低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的制備及透皮性能(精)

1、中國組織工程研究與臨床康復(fù) 第 15 卷第 3 期 2011-01-15 出版Jour nal of Cli nical Rehabilitative Tissue Engin eeri ng Research January 15, 2011Vol.15, No.3 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH465 1Biological Science and Engin eeri ng College, South China Uni versity ofTech no logy, Guan gzhou 510006, Guan gdo ng Pr

2、ovin ce, China; 2Research In stitute ofTsin ghua Un iversity in Shen zhe n, Shen zhe n 518057, Guangdong Provin ce, Chi naZhang Wen-qiang , Master, Biological Science and Engineering College, SouthChina Uni versity of Tech no logy, Guan gzhou 510006, Guangdong Provin ce, China;Research Institute of

3、Tsinghua University in Shenzhen, Shenzhen 518057, GuangdongProvin ce, Chinayywe Corresp ondence to: Huang Yue-sha n, Doctor, Associate professor, BiologicalScie nce and Engin eeri ng College, South China Uni versity of Tech no logy, Guan gzhou510006, Gua ngdo ng Province, Chi na Received: 2010-08-07

4、 Accepted: 2010-12-07低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的制備及透皮性能張文強 1,2 黃岳山 1Preparatio n of low-molecular-weight hyalur onan liposomes and their percuta neouspen etrati on Zhang Wen-qia ng1,2, Huang Yue-sha n1AbstractBACKGROUND:Hyaluro nic acid is a versatile polymer material, i n practical applications, due to its lar

5、ge molecular weight,percuta neous absorptio n effect is not satisfied, the use of liposomes as a carrier canimprove its tran smissi on effect, with a goodapplicati on prospect.OBJECTIVE: To study the percuta neous pen etratio n of the liposomes carry ing low-molecular-weight hyalur onic acid.METHODS

6、: Low-molecular-weight hyalur onan liposomes were prepared through thinfilms. Orthogonal experiment was design,and percuta neous pen etrati on was study by sn ake slough.RESULTS AND CONCLUSION: The low-molecular-weight hyaluro nan liposomescould en wrap more hyalur onic acid whe n thetemperature is

7、35C, the ratio of cholesterol and lecithin is 0.15：1, the ratio ofhyaluronic acid and lecithin is 0.03:1, and thepH of hydrati on medium PBS is 7.5. Hyalur onic acid could pen etrate the sn akeslough more easily whe n they were en wrapped byliposome, and the percuta neous pen etrati on of hyalur oni

8、c acid was improved.Zha ng WQ, Huang YS.Preparati on of low-molecular-weight hyalur onan liposomesand their percuta neous pen etratio n. Zhon gguoZuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(3:465-467.http:/www.crter.c n http:/摘要背景:透明質(zhì)酸是一種用途廣泛的高分子材料，在實際應(yīng)用中，由于其相對分子質(zhì) 量較大，透皮吸收效果不理想，利用脂質(zhì)體作為其載體可以改

9、善其傳輸效果，具有較好的應(yīng)用前景目的:觀察包裹低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的透皮性能。方法：采用薄膜法制備低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體，設(shè)計正交實驗，采用蛇蛻研究其透皮吸收性能。結(jié)果與結(jié)論：溫度 35C、膽固醇與卵磷脂的比例為 0.15 : 1,透明質(zhì)酸與卵磷脂 的比例為 0.03：1、水合介質(zhì) PBS 的 pH 值為 7.5,可制備包封率較高的低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體；脂質(zhì)體包裹低相 對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸，能有效得提高透明質(zhì)酸透過蛇蛻的能力，達到了提高透明質(zhì)酸透皮吸收率的作用。關(guān)鍵詞:低相對分子質(zhì)量；透明質(zhì)酸;脂質(zhì)體；透皮吸收;包封率doi:10.3969/j.iss n.1673-822

