病原性球菌及檢驗

1、二、鏈球菌屬（一）概念鏈球菌屬為觸酶陰性，兼性厭氧，呈圓形或卵圓形的革蘭陽性球菌，在液體培養(yǎng)基中生長時易形成長鏈而表現(xiàn)為沉淀生長（但肺炎鏈球菌為混濁生長）。（二）生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色：革蘭染色陽性。菌體呈圓形，直徑為0.81.0m，呈鏈狀排列，在液體培養(yǎng)基中易成長鏈。在膿汁標本中為短鏈，成雙或單個散在。無鞭毛、無芽胞、某些菌株在血清肉湯中可有莢膜。2.培養(yǎng)特性：本屬細菌大多為需氧或兼性厭氧菌，少數(shù)微需氧及專性厭氧。營養(yǎng)要求較高，在含有腹水的培養(yǎng)基上生長良好。最適溫度為3537，最適pH為7.47.6，在5%C02環(huán)境下生長更好。在血瓊脂平板上，經(jīng)35 1824h培養(yǎng)后可形成灰白色、圓形、凸

2、起、直徑為0.10.75mm細小菌落，菌落周圍出現(xiàn)不同溶血環(huán)。3.生化反應(yīng)：本屬細菌觸酶試驗陰性（與葡萄球菌屬鑒別）4.分類（1）根據(jù)溶血能力分類：利用鏈球菌在血平板上溶血情況分為三類，1）甲型（）溶血性鏈球菌：又稱草綠色鏈球菌。本菌為條件致病菌。2）乙型（）溶血性鏈球菌：通稱溶血性鏈球菌，透明溶血環(huán)。該型細菌致病性最強，常引起人和動物多種疾病。3）丙型（）鏈球菌：無溶血環(huán)。一般無致病性。（2）根據(jù)鏈球菌細胞壁抗原（即C抗原）分類：即常用Lancefield血清分型法，將鏈球菌分為A、B、C、DT等18個群（其中和J缺），對人類有致病性的90%屬A群，B、C、D、G群鏈球菌感染較少見。5.對理

3、化因素的抵抗力：不強。（三）致病性A群鏈球菌：草綠色鏈球菌：屬條件致病菌，常與亞急性心內(nèi)膜炎相關(guān)。B群鏈球菌：是新生兒肺炎、腦膜炎和敗血癥的病原體。D群鏈球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。治療原則：A群鏈球菌感染，青霉素G被列為首選。B群鏈球菌常采用青霉素G和一種氨基糖苷類合用。（四）微生物學(xué)檢驗方法與原理1.標本采集：不同疾病采集不同標本。2.檢驗方法及鑒定（1）直接鏡檢：革蘭染色，鏡檢。如符合鏈球菌的形態(tài)特征可初報。（2）直接檢測抗原。（3）分離培養(yǎng)：血液標本，以無菌操作取兩份血液各810ml，分別注入肉湯培養(yǎng)基，分別置需氧和厭氧環(huán)境中增菌，有細菌生長，然后分別接種于兩個血平板，置需氧和厭氧環(huán)

4、境中培養(yǎng)。膿汁和咽拭標本接種血平板并涂片染色鏡檢，若形態(tài)酷似鏈球菌，并革蘭陽性，可初報。上述的培養(yǎng)物經(jīng)351824h培養(yǎng)后，觀察菌落特征和溶血情況。鏈球菌的菌落通常較小，透明或半透明，似針尖大小、凸起，菌落周圍可出現(xiàn)-溶血或-溶血，也可不出現(xiàn)溶血。然后取可疑菌落經(jīng)涂片、染色鏡檢證實。甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌可產(chǎn)生-溶血，它們的菌落形態(tài)非常相似，應(yīng)予以區(qū)別。豬鏈球菌在羊血平板上為溶血，在兔血平板上呈溶血。（4）鑒定：見生化反應(yīng)。三、肺炎鏈球菌（一）概念肺炎鏈球菌屬鏈球菌科，鏈球菌屬。（二）生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色：革蘭陽性，呈矛頭狀，成雙排列，球菌。有莢膜（在人或動物體內(nèi)易形成），無鞭毛，無

