水溶液中水溶液中 三、酸性與堿性三、酸性與堿性（一）、酸性（一）、酸性 1、黃酮類化合物分子中多具有、黃酮類化合物分子中多具有ph-OH，故顯酸性故顯酸性,可溶于堿性水溶液中可溶于堿性水溶液中 OH-水水 ph-OH ph-O-(酚鹽酚鹽) （共性）（共性） 應(yīng)用：提?。▔A

8、溶酸沉法）應(yīng)用：提?。▔A溶酸沉法）OOOOOOOO-+-+O HOOOHOOOHO HOOOOOOO H2、酸性差異（個(gè)性）、酸性差異（個(gè)性） 由于由于ph-OH數(shù)目及位置不同，酸性強(qiáng)弱也不同，其數(shù)目及位置不同，酸性強(qiáng)弱也不同，其ph-OH酸性強(qiáng)弱順序?yàn)樗嵝詮?qiáng)弱順序?yàn)镃7.4-(-OH)2 C7或或C4OH 一般一般ph-OH C5-OH5% NaHCO3 5% Na2CO3 1% NaOH 5% NaOH(相當(dāng)于相當(dāng)于COOH的酸性的酸性) 與與C4=O形成分子內(nèi)氫鍵形成分子內(nèi)氫鍵 應(yīng)用：利用酸性差異用于分離應(yīng)用：利用酸性差異用于分離堿堿 酚鹽（溶于水）酚鹽（溶于水） pH梯度萃取法（分離）

9、梯度萃取法（分離）(二二)、堿性、堿性 r吡喃環(huán)上的吡喃環(huán)上的1位氧原子上，有未共位氧原子上，有未共用的電子對(duì)用的電子對(duì) 微弱堿性，與濃硫酸、鹽微弱堿性，與濃硫酸、鹽酸生成眻鹽（不穩(wěn)定），加水后即可分解酸生成眻鹽（不穩(wěn)定），加水后即可分解, 應(yīng)用：提取分離時(shí)，應(yīng)用：提取分離時(shí)，pH值要嚴(yán)格控制值要嚴(yán)格控制 堿溶堿溶pH 89，過(guò)堿母核破壞裂解過(guò)堿母核破壞裂解 OHOOHOHOHOOglcRhaOHOHOHOHOHHOOC12+pH 酸沉酸沉pH 45，過(guò)酸生成過(guò)酸生成眻鹽，又溶于水眻鹽，又溶于水 pH2 （眻鹽，水溶性）（眻鹽，水溶性）OOOOHHClH O2+X-或 H2SO4.四、顯色反應(yīng)

10、四、顯色反應(yīng)掌握四要素掌握四要素反應(yīng)名稱、適用范圍、反應(yīng)試劑（條件）（酸、堿反應(yīng)名稱、適用范圍、反應(yīng)試劑（條件）（酸、堿性）性） 、反應(yīng)結(jié)果（現(xiàn)象）、反應(yīng)結(jié)果（現(xiàn)象） （ 顏色、熒光、氣味）顏色、熒光、氣味）反應(yīng)名稱反應(yīng)名稱 適用范圍適用范圍 反應(yīng)試劑反應(yīng)試劑 反應(yīng)結(jié)果反應(yīng)結(jié)果（一）、還原試驗(yàn)（一）、還原試驗(yàn)1.HCl-Mg 黃酮（醇）類黃酮（醇）類 HCl+Mg 多數(shù)：橙紅紫多數(shù)：橙紅紫紅紅粉反應(yīng)粉反應(yīng) 二氫黃酮（醇）類二氫黃酮（醇）類 少數(shù)：紫藍(lán)色少數(shù)：紫藍(lán)色 2.NaBH4 二氫黃酮類二氫黃酮類 NaBH4+ 紫色紫紅色紫色紫紅色 反應(yīng)反應(yīng) HCl/H2SO4 (二二)、金屬鹽類試劑的絡(luò)

11、合反應(yīng)金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) 3.鋁鹽鋁鹽 黃酮類黃酮類 1 AlCl3 黃色并黃色并 (Al3+) a.C3-OH . C4=O 1% Al(NO3)3 有熒光有熒光 b.C5-OH. C4=O c. 4.鉛鹽鉛鹽 黃酮類黃酮類 1 Pb(AC)2 黃色黃色（Pb2） a.C3-OH . C4=O 1 Pb(OH)(AC) 紅色紅色 b.C5-OH. C4=O c. OHOHOHOH5、皓鹽、皓鹽 黃酮類黃酮類 （Zr2） a.C3-OH . C4=O 2 ZrOCl2 黃綠色黃綠色 b.C5-OH. C4=O 并帶熒光并帶熒光但兩種絡(luò)合物對(duì)酸的穩(wěn)定性不同但兩種絡(luò)合物對(duì)酸的穩(wěn)定性不同 枸櫞酸