10、5.2011.03.021張文強,黃岳山.低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的制備及透皮性能 J.中國組 織工程研究與臨床康復(fù),2011, 15(3:465-467. http:/0 引言透明質(zhì)酸，又名玻璃酸，是一種獨特的線 性大分子酸性黏多糖，由葡萄糖醛酸和 N -乙酰氨基葡萄糖的雙糖單位反復(fù)交替連接而成，廣泛分布于動物和人體結(jié)締組織 細胞外基質(zhì)中，在眼玻璃體、臍帶、皮膚、軟骨和滑液中含量較高。透明質(zhì)酸為白色、無定形粉末，有吸濕性，不溶于有機溶劑，易溶于水，具有良好的 保濕性、潤滑 性、黏彈性、非免疫原性和生物 相容性，是一種用途廣泛的高分子材料，在臨床治 療

11、、診斷和化妝品基質(zhì)等方面發(fā)揮其獨特的作用1-2o在實際應(yīng)用中，由于透明質(zhì)酸相對分子質(zhì) 量較大，不能透過皮膚表面角質(zhì)層。脂 質(zhì)體是 磷脂分子親水頭部插入水中，疏水尾部伸向空 氣,攪動后形成雙層脂分子的球 囊，可將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體3。本實驗選用適當?shù)拖鄬Ψ肿淤|(zhì)量透明質(zhì) 酸,制備包裹低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體，并采用正交 實驗設(shè)計優(yōu)選透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的制備處方,考察其對蛇蛻的透皮效果，為其應(yīng)用提供 一定的實驗依據(jù)。1 材料和方法設(shè)計:體外觀察實驗。時間及地點：于 2009-03/07 在華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院生物材料實驗 室完成。材料:低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸（自制

12、；透明質(zhì)酸酶（Alfa Aesar 公司；大 豆卵磷脂（上海源聚生物科技有限公司；膽固醇（上海伯奧生物科技有限公司；磷酸 鹽緩沖溶液（PBS，自配；藥物透皮擴散試驗儀（上海優(yōu)浦科學(xué)儀器有限 公司；紫外- 可見光譜儀（美國熱電公司。張文強，等低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的制備及透皮性能HP .0. Box 1200, Shenyang 110004 466WWW.CRTER .org1華南理工大學(xué)生 物科學(xué)與工程學(xué) 院，廣東省廣州市 510061; 2 深圳清 華大學(xué) 研究院,廣東省深圳市 518057張文強,男,1985 年生，陜西省大荔縣人，漢族,碩士，主要從事生物醫(yī)用材 料研究。yywe

13、nzi23 通訊作者:黃岳山,博士,副教授,華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院,廣東省廣州市 510061中圖分類號：R318 文獻標識碼:B文章編號：1673-8225 (201103-00465-03收稿日期:2010-08-07 修回日期:2010-12-07 (20090807002/M?Y實驗方法：脂質(zhì)體的制備：稱取一定量卵磷脂、 膽固醇，溶解于體積比為 2： 1 的乙醚/甲醇混合溶劑 50 mL 中,與適量低相對分子質(zhì)量 透明質(zhì)酸水溶 液一起加入梨形燒瓶中，于 40 C 恒溫水浴中減 壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機 溶劑，使卵磷脂等成膜材料在燒瓶壁上形成均勻的薄膜。然后往燒瓶中 加入 PBS 溶液

14、 15 mL,旋轉(zhuǎn)洗膜即得柔性脂質(zhì)體粗制混懸液。將制得的柔性脂質(zhì)體粗制混懸 液在冰水浴超聲混合 30 min后,過 0.50 皿微孔濾膜，即得到脂質(zhì)體混懸液。包封率的測定:精密稱取脂質(zhì)體混懸液 0.5 mL,用 PBS 稀釋 3 倍后上 柱，采用SephadexG-50 凝膠柱，用 PBS 洗脫，控制流速 1 mL/min,收集游離透明質(zhì) 酸，水解，用紫外分光光度法測定葡萄糖醛酸含量（550 nm,換算成透明質(zhì)酸濃度。另 外再取 0.5 mL脂質(zhì)體混 懸液,加入體積比為 2 : 1 的乙醚/甲醇混合溶劑 將其溶解，提取透明質(zhì)酸，按上述方法測得透 明質(zhì)酸總量。 包封率根據(jù)下式計算：包封率 （%=