5、芽胞。2.培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧。最適的溫度為3537，最適的pH7.68.0。營養(yǎng)要求較高。在血瓊脂平板上可形成臍狀菌落，周圍有草綠色溶血圈。在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時間過長，可因產(chǎn)生自溶，培養(yǎng)液可變澄清，管底沉淀。3.生化反應(yīng)：菊糖、膽汁溶解試驗陽性、0ptochin敏感試驗陽性。（與草綠色鏈球菌的鑒別。）（三）致病性致病物質(zhì)：莢膜。所致疾病主要有大葉性肺炎、支氣管炎。（四）微生物學(xué)檢驗方法與原理1.標本采集2.試驗方法及鑒定（1）直接涂片檢查：經(jīng)革蘭染色，鏡檢見革蘭陽性矛尖狀雙球菌。（2）分離培養(yǎng)：血液、腦脊液需增菌培養(yǎng)，經(jīng)葡萄糖硫酸鎂肉湯增菌后，肺炎鏈球菌可呈均勻混濁，而且有綠色熒光。無須

6、增菌培養(yǎng)的膿汁或腦脊液沉渣接種于血瓊脂，置5%10%C02環(huán)境中，經(jīng)35 1824h培養(yǎng)后觀察茵落，并取可疑菌落作進一步鑒定。（3）鑒定試驗1）膽汁溶解試驗：陽性。2）菊糖發(fā)酵試驗：陽性。3）動物試驗：小白鼠對肺炎鏈球菌極為敏感。4）莢膜腫脹試驗：陽性。5）0ptochin敏感試驗：陽性。6）快速乳膠凝集試驗陽性。四、腸球菌屬（一）概念腸球菌屬是腸道的正常棲居菌。（二）生物學(xué)形狀為革蘭陽性，成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌，無芽胞，無莢膜，部分腸球菌有稀疏鞭毛。營養(yǎng)要求高，需氧及兼性厭氧，在膽汁七葉苷和含6.5%NaCl培養(yǎng)基中可以生長（此點可與鏈球菌鑒別）。在血平板上主要表現(xiàn)為-和-溶血。觸酶陰

7、性，多數(shù)腸球菌能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）。與同科鏈球菌的顯著區(qū)別在于腸球菌能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（pH9.6）、40%膽汁培養(yǎng)基上和1045環(huán)境下生長，并對許多抗菌藥物表現(xiàn)為固有耐藥。目前，腸球菌是革蘭陽性菌中僅次于葡萄球菌屬的重要醫(yī)院感染病原菌，其所致感染中最常見的為尿路感染，其次為腹部和盆腔等部位的創(chuàng)傷和外科術(shù)后感染。臨床上分離率最高的是糞腸球菌，其次是屎腸球菌。糞腸球菌的某些菌株在馬血、兔血平板上出現(xiàn)溶血。（三）微生物學(xué)檢查方法與原理合理采取相應(yīng)標本，如尿液、膿汁、膽汁、分泌物或血液等，以直接涂片進行初步檢查。分離培養(yǎng)后，挑取可疑菌落，進行涂片、染色、鏡檢、觸酶試驗、

8、膽汁七葉苷試驗和6.5%NaCl耐受試驗，可鑒定到屬。如鑒定到種還需進行必要的生化試驗。對具有臨床意義的腸球菌應(yīng)進行體外藥敏試驗，一般要測試對-內(nèi)酰胺類尤其是青霉素類（如青霉素、氨芐西林）、萬古霉素和氨基糖甙類（如慶大霉素）的敏感性，耐萬古霉素腸球菌（VRE）國外檢出率較國內(nèi)高。 （四）治療原則治療腸球菌感染一般采用-內(nèi)酰胺類和氨基糖甙類聯(lián)合治療。五、奈瑟菌屬奈瑟菌屬為一大群革蘭陰性雙球菌，無鞭毛，無芽胞，有菌毛。專性需氧，氧化酶陽性。本屬主要有9個種。其中對人致病的是腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。（一）腦膜炎奈瑟菌1.概念腦膜炎奈瑟菌簡稱腦膜炎球菌，是引起流行性腦脊髓膜炎（簡稱流腦）的病原體。2