12、枸櫞酸C3-OH 保持黃色保持黃色 枸櫞酸枸櫞酸C5-OH 黃色褪去黃色褪去 6.鎂鹽鎂鹽 二氫黃酮二氫黃酮(醇醇)類類 Mg(AC)2甲醇甲醇 天藍(lán)色熒光天藍(lán)色熒光（Mg2） 黃酮（醇）黃酮（醇） 異黃酮類異黃酮類 黃橙黃褐色黃橙黃褐色 7.鍶鹽鍶鹽 鄰二酚羥基鄰二酚羥基 SrCl2NH3.H2O 綠色綠色（Sr2） 性甲醇性甲醇 棕色黑色棕色黑色8.鐵鹽鐵鹽 酚類酚類ph-OH FeCl3/HCl 肟綠色肟綠色（Fe3+） （三）、硼酸顯色反應(yīng)（三）、硼酸顯色反應(yīng) 9、 5羥基黃酮羥基黃酮 硼酸硼酸 黃色黃色 C5-OH, C4O 黃綠色黃綠色 2羥基查耳酮羥基查耳酮 熒光熒光 C2-OH

13、，C4O（四）、堿性試劑顯色反應(yīng)四）、堿性試劑顯色反應(yīng) 10、一般黃酮類、一般黃酮類 NaHCO3噴霧噴霧 顏色顏色 均有均有 或氨熏或氨熏 加深加深 第三節(jié)第三節(jié) 黃酮類化合物的提取與分離黃酮類化合物的提取與分離 一提取一提?。ㄒ唬┛捎玫娜軇核⒑肌⒂校ㄒ唬┛捎玫娜軇核?、含水醇、有機(jī)溶劑。選擇溶劑時(shí)應(yīng)考慮的因素：機(jī)溶劑。選擇溶劑時(shí)應(yīng)考慮的因素： 目標(biāo)化合物的存在形式（苷或苷目標(biāo)化合物的存在形式（苷或苷元）、極性大小、提取要求（苷或元）、極性大小、提取要求（苷或苷元）、雜質(zhì)（親脂性或親水性）苷元）、雜質(zhì)（親脂性或親水性） （二）溶劑選擇的原則：（二）溶劑選擇的原則：“相似相溶相似相溶”

14、苷、苷元、花色素苷苷、苷元、花色素苷 1）甲、乙醇、含水醇）甲、乙醇、含水醇苷、極性大苷、極性大的苷元的苷元 2）水）水苷苷 3）正丁醇、醋酸乙酯）正丁醇、醋酸乙酯苷元苷元除雜質(zhì)除雜質(zhì) 水提醇沉法、醇提水沉法、脫脂水提醇沉法、醇提水沉法、脫脂(果實(shí)、果實(shí)、種子、葉子中的蠟質(zhì)、樹脂等）種子、葉子中的蠟質(zhì)、樹脂等） 水溶性雜質(zhì)、脂溶性雜質(zhì)水溶性雜質(zhì)、脂溶性雜質(zhì) （三）不同的成分（三）不同的成分 1、黃酮苷類以及極性稍大的苷元、黃酮苷類以及極性稍大的苷元丙酮、醋丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些極性較大的混合溶劑（含酸乙酯、乙醇、水或某些極性較大的混合溶劑（含水醇）水醇） 2、 多糖苷類多糖苷類沸水沸水

15、 3、 大多數(shù)苷元大多數(shù)苷元極性較小的溶劑（氯仿、乙極性較小的溶劑（氯仿、乙醚、醋酸乙酯）醚、醋酸乙酯） 4、 多甲氧基黃酮苷元（川陳皮素）多甲氧基黃酮苷元（川陳皮素）苯苯（四）方法（四）方法 1.溶劑提取法溶劑提取法 最常用，乙醇或含水乙醇（回流）最常用，乙醇或含水乙醇（回流） 水溶液煎煮水溶液煎煮 2.堿溶酸沉法堿溶酸沉法 p.185 槐花米蘆丁的提取槐花米蘆丁的提取 黃酮苷類，有一定極性黃酮苷類，有一定極性,可溶于水，但難溶于酸水，可溶于水，但難溶于酸水， 易溶于堿水易溶于堿水 調(diào)調(diào)pH值值用堿水提取用堿水提取 黃酮苷類黃酮苷類 至酸性至酸性 注意注意pH值值 1）、在用堿提酸沉法時(shí)，所

16、用）、在用堿提酸沉法時(shí)，所用堿液濃度不易過(guò)高，以免在強(qiáng)堿性堿液濃度不易過(guò)高，以免在強(qiáng)堿性下，尤其加熱時(shí)破壞黃酮母核（提下，尤其加熱時(shí)破壞黃酮母核（提取一般均需加熱）取一般均需加熱） 2）、在加酸酸化時(shí)，酸性也不）、在加酸酸化時(shí)，酸性也不宜過(guò)強(qiáng)，以免生成眻鹽，致使析出宜過(guò)強(qiáng)，以免生成眻鹽，致使析出的黃酮類化合物又重新溶解的黃酮類化合物又重新溶解3、炭粉吸附法、炭粉吸附法少用少用 原理：非極性吸附原理：非極性吸附 適用范圍：主要用于苷類的精制適用范圍：主要用于苷類的精制 顆粒狀活性炭（粉末顆粒狀活性炭（粉末吸附太強(qiáng)吸附太強(qiáng),不易解吸）不易解吸）4、大孔樹脂吸附法、大孔樹脂吸附法 D101/201總

