菌落總數(shù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、檢驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)名稱： 菌落總數(shù)的檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法：平板計(jì)數(shù)法商品名稱：夸夸唔、有友、奇爽、樂棒棒、香豬脆、香脆肚。參照標(biāo)準(zhǔn)： GB4789-17 2011總負(fù)責(zé)人：熊經(jīng)理檢驗(yàn)人員 : 徐恒琴、崔艷霞、游惠檢驗(yàn)時(shí)間： 2011 年 7 月 26 8 月 6 號(hào)2011 年 8 月 8 日菌落總數(shù)的檢測(cè)平板計(jì)數(shù)法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑榱诉M(jìn)一步了解與熟悉我們產(chǎn)品的操作規(guī)范和關(guān)鍵點(diǎn)的控制，掌握菌落總數(shù)的檢驗(yàn)方法和了解超凈工作臺(tái)的操作規(guī)范。二、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備和所需試劑及試劑的配制。1 、實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備殺菌鍋YXQ LS SU 編號(hào) 5090、 無菌超凈工作臺(tái)SW CJ IC 編號(hào) 24、JJ-Z 型組織搗碎機(jī)、隔水或智

2、能恒溫培養(yǎng)箱GHP 9080、出廠編號(hào)13475、烘箱ZFD 5040（全自動(dòng)型鼓風(fēng)干燥箱） 、蒸餾水制備機(jī)、滅菌過的250ml錐形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精燈、錐形瓶1000ml、培養(yǎng)皿、電子天平 AL104電磁爐、車鍋鏟、PH試紙、恒溫水浴鍋 HH 4 出廠標(biāo)號(hào)。2、試驗(yàn)試劑及配制主要試劑：瓊脂、無菌生理鹽水、無菌水、75%勺酒精、1moL/L氫氧化鈉、1moL/L 的鹽酸。藥品試劑瓊脂： 準(zhǔn)確稱取胰蛋白胨、 酵母浸膏、 葡萄糖、 瓊脂、 蒸餾水 2500ml，加入至鍋中煮沸溶解， 先加入瓊脂將其熬化， 在加入其它樣品， 直至樣品熬化即可關(guān)掉火，冷卻后調(diào)解 PH值（左右即可）

3、。酸性用氫氧化鈉調(diào)節(jié)、堿性用鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)，將在1200c高壓滅菌15min即可。無菌生理鹽水：準(zhǔn)確稱取氯化鈉溶于 1000ml 蒸餾水中。無菌水：吸取1000ml的蒸儲(chǔ)水，將在1200c高壓滅菌15min即可。1moL/L 氫氧化鈉：稱取40g 的氫氧化鈉溶于 1000ml 的蒸餾水中在1200c高壓滅菌15min即可。75%的酒精：分別吸取 400ml 的 95%的無水乙醇和100ml 的蒸餾水與500ml 的容量瓶中。1moL/LDE鹽酸：移取濃鹽酸90ml,用蒸儲(chǔ)水稀釋至1000m1,在1200c高壓滅菌 15min 即可。三試驗(yàn)步驟1 、樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品置

4、盛有225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min 均質(zhì)1 min2 min ，或放入盛有225 ml 稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min ,制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25 ml 樣品置盛有225 ml 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。 36 ±1 48 h ± 2 h.2、檢樣與接種： 25 g(ml) 樣品 +225 ml 稀釋液，均質(zhì)， 10 倍系列稀釋選擇2個(gè)3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取 1 ml

5、分別加入 無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。用 1 ml 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液 1 ml ，沿管壁緩慢注于盛有9 ml 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面） ，振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。. 按上述操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次 1 ml 無菌吸管或吸頭。.根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2個(gè)3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液） ，在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋時(shí)，吸取1ml 樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取 1 ml 空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)

6、照。3 、倒平板：在酒精燈開著的條件下進(jìn)行到培養(yǎng)皿的3分之一即可，而其中瓊脂的溫度需要在46即可倒入瓊脂，不然會(huì)影響其細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻 .4、培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)， 36 ± 1 培養(yǎng) 48 h ±2 h 。水產(chǎn)品 30 ± 1 培養(yǎng) 72 h ±3 h 。如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約 4 ml ） ，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，5 、報(bào) 告6 . 菌落計(jì)數(shù)可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。 菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（ colon

7、y-forming units ，CFU表示。6. 1選取菌落數(shù)在30 CFU300 CFU之間、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于 30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300CFU 的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。6. 2 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。7. 3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。8. 結(jié)果與報(bào)告菌落總數(shù)的計(jì)算方法若只有一個(gè)稀釋度平板上

8、的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g（ ml ）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（ 1）計(jì)算：N= EC/（Ni+d （ 1）式中：N樣品中菌落數(shù)；2C-平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n2-第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù);第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。上述數(shù)據(jù)按數(shù)字修約后，表示為 25000或X 104。若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300 CFU,則對(duì)稀釋度最 高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所

9、有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30 CFU,則應(yīng)按稀釋度最低 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長(zhǎng)，則 以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 30 CFU300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU時(shí)，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。菌落總數(shù)的報(bào)告菌落數(shù)小于100 CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù) 報(bào)告。菌落數(shù)大于或等于100 CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入” 原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù) 形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用

10、兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。四、數(shù)據(jù)處理及結(jié)果計(jì)算一、樂棒棒菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白1細(xì)菌菌落數(shù)2細(xì)菌菌落數(shù)3細(xì)菌菌落數(shù)100373938100058010000000若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g(ml)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以：N=37+38+39/3 X 10N=380 個(gè)/g二、奇爽菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白1231002672812

11、95100044342910000406若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式(1)計(jì)算：N=EC/(Ni+d ( 1)式中:N樣品中菌落數(shù)；2C-平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和;ni第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。N=267+281+295+44+34+29/（3+X 3） X 10N=2879個(gè)/g三、香豬脆菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析結(jié)果1稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100576034100012感雜410000001若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以

12、相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g（ml）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以：N=57+60+34/3 X 10N= 503個(gè)/g結(jié)果2稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100576034100012感雜410000001若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩 個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 (ml)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以：N=36+35+12/3 X 10N=243個(gè)/g四、夸夸唔菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白12310045233665010005311884100001587若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以

13、相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每(ml)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以：N=53+118+84/3 X 100N= 8500五、有友菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白1231001721000感雜感雜010000000只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g (ml)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。所以：N=1+7+3/3 X 10N=33個(gè)/g六、香脆肚菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)分析稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)空白123100131444376100015812113610000434755若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（ 1）計(jì)算：1）N= EC/(Ni+d式中：N樣品中菌落數(shù)；2C-平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；ni第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。-1N=158+121+136+43