9、.生物學(xué)特性（1）形態(tài)與染色：為革蘭陰性雙球菌，菌體呈腎形，成對排列，坦面相對，菌體直徑0.61.5m，在患者的腦脊液中位于中性粒細胞內(nèi)。（2）培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求高，屬苛養(yǎng)菌，必須在含有血清或含有多種氨基酸，無機鹽等物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長良好。（3）生化反應(yīng)：絕大多數(shù)菌株能分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（因淋病奈瑟菌不分解麥芽糖，借此與之鑒別），觸酶試驗陽性，氧化酶試驗陽性。（4）抗原及分型：主要有四種抗原：莢膜多糖群特異性抗原、外膜蛋白型特異性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。根據(jù)群特異性莢膜多糖抗原不同，采用凝集反應(yīng)和瓊脂擴散試驗可將本菌分為A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等

10、。目前，對人致病的主要是A群。偶見8群、C群及1916群引起散發(fā)病例。3.臨床意義致病物質(zhì)：菌毛，莢膜，內(nèi)毒素。所致疾?。耗X膜炎奈瑟菌是流行性腦脊髓膜炎的病原菌。主要表現(xiàn)發(fā)熱，皮膚瘀斑，腦膜刺激癥狀。存在于攜帶者或病人的鼻咽部，借飛沫經(jīng)空氣傳播，冬末春初為流行高峰。4.微生物學(xué)檢驗 （1）標本采集：血液；瘀斑滲出液；腦脊液；鼻咽分泌物。因本菌能產(chǎn)生自溶酶，易自溶，故采集的標本不宜置冰箱，應(yīng)立即送檢。（2）檢驗方法及鑒定：1）直接涂片檢查：取腦脊液離心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革蘭染色。若發(fā)現(xiàn)中性粒細胞內(nèi)（或胞外）革蘭陰性雙球菌，呈腎形成對排列，可初報。2）分離培養(yǎng)：將標本葡萄糖肉

11、湯增菌培養(yǎng)液直接接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂或EPV瓊脂，置5%10%C02環(huán)境中，35培養(yǎng)1824h后可見圓形、灰褐色、濕潤、光滑、邊緣整齊、直徑12mm的小菌落，經(jīng)涂片證實為草蘭陰性雙球菌，并進一步根據(jù)相應(yīng)的生化反應(yīng)等試驗予以鑒定。3）鑒定：細菌染色形態(tài)；氧化酶試驗陽性；觸酶試驗陽性；分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；莢膜多糖抗原直接凝集試驗。5.治療原則：青霉素G為首選，三代頭孢對腦膜炎奈瑟菌也具有很強的抗菌活性。青霉素過敏的病人可考慮選用三代頭孢或氯霉素。（二）淋病奈瑟菌1.概念：淋病奈瑟菌簡稱淋球菌，是淋病的病原體，人類是其唯一的天然宿主和傳染源。2.生物學(xué)特性（1）形態(tài)與染色：本菌的形

12、態(tài)與腦膜炎奈瑟菌很相似。在膿汁標本中，此菌通常位于中性粒細胞內(nèi)，而在慢性淋病時常位于細胞外。從患者體內(nèi)新分離的菌株可有莢膜和菌毛，經(jīng)人工培養(yǎng)后，呈卵圓形或球形，排列不規(guī)則。無芽胞和鞭毛。（2）培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求較高，須在含有血液、血清或多種氨基酸和無機鹽類物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長良好。國內(nèi)常用血液瓊脂、巧克力瓊脂、EPV瓊脂等培養(yǎng)基。初次分離時，須置5%10%C02條件下才能生長。（3）生化反應(yīng)：可發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)酸，但不酵解麥芽糖（常借此與腦膜炎奈瑟菌相鑒別）。氧化酶和觸酶試驗均陽性。主要有三種抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。對外界抵抗力極低。3.微生物學(xué)檢驗（1）標本采集：膿性分泌物