17、黃酮的精制總黃酮的精制5、超臨界流體萃取法、超臨界流體萃取法 CO2超臨界超臨界（非氣體亦非液體）萃取，加適量非氣體亦非液體）萃取，加適量夾帶劑（甲醇、乙醇）夾帶劑（甲醇、乙醇）二分離二分離 甲醇甲醇/乙醇乙醇/含水醇提取液含水醇提取液 苷與苷元的混合物苷與苷元的混合物 （一）、（一）、 兩相溶劑萃取法兩相溶劑萃取法苷苷 水水 水相：苷水相：苷苷元苷元 親脂性有機(jī)溶劑親脂性有機(jī)溶劑 有機(jī)相：苷元有機(jī)相：苷元 （正丁醇、氯仿）（正丁醇、氯仿） （回收）（回收） 這個(gè)思路適用于所有的苷及苷元這個(gè)思路適用于所有的苷及苷元（二）、梯度（二）、梯度pH萃取法萃取法 黃酮類化合物中具有黃酮類化合物中具有p

18、h-OH，根據(jù)根據(jù)ph-OH數(shù)目和位置數(shù)目和位置不同，具有不同的酸性不同，具有不同的酸性 梯度梯度pH萃取法適用于酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元的分離萃取法適用于酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元的分離 親脂性親脂性 5 NaHCO3黃酮類化合物黃酮類化合物 苷元苷元 有機(jī)溶劑（溶解）有機(jī)溶劑（溶解） H H+ + 醋酸乙酯、正丁醇醋酸乙酯、正丁醇 1）堿水層堿水層 C7、C4-(OH)2 萃取、回收萃取、回收 2）有機(jī)相）有機(jī)相 H+ 5%Na2CO3 3）堿水層）堿水層 2）有機(jī)相）有機(jī)相 4）有機(jī)相）有機(jī)相 醋酸乙酯、正丁醇醋酸乙酯、正丁醇 C7或或C4-OH 萃取、回收萃取、回收 4）有機(jī)相）有機(jī)相(1%

19、 NaOH.、5% NaOH) （三）、根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離三）、根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離 1、具有鄰二、具有鄰二ph-OH的成分，可用的成分，可用Pb2鹽分離鹽分離 具鄰二具鄰二ph-OH的成分：可被的成分：可被Pb(AC)2 兩類成分兩類成分 不具鄰二不具鄰二ph-OH的成分：可被的成分：可被Pb(OH) AC 得以分離得以分離 2、與硼酸絡(luò)合、與硼酸絡(luò)合絡(luò)合物溶于水絡(luò)合物溶于水OOPb2+OOOBO+（四）、柱色譜法（四）、柱色譜法 1、硅膠柱色譜、硅膠柱色譜 （1）、）、分離原理分離原理遵循遵循“極性吸附極性吸附”原原理理 化合物極性大，吸附牢，難洗脫，化合物極性大

20、，吸附牢，難洗脫，后下，后下，Rf值?。恢敌。?化合物極性小，吸附不牢，易洗脫化合物極性小，吸附不牢，易洗脫,先下，先下，Rf值大；值大； 黃酮類化合物多具黃酮類化合物多具OH，一般是后下一般是后下 （2）、）、適用范圍適用范圍 主要適用于中等極性及其以下的化合物主要適用于中等極性及其以下的化合物異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化（或乙醚化）的黃酮及黃酮醇類甲基化（或乙醚化）的黃酮及黃酮醇類 少數(shù)情況下，硅膠部分去活化后（吸附少數(shù)情況下，硅膠部分去活化后（吸附一定量的水，降低其吸附活性），可用于一定量的水，降低其吸附活性），可用于分離極性較大的化合物分離

21、極性較大的化合物多羥基的黃酮多羥基的黃酮醇及其苷類醇及其苷類（3）、）、洗脫順序洗脫順序 苷元苷元 單糖苷單糖苷 雙糖苷雙糖苷（槲皮素）先（槲皮素）先 （金絲桃苷）中（金絲桃苷）中 （蘆丁）后（蘆?。┖螅?）、）、洗脫劑洗脫劑 氯仿、甲醇等（選擇原則：極性由小氯仿、甲醇等（選擇原則：極性由小 大）大） 洗脫的同時(shí)，用洗脫的同時(shí)，用TLC檢測(cè)，看洗脫劑是否選擇恰當(dāng)，檢測(cè)，看洗脫劑是否選擇恰當(dāng)，要求要求TLC Rf0.150.2作為柱層析的首選洗脫劑作為柱層析的首選洗脫劑（一般（一般TLC鑒定鑒定 Rf0.30.7）OHOOHOHOHOOHglcOHOOHOHOOOHglcRhaOHOHOOHOH

