畢赤酵母發(fā)酵罐發(fā)酵資料講解

1、畢赤醉母發(fā)醉罐發(fā)酹精品文檔微生物發(fā)酪罐發(fā)酪（畢赤酪母）滅菌前：室溫下校準(zhǔn)PH電極，先校6.86零點(diǎn)再4.0斜率（若的發(fā)酵pH很長(zhǎng)時(shí)間是酸性的（如酵母發(fā)酵）用6.86校正零點(diǎn)，4.0校正斜率；若你的發(fā)酵pH很長(zhǎng)時(shí)間是堿性的（如某些細(xì)菌發(fā)酵）用 6.86校正零點(diǎn)，9.18校正斜率）；室溫下校準(zhǔn)溶氧電極，1.0點(diǎn)在不接溶氧電極時(shí)候標(biāo)定，100%點(diǎn)接上溶氧電極，放置在空氣中較定；或2.0點(diǎn)在滅菌過(guò)程中，溫度達(dá)到121度左右壓力0.12mpa左右時(shí)候標(biāo)定，100%在滅菌結(jié)束，降溫至發(fā)酵溫度并穩(wěn)定，轉(zhuǎn)速在發(fā)酵初始轉(zhuǎn)速，通氣量在發(fā)酵初始通氣量時(shí)候標(biāo)定滅菌:1 .滅菌，先將各排氣閥打開(kāi)，將蒸汽引入夾套或蛇管進(jìn)

2、行預(yù)熱，待罐溫升至 8090C,將排氣閥逐漸關(guān)小。接著將蒸汽從進(jìn)氣口、排料口、取樣口直接通入 罐中（如有沖視罐也同時(shí)進(jìn)汽），使罐溫上升到118120C,罐壓維持在0.090.1Mpa （表壓）,并保持30min左右。2 .保溫結(jié)束后，依次關(guān)閉各排汽、進(jìn)汽閥門，待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后，向罐內(nèi)通入無(wú)菌空氣，在夾套或蛇管中通冷卻水降溫，使培養(yǎng)基的溫度降到所需 的溫度，進(jìn)行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。（注意壓力：滅菌時(shí)，總蒸汽管道壓力要求不低于 0.30.35Mpa,使用壓力不 低于0.2Mpa滅菌后：A.消耗甘油階段1 .滅菌后冷卻30c時(shí):2 .冷卻至30c時(shí)，開(kāi)啟攪拌（轉(zhuǎn)速最大）和通氣（0.1-1.0

3、vvm），接通28%R水（未稀釋）調(diào)PH5.0;每升加4.35ml的無(wú)菌PTM1S礎(chǔ)鹽；3 .從搖瓶中接種種子液，DOfi為100%開(kāi)始培養(yǎng)后會(huì)消耗，導(dǎo)致 DO值下降，通氧氣以確保DO值超過(guò)20%,速率先為0.1vvm。4 .發(fā)酵過(guò)夜甘油被完全消耗（18-24h）,標(biāo)志為DO值增加到100%。【每天至少兩次取樣，測(cè)OD600,濕重，顯微觀察.將菌體和上清（離心后）在-80C下保藏，用于后面的分析?！? .這個(gè)階段所期望達(dá)到的細(xì)胞產(chǎn)量為90-150g/L濕細(xì)胞。重組蛋白質(zhì)不產(chǎn)生。B.甘油補(bǔ)料階段1 .將12ml/L PTM1加入50%VVM的甘油中，將補(bǔ)料速率設(shè)為 18.15ml每小時(shí)每 升初試

4、發(fā)酵液體積。2 .甘油補(bǔ)料將進(jìn)行約4h或更長(zhǎng)。在本階段完成后 細(xì)胞產(chǎn)量應(yīng)達(dá)到180-220g/L濕 細(xì)胞，但是不會(huì)有重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)生?！?%甘油的是所建議的在補(bǔ)料中的最大水平，更高的甘油濃度將會(huì)產(chǎn)生毒害問(wèn)題?！恐匾?如果溶氧低于20%,應(yīng)該停止甘油或甲醇的補(bǔ)料并且不做任何提高溶氧的 事直到溶氧穩(wěn)定。這時(shí)開(kāi)始調(diào)整攪拌、通氣、壓力或氧氣的補(bǔ)充。有報(bào)道稱如果培養(yǎng)基的 pH低于30,中性蛋白酶會(huì)被抑制。故如果有必要可設(shè) 為3.0保持4-5h甘油補(bǔ)料階段。甲醇補(bǔ)料培養(yǎng)在甲醇補(bǔ)料前甘油都必須消耗干凈。1.12mlPTM1基本鹽類每升的100%的甲醇進(jìn)行誘導(dǎo)。速率為3.6ml/h每升初試發(fā)酵液體積。開(kāi)始的2

5、-3h內(nèi)甲醇會(huì)在發(fā)酵液中累積，溶氧值會(huì)有變化。2 . DO值不能維持在20%以上，停止流加甲醇，等到DO值穩(wěn)定后繼續(xù)以當(dāng)前速率流加甲醇。增加攪拌、通氣、壓力或者氧氣的 補(bǔ)充來(lái)使DO維持在20%以 上。do值會(huì)一直變化。件3 .當(dāng)培養(yǎng)物完全適應(yīng)利用甲醇 （2-4h）并且甲醇成為其限制性生長(zhǎng)因子后，將會(huì) 有一個(gè)穩(wěn)定的DO讀數(shù)和一個(gè)較快的DO穩(wěn)定時(shí)間點(diǎn)（通常不到1min）。在培 養(yǎng)物適應(yīng)甲醇后而將流加速率翻倍前在限制條件下保持這個(gè)較低的流加速率最少出。然后流加速率增加一倍到約7.3mji/h而而始發(fā)酉臉衛(wèi)A2h）4 .調(diào)10.9 ml/h到最后。5 .一共加入接近740ml,約70h。細(xì)胞濃度會(huì)最終增加到 350-450g/L濕細(xì)胞。YPD（100ml）酵母膏是1g,蛋白陳2g,葡萄糖2g。若固體，再加2g瓊脂粉。自然pH值約5.4,剛好是酵母合適的pH值。一般不需要調(diào)節(jié)pH。LB胰蛋白(T (Tryptone) 10g/L酵母提取物(Yeast extract)5g/L氯化鈉(NaCl) 10g/LNaOH 調(diào)節(jié)