15、 （m 總-m 游/m 總為 00%。式中 m 總、m 游分別表 示脂質(zhì)體混懸液中總的透明質(zhì)酸 的質(zhì)量和游離的透明質(zhì)酸的質(zhì)量。體外透皮擴散試驗：自購蛇蛻，浸泡于生理鹽水中 30 min 后保存于 4CPBS 溶液中 12 h 后備用。剪取合適大小皮膚塊固 定于藥物透皮擴散試驗儀（擴散面積為 1.0 cm2,接受池容積為 8.5 cm3中,蛇蛻外表面面向供給室。接受池為 PBS 緩沖溶液。溫度為 37C,攪拌，于固定時間取樣 0.5 mL,取樣后同時補入等量接受液。實驗結(jié)束后將所取的樣品溶液 適當稀釋后過 0.50 皿微孔濾膜，水解，用紫外分光光度法測 定 550 nm 處吸光度4-5。主要觀察

16、指標：脂質(zhì)體的包封率、透皮性設(shè)計、實施、評估者：實驗設(shè)計為第一、二作者，實施為第一作者。2 結(jié)果與討論2.1 脂質(zhì)體的制備考慮到眾多因素對脂質(zhì)體成囊及質(zhì)量的影響，本研究采用正 交設(shè)計法，根據(jù)文獻資料和預(yù)實驗的結(jié)果，確定了以影響透明質(zhì)酸脂質(zhì)體包封率為指 標的 4 個因素,分別為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度、膽固醇與卵磷脂的 比例（CH : PC、透明質(zhì) 酸與卵磷脂的比例（HA : PC、水合介質(zhì) PBS 的 pH 值，每個因素選 3 個水平，見表 1,2。結(jié)果表明，在本試驗方案所取的因素和水平下，最佳處理工藝組合為 A3B3C2D3, 各因素的重要指標程度依 次為 A C B D。即溫度 35C、CH : PC

17、 為 0.15：1, HA : PC為 0.03：1、pH7.5?？?以看出，最佳處理工藝在 9 次試驗中沒有 出現(xiàn),與第 9 號試驗A3B3C2D1 比較接近,而 pH 值對包封率的影響 是最小的,從實際做出的結(jié)果看出第 9 號試驗是 33.73%,是 9 次試驗中最高的,說明最 好方案是符合實際的。目前制備脂質(zhì)體的方法 頗多,常用的有薄膜法、逆相蒸發(fā)法、復(fù)乳法、熔 融法、注入法、冷凍干燥 法、離 心法等。薄膜法 是最早而至今 仍常用的方法, 主要用于制備大 單室脂質(zhì)體,可制備粒徑 5005 000 nm 的脂質(zhì)體3,62.2 優(yōu)選處方的驗證實驗 按照優(yōu)選處方的配比制備 3 批低相對分子質(zhì)量

18、透明 質(zhì)酸脂質(zhì)體,測得平均包封率為(35.08 052%。2.3 體外透皮擴散實驗 透皮擴散實驗分 3 組:脂質(zhì)體組為自制的透明質(zhì)酸脂質(zhì)體 液 2mL,對照組為相同濃度低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸的PBS 溶液 2 mL,空白組為PBS 液 2 mL。接受液張文強，等.低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸脂質(zhì)體的制備及透皮性能我3按喘液不同墳皮肘間的吸尤度(搐釋5佶)Table 3 Absorbance value at dfff&rent percutaneous time(5-fokldilution)Percutaneous ijme(h)Group1246810DriU3B90.4090.5630