22、OO 2、聚酰胺柱色譜、聚酰胺柱色譜 （1）、）、分離原理分離原理遵循遵循“氫鍵吸附氫鍵吸附”原原理理 通過(guò)聚酰胺分子中的酰胺羰基與黃酮類化通過(guò)聚酰胺分子中的酰胺羰基與黃酮類化合物分子上的合物分子上的phOH形成氫鍵締合而產(chǎn)生形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附作用；吸附作用； 化合物形成氫鍵能力越強(qiáng)，吸附牢，難洗化合物形成氫鍵能力越強(qiáng)，吸附牢，難洗脫，后下脫，后下 化合物形成氫鍵能力越弱，吸附不牢，易化合物形成氫鍵能力越弱，吸附不牢，易洗脫，先下洗脫，先下 （2）、）、氫鍵的吸附規(guī)律與洗脫氫鍵的吸附規(guī)律與洗脫先后順序先后順序 不同的黃酮類化合物與聚酰胺不同的黃酮類化合物與聚酰胺之間形成氫鍵的牢固程度是不同

23、之間形成氫鍵的牢固程度是不同的，洗脫溶劑與聚酰胺的吸附能的，洗脫溶劑與聚酰胺的吸附能力強(qiáng)時(shí)力強(qiáng)時(shí),可與黃酮類化合物競(jìng)爭(zhēng)可與黃酮類化合物競(jìng)爭(zhēng) A、吸附規(guī)律：含水溶劑中的吸吸附規(guī)律：含水溶劑中的吸附強(qiáng)度主要取決于黃酮類化合物分附強(qiáng)度主要取決于黃酮類化合物分子中，羥基的數(shù)目和位置及溶劑與子中，羥基的數(shù)目和位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小在含水溶劑中氫鍵締合能力的大小在含水溶劑中 能形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多能形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多(ph-OH、-COOH)，則吸附能力越強(qiáng)，則吸附能力越強(qiáng)， 如形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附弱。如形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附弱。

24、B、洗脫順序洗脫順序 苷元相同：分子大，吸附不牢（空間位苷元相同：分子大，吸附不牢（空間位阻），先下；阻），先下； 叁糖苷，雙糖苷、單糖苷、苷元叁糖苷，雙糖苷、單糖苷、苷元 母核上增加羥基，洗脫速度即相應(yīng)減慢母核上增加羥基，洗脫速度即相應(yīng)減慢 槲皮素槲皮素 后下后下 木犀草素木犀草素 先下先下OHOHOOHOHOOHOHOOHOHOOHC、分子中芳香核、共軛雙鍵分子中芳香核、共軛雙鍵多者易被吸附多者易被吸附 電子云密度（芳香環(huán)、共軛電子云密度（芳香環(huán)、共軛雙鍵）高雙鍵）高 查耳酮吸附強(qiáng)于二氫黃酮；查耳酮吸附強(qiáng)于二氫黃酮； 黃酮醇、黃酮、二氫黃酮、黃酮醇、黃酮、二氫黃酮、異黃酮的吸附依次減弱異黃

25、酮的吸附依次減弱（3）、）、適用范圍適用范圍 具有具有phOH或具有共軛體系的黃酮類或具有共軛體系的黃酮類化合物；化合物；（4）、）、洗脫劑洗脫劑 A含水醇：含醇濃度由低含水醇：含醇濃度由低 高高 B有機(jī)溶劑：將聚酰胺作極性固定相有機(jī)溶劑：將聚酰胺作極性固定相（正相分配原理）（正相分配原理） 例：蕓香苷、槲皮素（苷苷元，分子例：蕓香苷、槲皮素（苷苷元，分子大?。┐笮。?二氫槲皮素、槲皮素二氫槲皮素、槲皮素(共軛體系少大共軛體系少大)3、葡聚糖凝膠層析（、葡聚糖凝膠層析（Sephadex gel） （1）、）、分離原理：分子篩分離原理：分子篩+氫鍵吸附原理氫鍵吸附原理 苷元：氫鍵吸附（苷元：氫鍵

26、吸附（ph-OH）；）； 苷：分子篩作用（三、雙、單糖苷、苷元）苷：分子篩作用（三、雙、單糖苷、苷元） 分子篩：適用于分離苷及其苷元類分子篩：適用于分離苷及其苷元類 化合物分子大，易洗脫，先下化合物分子大，易洗脫，先下 化合物分子小，難洗脫，后下化合物分子小，難洗脫，后下 （2）、）、適用范圍：苷、苷元適用范圍：苷、苷元 （3）、）、洗脫順序洗脫順序 苷：分子量大的先洗脫；苷：分子量大的先洗脫； 苷元：苷元： A、分子大小相似的分子大小相似的-形成氫鍵能力形成氫鍵能力強(qiáng)后洗脫（取決于游離強(qiáng)后洗脫（取決于游離ph-OH的數(shù)目）的數(shù)目）(遵循氫鍵吸附規(guī)律遵循氫鍵吸附規(guī)律) B、分子大小不相似的分子

27、大小不相似的-分子量大的分子量大的先洗脫先洗脫 三糖苷雙糖苷單糖苷苷元三糖苷雙糖苷單糖苷苷元（遵循分子篩原理）（遵循分子篩原理） （4）、）、洗脫劑：含水醇洗脫劑：含水醇 第四節(jié)第四節(jié) 結(jié)構(gòu)研究法結(jié)構(gòu)研究法一、純度檢查一、純度檢查 1、檢查有無(wú)均勻一致的晶形、檢查有無(wú)均勻一致的晶形 2、有無(wú)明確、敏銳的熔點(diǎn)、集中的熔距、有無(wú)明確、敏銳的熔點(diǎn)、集中的熔距 3、TLC PC樣品在三種以上不同展樣品在三種以上不同展開系統(tǒng)中均呈現(xiàn)單一而集中的斑點(diǎn)；在可開系統(tǒng)中均呈現(xiàn)單一而集中的斑點(diǎn)；在可見光、見光、UV光下觀察，或噴以一定的顯色光下觀察，或噴以一定的顯色劑（其中必有一種為通用顯色劑）劑（其中必有一種為

