消滯胃寧治療慢性萎縮性胃炎及伴發(fā)胃癌癌前期病變的藥理實驗研究

1、消滯胃寧治療慢性萎縮性胃炎及伴發(fā)胃癌癌前期病消滯胃寧治療慢性萎縮性胃炎及伴發(fā)胃癌癌前期病變的藥理實驗研究變的藥理實驗研究 論文論文關(guān)鍵字：給藥 大鼠 實驗 影響 正常 黏膜 小鼠 萎縮性胃炎 對照組胃寧作者:苑偉，徐培元，趙建邦，馬迎春，楊芳【摘要】【摘要】目的目的觀察中藥消滯胃寧對大鼠慢性萎縮性胃炎（CAG）及胃癌前期病變（PLGC）動物模型胃黏膜血流量（GMBF）及其病變逆轉(zhuǎn)治療作用。觀察消滯胃寧的鎮(zhèn)痛、抗炎作用和對免疫功能的影響。方法方法在大鼠 CAG 及 PLGC動物模型中，用激光多普勒血流計測定大鼠 CAG 和 PLGC 的 GMBF，同時對各組CAG 和 PLGC 的進行了病理組織

2、學(xué)檢查；鎮(zhèn)痛實驗采用小鼠冰醋酸扭體法、熱板法、恒溫水浴甩尾法；抗炎實驗使用二甲苯所致小鼠耳腫脹、小鼠毛細血管滲透性實驗；免疫實驗采用小白鼠碳粒廓清實驗和小鼠血清溶血素實驗。結(jié)結(jié)果果大鼠慢性萎縮性胃炎及胃癌前期病變動物模型實驗中，經(jīng)消滯胃寧 50 天的治療，高劑量組大鼠便溏消失，動物體重較模型對照組增加明顯，模型組較正常組 GMBF 明顯減少，各治療組均可降低 GMBF，消滯胃寧高、中、低劑量組大鼠的胃組織病變得到了明顯改善。鎮(zhèn)痛實驗表明：消滯胃寧能減少小鼠冰醋酸扭體次數(shù)；提高小鼠熱板痛閾值；能延長小鼠恒溫水浴甩尾時間?？寡讓嶒灡砻鳎合麥笇帨p輕二甲苯所致小鼠耳腫脹度；抑制小鼠毛細血管滲透性的增

3、加。免疫實驗表明：消滯胃寧能明顯提高單核細胞的吞噬功能；增加小鼠血清溶血素含量。結(jié)論結(jié)論消滯胃寧能提高 GAC 和 PLGC 胃黏膜血流量，改善組織病理；消滯胃寧具有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，并能提高機體免疫力。【關(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】消滯胃寧；慢性萎縮性胃炎；胃癌前期病變；胃黏膜血流量；鎮(zhèn)痛；抗炎；免疫ExperimentalExperimental researchresearch ofof effecteffect ofof XiaozhiXiaozhi weiningweining onon chronicchronicatrophicatrophic gastritisgastritis a

4、ndandprecancerousprecancerous lesionslesions ofof gastricgastric cancercancer【AbstractAbstract】ObjectiveObjectiveTo explore the effect of Xiaozhiweining on GMBF in rats with atrophic gastritis and precancerouslesions of gastric cancer and to study its therapeutic effects，toexplore Xiaozhi weining on

5、 pharmacodynamic action of anti-inflammation and alleviating pain，and impact on immunefunction.MethodsMethodsA complex method was used to establish the modelthat was stimulating the various factors to cause flow meter.The dateof different groups were analyzed and compared.The mixturespharmacodynamic

6、 action was measured by observing its effect ontorsiversion malpositionmice with pain induced by ice acetic.Onthose with pain induced by hot board，therm ostatical water bath toget rid of the tail law experimentally；Resist inflammationexperiment use rats ear swelling，rats capillary permeabilityexperi

7、ment induced by injecting ice acetic into mice abdominal；Theimmune experiment uses rats clear exp- eriment ofcarbon.ResultsResultsThe experimental PLGC have lower ，Xiaozhi weiningincreased the GMBF. Xiaozhi weining can modulate this state andimprove the various pathological manifestations of CAG and