19、.6110 6fl70.874Control0.1030 12S0.156O.1S00.1770.216Blank0.0660 0&80 0930.1030.1080.125ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH467www. CRTER .org不同透皮時間的吸光度見表 3。由表 3 中可見，相同透皮時間下脂質(zhì)體組吸光度明 顯高于對照組，說明相 同透皮時間下脂質(zhì)體組透明質(zhì)酸透 過率明顯高于對照組,提示采用脂質(zhì)體包 裹低 相對分子 質(zhì)量透明質(zhì)酸，能有效得提高透明質(zhì)酸透過蛇蛻的能 力，達到了提高 透明質(zhì)酸透皮吸收率的作用?？瞻捉M也會在紫外 55

20、0 nm 波長處產(chǎn)生吸收,這種吸收可能是皮膚滲出物產(chǎn)生的,在計算累積透過量時 應(yīng)去除皮膚滲出物的影 響7目前有很多脂質(zhì)體 促進藥物透皮吸收的 報道。以脂 質(zhì)體作為載體的藥物 或其他功效成分易進入角質(zhì)層，在表皮和真皮內(nèi)形成藥物 儲庫，藥物可持續(xù) 發(fā)揮功效，現(xiàn)已成為皮膚 病藥物治療和化妝品的研究熱點。脂質(zhì)體 可促進 藥物透皮吸收，其機制 主要有:脂質(zhì)體的類脂與角質(zhì)層的脂質(zhì)相互作用,增 加皮膚脂質(zhì)的流 動性,從而促進藥物的透過。融合機制。脂質(zhì)體磷脂與 角質(zhì) 層脂質(zhì)融合使角質(zhì)層組成和結(jié)構(gòu)改變，形成一種扁平的顆粒結(jié)構(gòu),通過脂質(zhì) 顆粒間隙，脂質(zhì)體包封的藥物 便于進入皮膚,經(jīng)由脂質(zhì)交換、融合作用,維護 皮膚

21、生理 功能。脂質(zhì)體可使角質(zhì)層濕潤，水合作用加 強，使角質(zhì)細胞間的結(jié)構(gòu)改變8-93 結(jié)論控制溫度 35C、CH : PC 為 0.15： 1, HA : PC 為 0.03：1、pH 7.5,可制 備包封率 較高的低相對分子質(zhì)量 透明質(zhì)酸脂質(zhì)體；采用脂質(zhì)體包 裹低相對分子 質(zhì)量透明質(zhì)酸,能有效提高透明質(zhì)酸透過蛇蛻的能 力，達到了提高透明質(zhì)酸透 皮吸收率的作用。 本研究 可為透明質(zhì)酸在 醫(yī)藥和化妝品中的應(yīng)用研究提供一定 的實驗依據(jù)。4 參考文獻1 Nels on JD, Farris RL. Sodium hyaluro nate and polyvi nyl alcoholartificial

22、tear preparations. A comparison in patients withkeratoconjunctivitis sicca. Arch Ophthalmol. 1988;106(4:484-487. 2Zha ng WQ,Hua ng YS,Zhi XX.Zh on gguo Zuzhi Gon gche ng Yanjiu yu Lin chua ngKan gfu. 2008;12(23:4515-4518.張文強，黃岳山，支曉興透明質(zhì)酸在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用J中國組織工程 研 究與臨床康復(fù),2008,12(23:4515-4518.3 Zhang W,Yan CE.Huaxue Jinzhan. 2006;18(12:1684-1690.張偉，閆翠娥.透明質(zhì)酸及其衍生物藥物載體J.化學(xué)進展,2006, 18(12: 168491690.4 Cai S, Liu Y, Zheng Shu X,et al. Injectable glycosaminoglycan hydrogels for controlled release of huma n basic fibroblast growth factor. B