28、通用顯色劑） 不同的展開系統(tǒng)：正相、反相；酸、堿性不同的展開系統(tǒng)：正相、反相；酸、堿性 4、GC 、 HPLC或或 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳在不在不同的分離條件下，均呈尖銳單一峰或極小同的分離條件下，均呈尖銳單一峰或極小雜質(zhì)峰雜質(zhì)峰 只有純的化合物才能用于結(jié)構(gòu)測(cè)定只有純的化合物才能用于結(jié)構(gòu)測(cè)定二、結(jié)構(gòu)鑒定的一般步驟二、結(jié)構(gòu)鑒定的一般步驟（一）、物理常數(shù)的測(cè)定（一）、物理常數(shù)的測(cè)定 結(jié)晶：結(jié)晶：m.p （旋光）旋光） 晶型參數(shù)晶型參數(shù) 液體：液體：b.p d n（折光）折光） （二）、分子式的確定二）、分子式的確定 1、元素分析、元素分析 常測(cè)常測(cè)C、H、N（元素分析儀或化元素分析儀或化學(xué)分析）學(xué)分

29、析）- 實(shí)驗(yàn)式實(shí)驗(yàn)式 2、分子量的測(cè)定、分子量的測(cè)定 化學(xué)方法、同位數(shù)法或質(zhì)譜法化學(xué)方法、同位數(shù)法或質(zhì)譜法-分子式分子式（三）、功能基和分子骨架的測(cè)定（三）、功能基和分子骨架的測(cè)定 1、不飽和度的計(jì)算（、不飽和度的計(jì)算（） 2、化學(xué)反應(yīng)化學(xué)反應(yīng) +波譜數(shù)據(jù)波譜數(shù)據(jù) （UV IR NMR MS） 功能基、母核等。功能基、母核等。 （四）、化合物結(jié)構(gòu)式的測(cè)定（四）、化合物結(jié)構(gòu)式的測(cè)定 綜合上述所有信息綜合上述所有信息 結(jié)構(gòu)式（與文獻(xiàn)對(duì)照）結(jié)構(gòu)式（與文獻(xiàn)對(duì)照）三、結(jié)構(gòu)測(cè)定中常用的波譜簡(jiǎn)介三、結(jié)構(gòu)測(cè)定中常用的波譜簡(jiǎn)介（一）、質(zhì)譜（一）、質(zhì)譜 （MS） 1、種類種類 1）、）、EI-MS 電子轟擊電子轟

30、擊 測(cè)定小分測(cè)定小分 2）、）、CI-MS 化學(xué)電離化學(xué)電離 子化合物子化合物 3）、）、FI-MS 場(chǎng)致電離場(chǎng)致電離 4）、）、FD-MS 場(chǎng)解析電離場(chǎng)解析電離 測(cè)定大分測(cè)定大分 5）、）、FAB-MS 快速原子轟擊電離快速原子轟擊電離 子化合物子化合物 6）、）、SEI-MS 電噴霧電噴霧 2、基本原理、基本原理 電離電離 化合物化合物 碎片碎片 （有一定的裂解規(guī)律）（有一定的裂解規(guī)律） 3、分子離子峰（、分子離子峰（M+） 強(qiáng)度與穩(wěn)定性相關(guān)電離強(qiáng)度與穩(wěn)定性相關(guān)電離 4、碎片離子、碎片離子 1）、基峰）、基峰 2）、特征相關(guān)峰）、特征相關(guān)峰 3）、亞穩(wěn)離子峰）、亞穩(wěn)離子峰 推定或復(fù)核分子的

31、部分結(jié)構(gòu)推定或復(fù)核分子的部分結(jié)構(gòu) （二）紅外光譜（二）紅外光譜 （IR）分兩個(gè)區(qū)域分兩個(gè)區(qū)域 1、特征區(qū)、特征區(qū) 4000 1333cm-1 推斷主要的功能基推斷主要的功能基 2、指紋區(qū)、指紋區(qū) 1333 400cm-1 一組相關(guān)峰一組相關(guān)峰（三）紫外（三）紫外-可見光譜可見光譜 （UV-VIS） 電子躍遷，產(chǎn)生電子躍遷，產(chǎn)生UV吸收吸收 （四）氫譜（四）氫譜 （1H-NMR） 通過(guò)化學(xué)位移（通過(guò)化學(xué)位移（）、）、譜線的積分面積以及譜線的積分面積以及裂分情況（重峰數(shù)及偶合常數(shù)裂分情況（重峰數(shù)及偶合常數(shù)J），），提供分子中提供分子中1H的類型、數(shù)目及相鄰原子或原子團(tuán)的信息。的類型、數(shù)目及相鄰原子