8、PLGC.ConclusionConclusionXiaozhi weining had effect of anti-inflammation andalleviating pain，and can improve the organisms immune function.【KeyKey wordswords】Xiaozhi weining；chronic atrophic gastritis；precancerous lesions of gastric cancer；gastric mucosia blood flows；alleviating pain；anti-inflammati

9、on；immune應(yīng)用中醫(yī)藥防治慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是我國醫(yī)藥的優(yōu)勢所在1。消滯胃寧是在臨床應(yīng)用幾十年后總結(jié)出的的臨床驗方，由黃芪、丹參、枳殼、石菖蒲等多味中藥組成的純中藥制劑，具有健脾益氣，理氣合胃，化瘀解毒之功效。主治脾虛氣滯型慢性萎縮性胃炎及伴發(fā)胃癌癌前期病變。為進一步研究該方的療效及機制，本文重點觀察消滯胃寧對大鼠慢性萎縮性胃炎及胃癌前期病變動物模型的影響，同時對其鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫作用進行探討。1 1實驗材料實驗材料1.11.1實驗動物Wistar 大鼠，雄性，體重（22020）g，由蘭州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，均在我所動物實驗

10、室作 2 天適應(yīng)性飼養(yǎng)后進入本研究；健康昆明種、BALB/c 小鼠由蘭州大學(xué)動物中心提供，動物合格證號為：甘肅省動物管委會 14-002(普)。動物實驗合格證：甘肅省醫(yī)學(xué)動物管委會（普）-005。1.21.2受試物消滯胃寧浸膏粉，由甘肅省藥品檢驗所藥理室提供，臨用前根據(jù)需要配制成不同濃度的混懸液；陽性對照藥溫胃舒顆粒，合肥神鹿雙鶴藥業(yè)生產(chǎn)，批號 0404005。1.31.3實驗儀器GJ-8402 型熱板儀；751-GW 分光光度計，惠普上海分析儀器有限公司生產(chǎn)；METTLER AE240 電子天平；激光多普勒血流計由南開大學(xué)電子儀器廠生產(chǎn)。1.41.4統(tǒng)計學(xué)方法各組數(shù)據(jù)以 xs 表示，組間進行

11、 t 檢驗，P0.05為差異有顯著性，P0.01 為差異有非常顯著性。2 2實驗方法與結(jié)果實驗方法與結(jié)果2.12.1對大鼠慢性萎縮性胃炎及胃癌前期病變動物模型的影響2Wistar 大鼠 60 只，全部雄性，體重（22020）g ，每只大鼠足底注射佐劑抗原（同種大鼠胃黏膜漿與 Freund 佐劑以 1：1 配成乳劑）0.3ml/次，1次/4w，共 2 次，去氧膽酸自由飲水，濃度為 20mmol/L。豬膽汁離心后置-20冰箱備用，使用前溶解至冰水混合物，抽取液體部分，按 12.5ml/kg 給大鼠皮下注射，1 次/d，共 90 天。饑飽失常：2 天喂食，1 天停食，保證足量，自由飲水。60 只大鼠

12、隨機分為 6 組，每組 10 只，以下 4 組在造模 90 天均連續(xù)用消滯胃寧和陽性對照藥溫胃舒顆粒灌胃 50 天，其劑量分別為：消滯胃寧低劑量5.13g/kg；消滯胃寧中劑量 10.25g/kg；消滯胃寧高劑量組 20.50g/kg；陽性藥對照組 5.16g/kg，各組在給藥期間記錄動物一般情況和質(zhì)量變化。給藥結(jié)束后，各組大鼠禁食 24h，自由飲水，用 10g/L 戊巴比妥鈉（40mg/kg）麻醉后，打開腹腔，沿胃大彎側(cè)作一 0.815cm 切口，將胃內(nèi)容物沖洗干凈，將多普勒血流計光纖探頭輕放于胃小彎黏膜上，保持中等壓力而沒有距離，多普勒血流計頻移范圍為 57kHz，時間常數(shù)選 1s，量程選