13、，尿道拭子，宮頸口分泌物，結(jié)膜分泌物，血液。（2）檢驗方法及鑒定：1）直接涂片檢查：收集標本后立即涂片、革蘭染色。鏡檢時見中性粒細胞內(nèi)數(shù)對革蘭陰性雙球菌，可初報。2）分離培養(yǎng)：細菌培養(yǎng)仍是目前世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病患者的唯一方法。所采集的標本應(yīng)及時接種含有兩種以上抗生素（萬古霉素和多粘菌素等）的營養(yǎng)培養(yǎng)基（EPV）上。淋球菌對培養(yǎng)基的營養(yǎng)要求很高，且對冷、熱、干燥和消毒劑抵抗力低，故采樣后須立即接種于預(yù)溫的選擇性培養(yǎng)基和非選擇性培養(yǎng)基中，如巧克力平板，置于含5%10%的二氧化碳環(huán)境中，35培養(yǎng)48h。取小而透明似水滴狀、無色素易乳化菌進一步鑒定。3）鑒定：取可疑菌落進行涂片，革蘭染色鏡檢，

14、若見革蘭陰性雙球形，生化反應(yīng)：氧化酶陽性，僅分解葡萄糖產(chǎn)酸；免疫學(xué)方法：熒光抗體染色法、協(xié)同凝集試驗；核酸探針雜交法。氧化酶試驗陽性，可初判，并進行相關(guān)的生化反應(yīng)，如僅發(fā)酵葡萄糖而不發(fā)酵麥芽糖與蔗糖，以及30%H2O2試驗陽性可與腦膜炎奈瑟菌等相鑒別。4.臨床意義：淋病奈瑟菌是常見的性傳播疾病淋病的病原菌，主要通過性接觸直接侵襲感染泌尿生殖道，口咽部及肛門直腸的黏膜。如單純性淋病、盆腔炎、淋菌型結(jié)膜炎。5.治療原則：一般為三代頭孢菌素，氟喹諾酮類、壯觀霉素可作為替代藥物。本章練習題：淋病奈瑟菌與腦膜炎奈瑟菌用哪項實驗鑒別 A.葡萄糖發(fā)酵試驗B.麥芽糖發(fā)酵試驗C.氧化酶試驗D.觸酶試驗E.革蘭染

15、色正確答案：BSPA是 A.腸桿菌科的細菌的抗原B.葡萄球菌細胞壁的蛋白成分C.沙門菌的表面抗原D.核蛋白抗原E.鏈球菌屬表面抗原正確答案：B鑒別肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌可用A.外斐試驗B.肥大試驗C.乳糖發(fā)酵試驗D.菊糖分解試驗E.血漿凝固酶試驗正確答案：D耐甲氧西林的表皮葡萄球菌為 A.MRSAB.MRSEC.MRSOD.MRNSE.SPA正確答案：BB群鏈球菌不引起下列哪種疾病 A.敗血癥B.肺炎C.腦膜炎D.咽喉炎E.風濕熱正確答案：E淋病奈瑟菌的重要致病因素是A.菌毛B.殺白細胞素C.莢膜D.內(nèi)毒素E.以上都是正確答案：A引起剝脫性皮炎的細菌是 A.肺炎球菌B.鏈球菌C.金黃色葡萄球菌D.腦膜炎奈瑟菌E.腸球菌正確答案：C一位老年患者因外傷住院治療，插導(dǎo)尿管一周后出現(xiàn)尿路感染。取尿液檢查，革蘭染色見陽性球菌，有的呈短鏈排列，分離培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高，血培養(yǎng)生長較好，有甲型溶血；觸酶陰