32、或原子團(tuán)的信息。 1、化學(xué)位移（、化學(xué)位移（） 020ppm 不同類型的不同類型的1H核共振信號(hào)將出現(xiàn)核共振信號(hào)將出現(xiàn)在不同的區(qū)域。在不同的區(qū)域。 以次甲基硅醚作對(duì)照以次甲基硅醚作對(duì)照=0 數(shù)值大數(shù)值大 低場(chǎng)低場(chǎng) 能量低能量低 2、峰面積、峰面積 積分面積與分子中的總質(zhì)子數(shù)相當(dāng)積分面積與分子中的總質(zhì)子數(shù)相當(dāng) 3、偶合常數(shù)（、偶合常數(shù)（J） 峰的裂變峰的裂變 4、取代基的影響、取代基的影響 電子屏蔽作用電子屏蔽作用 （五）碳譜（五）碳譜 （13C-NMR） 1、常見常見 13C-NMR譜類型及其特征譜類型及其特征 （1）、噪聲去偶譜或全氫去偶）、噪聲去偶譜或全氫去偶 由于由于13C 譜中有譜中有

33、13C和和1H的信號(hào)，較復(fù)的信號(hào)，較復(fù)雜，且雜，且13C的信號(hào)弱；的信號(hào)弱； 在這兩種譜中：在這兩種譜中： 1H對(duì)對(duì)13C的偶合影響全的偶合影響全部消除，所有的部消除，所有的13C信號(hào)在圖譜上均作為信號(hào)在圖譜上均作為單峰出現(xiàn)，與單峰出現(xiàn)，與1H-NMR譜不同，峰高與譜不同，峰高與C數(shù)不成正比數(shù)不成正比（3）、）、DEPT 譜譜 改變照射改變照射1H核的脈沖寬度（核的脈沖寬度（），），使不同類型的使不同類型的13C信號(hào)在譜圖上呈單峰形式，分別朝上或向下伸出，靈信號(hào)在譜圖上呈單峰形式，分別朝上或向下伸出，靈敏度高，信號(hào)之間很少重疊。敏度高，信號(hào)之間很少重疊。 C的四種形式：伯、仲的四種形式：伯、仲

34、 、叔、季、叔、季（4）、二維核磁共振譜）、二維核磁共振譜 一維一維NMR中，如果信號(hào)過(guò)于復(fù)雜或堆積一起難于中，如果信號(hào)過(guò)于復(fù)雜或堆積一起難于分辨時(shí)，識(shí)別信號(hào)之間的偶合關(guān)系將十分困難分辨時(shí)，識(shí)別信號(hào)之間的偶合關(guān)系將十分困難 1H-1H COSY譜譜 13C-1H COSY 譜譜 13C-13C 的偶合作用很弱，可以忽略不計(jì)的偶合作用很弱，可以忽略不計(jì)第五節(jié)第五節(jié) 黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)鑒定黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)鑒定 黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)鑒定現(xiàn)在多依賴于譜學(xué)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)鑒定現(xiàn)在多依賴于譜學(xué)的綜合解析，而化學(xué)方法和色譜法已降至輔助地位的綜合解析，而化學(xué)方法和色譜法已降至輔助地位

35、已知化合物已知化合物色譜分析色譜分析（1）、）、TLC ：硅膠、聚酰胺硅膠、聚酰胺 以三種不同極性和酸、堿性的展開劑試驗(yàn)，均得到以三種不同極性和酸、堿性的展開劑試驗(yàn)，均得到單一、集中的斑點(diǎn)單一、集中的斑點(diǎn)（2）、）、PC、HPLC、毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳 未知化合物未知化合物 色譜色譜 + 波譜波譜 一、色譜法在黃酮類化合物鑒定中的應(yīng)用一、色譜法在黃酮類化合物鑒定中的應(yīng)用（一）、硅膠薄層色譜（一）、硅膠薄層色譜-極性吸附極性吸附 適用于分離與鑒定弱極性黃酮類化合物適用于分離與鑒定弱極性黃酮類化合物 1、分離黃酮苷元常用的展開劑：、分離黃酮苷元常用的展開劑： 甲苯甲苯-甲酸甲酯甲酸甲酯-甲酸（甲酸

36、（5：4：1） 可以根據(jù)待分離成分極性的大小適當(dāng)?shù)卣{(diào)整可以根據(jù)待分離成分極性的大小適當(dāng)?shù)卣{(diào)整甲苯與甲酸的比例甲苯與甲酸的比例 2、分離黃酮苷元的衍生物、分離黃酮苷元的衍生物(甲醚或醋酸乙酯甲醚或醋酸乙酯)等中性成分常用的展開劑等中性成分常用的展開劑 苯苯-丙酮（丙酮（9：1） 苯苯-醋酸乙酯（醋酸乙酯（7.5：2.5） （二）、聚酰胺薄層色譜（二）、聚酰胺薄層色譜-遵循氫鍵吸附原理遵循氫鍵吸附原理 適用范圍廣，特別適合于分離含游離適用范圍廣，特別適合于分離含游離ph-OH的黃酮類及其苷類。由于聚酰胺對(duì)黃酮類化合物的黃酮類及其苷類。由于聚酰胺對(duì)黃酮類化合物吸附能力較強(qiáng)，因而展開劑需要較強(qiáng)的極性，