13、 X1，用特制的外徑 2.8mm，長2m 的光纖探頭，輸出功率1mW，測定范圍為半徑 1.5mm 半球形體微區(qū)；血流量單位用多普勒信號的電壓值“u”表示，試驗開機預(yù)熱 30min，并調(diào)零后進行測定。測定后殺檢各組大鼠，摘除大鼠胃，沿胃大彎剪開，生理鹽水中洗凈胃黏膜，肉眼觀察胃黏膜大體情況后固定于 10 甲醛液中，供病理組織鏡檢。2.22.2結(jié)果2.2.12.2.1大鼠體質(zhì)量的變化正常組在整個試驗過程中，未出現(xiàn)便溏，模型組均出現(xiàn)便溏，各治療組便溏有不同程度轉(zhuǎn)好，其中高劑量組大鼠便溏消失，陽性對照組大鼠的便溏也有一定的改善。模型組質(zhì)量增長逐漸減慢，在給藥后 25 天及給藥 50 天明顯低于正常對照

14、組及治療組（P0.050.01），給藥 50 天后消滯胃寧治療組體質(zhì)量較陽性對照組明顯重，結(jié)果見表 1。表表 1 1各組大鼠體質(zhì)量變化各組大鼠體質(zhì)量變化（g g，x xs s，n=10=10）注：與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01；與正常對照組比較，P0.012.2.22.2.2胃黏膜組織病理觀察正常組：上皮細胞及腺體排列整齊，大小形狀一致，細胞呈單層柱狀，胞質(zhì)透明或空泡狀，腺上皮與腺管分界清楚，固有腺及黏膜無擴張淤血，黏膜肌層無增生。模型組：胃黏膜層變薄，固有腺體數(shù)量減少；個別腺體上皮細胞增生，可見腸上皮化生，細胞體積較大、核大、深染，有大而紅染的核仁，病理性核分離像可見。間質(zhì)有少

15、量淋巴細胞、嗜酸性粒細胞浸潤，于黏膜上皮表面可見多量幽門螺桿菌。治療組：消滯胃寧高、中、低組：胃黏膜層變薄，固有腺體數(shù)量減少，間質(zhì)有少量淋巴、嗜酸性粒細胞浸潤，無明顯壞死、表現(xiàn)為淺表性胃炎或接近正常組織，黏膜上皮表面有極少量幽門螺桿菌。2.2.32.2.3胃黏膜血流量模型組較正常組 GMBF 明顯減少，各治療組均可高降低的 GMBF，消滯胃寧高、中、低劑量組優(yōu)于陽性對照組。結(jié)果見表 2。表表 2 2對胃黏膜血流量的影響對胃黏膜血流量的影響（U U，x xs s，n=10=10）注：與模型對照組比較，*P0.001，*P0.012.32.3鎮(zhèn)痛作用32.3.12.3.1對小鼠冰醋酸扭體法的影響取

16、健康昆明種小鼠 50 只，體重1822g，雌雄各半，隨機分為 5 組，連續(xù)灌胃 3 天，于末次給藥 30min 后，每鼠腹腔注射 0.6%冰醋酸 0.2ml/只，記錄注射冰醋酸 15min 內(nèi)各鼠因疼痛產(chǎn)生扭體的次數(shù)，結(jié)果見表 3。表表 3 3對小鼠冰醋酸扭體法的影響對小鼠冰醋酸扭體法的影響（n1010）注：與正常對照組比較，*P0.001，*P0.012.3.22.3.2對小鼠熱板法痛閾值的影響取健康雌性昆明種小鼠 50 只，體重 1822g，分組給藥劑量見表 2，連續(xù)灌胃 3 天，于末次給藥 30min 后，將小鼠放于 50的熱板儀上，以小鼠“舔”后足作為“疼痛”的反應(yīng)指標，觀察記錄小鼠從

17、放置到熱板上到小鼠因熱痛而舔后足之間的時間（為熱板痛反應(yīng)時間），結(jié)果見表 4。表表 4 4對小鼠熱板法痛閾值的影響對小鼠熱板法痛閾值的影響（n1010）注：與正常對照組比較，*P0.05，*P0.12.3.32.3.3對小鼠甩尾次數(shù)的影響取健康昆明種小鼠 50 只，體重1822g，分組給藥劑量見表 3，連續(xù)灌胃 3 天，于末次給藥 30min 后，將小鼠放于 41的恒溫水浴中，以小鼠從放入水浴至甩尾作為反應(yīng)指標，觀察并記錄小鼠自放置到水浴中至甩尾所用的時間，結(jié)果見表 5。表表 5 5對小鼠甩尾次數(shù)的影響對小鼠甩尾次數(shù)的影響（n n1010）注：與正常對照組比較，*P0.01，*P0.12.42