37、在吸附能力較強(qiáng)，因而展開劑需要較強(qiáng)的極性，在大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。 常用的展開劑：乙醇常用的展開劑：乙醇-水（水（3：2） 丙酮丙酮-水（水（1：1） 乙醇乙醇-醋酸（醋酸（100：2） 當(dāng)用有機(jī)溶劑展開時(shí)當(dāng)用有機(jī)溶劑展開時(shí)遵循正相分配原理遵循正相分配原理 氯仿氯仿-甲醇（甲醇（4：1）（三）、紙層析色譜（三）、紙層析色譜-液液液分配液分配 1、適用范圍、適用范圍適用于分離各種天然黃酮類適用于分離各種天然黃酮類化合物及其苷類的混合物化合物及其苷類的混合物 2、常用方法、常用方法 （1）、雙向色譜法）、雙向色譜法 （2）、單向色譜法）、單向色譜法 3、展開劑

38、、展開劑第一向展開劑第一向展開劑某種醇性溶劑某種醇性溶劑(正相分配原理正相分配原理) BAW系統(tǒng)：正丁醇系統(tǒng)：正丁醇-醋酸醋酸-水水 =4：1：5 上層上層 （n-BuOH-HAC-H2O，正丁醇層）（最常用）正丁醇層）（最常用） TBA系統(tǒng)：叔丁醇系統(tǒng)：叔丁醇-醋酸醋酸-水水 =3：1：1 上層上層 （t-BuOH-HAC-H2O）及水飽和及水飽和n-BuOH溶液溶液 第二向展開劑第二向展開劑-水或水溶液水或水溶液(反相分配原理反相分配原理) 2%6% HAC 、 3 NaCl、 HAC-HCl-H2O=（30：3：10） 苷元苷元醇性溶劑或用醇性溶劑或用 C6H6-HAC-H2O=(125

39、:72:3) CHCl3-HAC-H2O=(13:6:1) Ph-OH-H2O=(4:1) HAC-HCl-H2O=(30:3:3) 花色苷及花色苷苷元花色苷及花色苷苷元含含HCl或或HAC的溶液的溶液作為展開劑作為展開劑4、顯色劑、顯色劑 （1）、直接在紫外光下觀察熒光）、直接在紫外光下觀察熒光 （2）、氨蒸氣熏后斑點(diǎn)顏色變化）、氨蒸氣熏后斑點(diǎn)顏色變化 （3）、噴以）、噴以2AlCl3（甲醇）溶液甲醇）溶液 ，觀察顏色，觀察顏色或熒光變化或熒光變化 （4）、）、1FeCl3-1K3Fe(CN)6=(1:1 )5、展開結(jié)果展開結(jié)果 第一向展開（醇性溶劑）第一向展開（醇性溶劑） Rf值：苷元值：

40、苷元單糖苷單糖苷雙糖苷雙糖苷 第二向展開（水性溶劑）第二向展開（水性溶劑） Rf值：苷值：苷苷元苷元第一向展開第一向展開醇性溶劑醇性溶劑 苷類：化合物極性大，在流動(dòng)相中的分配比苷類：化合物極性大，在流動(dòng)相中的分配比小，小， Rf值??；值?。?苷元：親脂性大，在流動(dòng)相中的分配比大，苷元：親脂性大，在流動(dòng)相中的分配比大， Rf值大；值大；第二向展開第二向展開水性溶劑水性溶劑 苷類：化合物極性大，在流動(dòng)相中的分配比苷類：化合物極性大，在流動(dòng)相中的分配比大，大， Rf值大；值大； 苷元：親脂性大，在流動(dòng)相中的分配比小，苷元：親脂性大，在流動(dòng)相中的分配比小， Rf值??；值小； 二、紫外及可見光譜在黃酮類

41、鑒定中的應(yīng)用二、紫外及可見光譜在黃酮類鑒定中的應(yīng)用 一般程序一般程序 1、樣品在甲醇溶液中的、樣品在甲醇溶液中的UV光譜光譜 2、樣品在甲醇溶液中加入各種診斷試劑后得到的、樣品在甲醇溶液中加入各種診斷試劑后得到的UV及可見光譜及可見光譜 3、苷類經(jīng)水解后，或甲基化后再水解，可測(cè)定苷元、苷類經(jīng)水解后，或甲基化后再水解，可測(cè)定苷元或其衍生物的或其衍生物的UV光譜光譜 （一）、黃酮類化合物在甲醇溶液中的（一）、黃酮類化合物在甲醇溶液中的UV光譜特征光譜特征 1、黃酮、黃酮醇等多數(shù)黃酮類化合物，因分子中、黃酮、黃酮醇等多數(shù)黃酮類化合物，因分子中存在桂皮酰基及苯甲?；M成的交叉共軛體系，其甲存在桂皮?；?/p>