18、.4抗炎作用42.4.12.4.1對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響取健康雄性昆明種小鼠 50只，體重 2224g，隨機分為 5 組，按表 4 所示劑量灌胃給藥，每日 1 次，連續(xù) 3 次，于末次給藥后立即將小鼠右耳涂二甲苯 30l 致炎，于致炎后 1.5h 將小鼠處死，沿耳根剪下雙耳，用 7mm 的打孔器打孔，將耳片在萬分之一的天平上稱重，用兩耳片的差值表示腫脹度，結(jié)果見表 6。表表 6 6對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（n1010）注：與正常對照組比較，*P0.001，*P0.012.4.22.4.2對小鼠毛細血管滲透性的影響上述各組小鼠給藥 30min后，每鼠立即尾靜

19、脈注入 1%伊文思蘭溶液 0.1ml/10g，立即腹腔注入 0.6%的冰醋酸溶液 0.15ml/10g，30min 后處死，將各鼠腹腔上皮打開，向腹腔注入 7ml0.9%的氯化鈉溶液，充分在腹腔內(nèi)混勻，用注射器將注入的腹腔溶液吸出，過濾，放入試管中，用 751-GW 分光光度計于 590nm 處測光密值，結(jié)果見表 7。表表 7 7對小鼠毛細血管滲透性的影響對小鼠毛細血管滲透性的影響（n1010）注：與正常對照組比較，*P0.001，*P0.012.52.5免疫作用52.5.12.5.1對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響取健康昆明種小鼠 50只，體重 1822g，隨機分為 5 組，按表 8 所示劑

20、量灌胃給藥，每日 1 次，連續(xù) 4 次。給藥結(jié)束后尾靜脈注射印度墨汁 0.1ml/10g，注射后分 2min、12min用微量移液器分別經(jīng)眼后靜脈叢取血 20l，溶于 0.1%的碳酸鈉溶液 2ml 中，搖勻，751-GW 分光光度計中于 600nm 下比色，測定光密度。計算廓清指數(shù) K，根據(jù)各組 K 值，進行組間 t 檢驗，結(jié)果見表 8。表表 8 8對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響對小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的影響（n1010）注：與正常對照組比較，*P0.001，*P0.012.5.22.5.2對小鼠血清溶血素的影響取健康 HIC 小鼠 50 只，雌雄各半隨機分為 5 組，即：生理鹽水對照組、

21、陽性藥貞芪扶正沖劑對照組、消滯胃寧高、中、低劑量組。每組 10 只。各組小鼠連續(xù)給藥 7 天，于給藥第 2 天腹腔注射 5羊紅細胞 0.2m/只。末次給藥后 0min，眼眶后靜脈取血，離心取血清，以生理鹽水將血清稀釋 100 倍。取稀釋血清 1ml 與 5%羊紅細胞懸液0.5ml、10豚鼠補體血清 0.5ml 混合，在 37恒溫反應(yīng) 30min，0冰箱中終止反應(yīng)，離心取上清，在 751-GW 分光光度計 540nm 處測定吸收度 A 值。以不加血清的空白對照管上清液作對照比色。結(jié)果見表 9。表表 9 9對小鼠溶血素的影響對小鼠溶血素的影響（n1010）注：與正常對照組比較，*P0.001，*P0.013 3討論討論慢性萎縮性胃炎（簡稱 CAG）是一種甚為常見的消化道胃黏膜慢性炎癥及腺體萎縮的疾病，往往并發(fā)異性增生及腸上皮化生，病期較長，反復(fù)發(fā)作，目前在臨床上西醫(yī)無特效療法。中醫(yī)認為，萎縮性胃炎多屬正虛和脾氣陰虛，在正虛的情況下，瘀毒為患，或毒腐成瘍，或瘀結(jié)成結(jié)，或氣滯濕聚痰結(jié)，最后形成惡性腫瘤。中醫(yī)對癌前病變的治療，是通過健脾益氣，養(yǎng)陰清熱，解毒散結(jié)，活血化瘀和酸甘化陰，不僅能改善癥狀，而且能阻斷和逆轉(zhuǎn)其癌變。因此，中醫(yī)對治療萎縮性胃炎及伴發(fā)胃癌癌前期