42、及苯甲?；M成的交叉共軛體系，其甲醇溶液存在兩個(gè)主要的醇溶液存在兩個(gè)主要的UV吸收帶吸收帶 桂皮酰系統(tǒng)桂皮酰系統(tǒng)-帶帶 波長(zhǎng)長(zhǎng)波長(zhǎng)長(zhǎng) 苯甲酰系統(tǒng)苯甲酰系統(tǒng)-帶帶 波長(zhǎng)短波長(zhǎng)短（1）、黃酮和黃酮醇類）、黃酮和黃酮醇類 黃酮黃酮 黃酮醇黃酮醇 帶帶MeOH 帶帶MeOH nm nm黃酮黃酮 220280nm 304350nm（350nm）黃酮醇黃酮醇 220280nm 352385nm（紅移）紅移）黃酮醇黃酮醇C3-O-苷苷 328 359nm（紫移）紫移）木犀草素木犀草素 349nm（黃酮）黃酮）槲皮素槲皮素 370nm（黃酮醇）黃酮醇）OOOOOH（2）、取代基對(duì)）、取代基對(duì)UV光譜的影響光譜

43、的影響 B環(huán)取代的環(huán)取代的-OH，主要影響帶主要影響帶表表 5-7 幾種羥基黃酮類化合物的紫外吸收光譜（帶幾種羥基黃酮類化合物的紫外吸收光譜（帶） 化化 合合 物物 帶帶（MeOH ，nm ） max3,5,7-三羥基黃酮（高良姜素）三羥基黃酮（高良姜素） 3593,5,7,4 -四羥基黃酮（山奈酚）四羥基黃酮（山奈酚） 367 紅移紅移3,5,7,3 ,4 -五羥基黃酮（槲皮素）五羥基黃酮（槲皮素） 3703,5,7,3 ,4 ,5 -六羥基黃酮（楊梅素）六羥基黃酮（楊梅素） 374 A環(huán)取代的環(huán)取代的-OH，主要影響帶主要影響帶表表 5-8 幾種羥基黃酮類化合物的紫外吸收光譜（帶幾種羥基黃

44、酮類化合物的紫外吸收光譜（帶） 化化 合合 物物 帶帶（MeOH ，nm ） max 黃酮黃酮 250 7-羥基黃酮羥基黃酮 252 紅移紅移 5-羥基黃酮及羥基黃酮及5,7-二羥基黃酮二羥基黃酮 262 5,6,7-三羥基黃酮三羥基黃酮 274 5,7,8-三羥基黃酮三羥基黃酮 281 依據(jù)帶依據(jù)帶、 的峰位及形狀，初步推斷黃酮及黃酮的峰位及形狀，初步推斷黃酮及黃酮醇母核上羥基取代基的數(shù)目及取代模式醇母核上羥基取代基的數(shù)目及取代模式2、查耳酮及橙酮類、查耳酮及橙酮類 查耳酮和橙酮類兩者的苯甲酰系統(tǒng)完整，且兩者接近查耳酮和橙酮類兩者的苯甲酰系統(tǒng)完整，且兩者接近 帶帶很強(qiáng)，為主峰；很強(qiáng)，為主峰；

45、 帶帶較弱較弱 ，為次強(qiáng)峰，為次強(qiáng)峰 （有色物質(zhì)）（有色物質(zhì)） 查耳酮查耳酮 橙酮橙酮 帶帶MeOH 帶帶MeOH nm nm 查耳酮查耳酮 220270nm a 340390nm b 300320nm橙酮橙酮 370430nm 388413nm（天然來(lái)源的橙酮）天然來(lái)源的橙酮） (紅移厲害紅移厲害) OOHOCHO3、異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類、異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類 苯甲酰系統(tǒng)完整，帶苯甲酰系統(tǒng)完整，帶強(qiáng)，桂皮酰系統(tǒng)中強(qiáng)，桂皮酰系統(tǒng)中 B 環(huán)不與環(huán)不與吡喃酮環(huán)上的羰基共軛，帶吡喃酮環(huán)上的羰基共軛，帶很弱（肩峰或無(wú)峰）很弱（肩峰或無(wú)峰） 異黃酮異黃酮 二氫黃酮二氫黃酮 二氫黃酮醇

46、二氫黃酮醇 帶帶MeOH 帶帶MeOH nm nm異黃酮類異黃酮類 245270nm 304350nm二氫黃酮二氫黃酮 270295nm 352385nm（醇）類（醇）類OOOOOOOH (二二)、加入診斷試劑后引起的位移及其在結(jié)構(gòu)、加入診斷試劑后引起的位移及其在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的意義測(cè)定中的意義掌握黃酮、黃酮醇掌握黃酮、黃酮醇 1、診斷試劑、診斷試劑- NaOMe NaOAC AlCl3 H3BO3 2、加入診斷試劑后黃酮類化合物加入診斷試劑后黃酮類化合物UV圖譜及結(jié)構(gòu)特征歸屬圖譜及結(jié)構(gòu)特征歸屬（1）NaOMe （甲醇鈉）甲醇鈉） -主要影響帶主要影響帶 （推斷（推斷C3 或或C4-OH ） A、對(duì)帶對(duì)帶的影響的影響 a、紅移紅移 4060nm，且強(qiáng)度不降（增加）且強(qiáng)度不降（增加） C4-OH b、 紅移紅移 5060nm，且強(qiáng)度下降且強(qiáng)度下降 C3