尺寸排阻色譜

1、 FYN概述原理分類應(yīng)用概述 分子尺寸色譜法又稱分子排阻色譜法（SEC）主要根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法。優(yōu)點：優(yōu)點：根據(jù)分子大小，可預(yù)測分離；根據(jù)分子大小，可預(yù)測分離；分離過程中無樣品損耗和反應(yīng)分離過程中無樣品損耗和反應(yīng)發(fā)生；發(fā)生；柱幾乎不失活，壽命長；柱幾乎不失活，壽命長；缺點：缺點：不能分辨分子大小相近的化合不能分辨分子大小相近的化合物物,分子量大小相差大于分子量大小相差大于10%才才能得以有效分離能得以有效分離!原理前面已經(jīng)說了凝膠的表面是有小孔的，像右圖所示那樣，樣品中分子?。ǚ肿恿啃。┑某煞诌M入了孔的最深處。分子大（分子量

2、大）的成分無法進入孔穴。而分子量居中的只能進到孔穴的一半深度。能夠進入孔穴的成分在色譜柱中保留的時間比較長，所以樣品從色譜柱脫離的順序依次為、。像這樣，尺寸排阻法是利用樣品中各分子的分子量大小順序而分離出來的。 的外徑正好和孔的孔徑相同，比大的、和一樣不能進入孔穴，雖然這三種成分的分子大小不同，但它們是同時從色譜柱中脫出的，無法達到分離的目的。不能進入孔穴的最小尺寸（這里指這種情況）就是排除界限分子量。換一種說法說，超過色譜柱排除界限分子量的分子不能被分離。 在尺寸排阻色譜法中特別要注意的是，分子量很大的物質(zhì)不一定實際的分子體積也很大。就像右圖所示，兩種物質(zhì)的分子量相同，因為結(jié)構(gòu)的緊密度不同，

3、所以分子的大小也不相同。另外還需要注意的是即使是用一種物質(zhì)，在不同的流動相中構(gòu)造也會變的分散或緊密，實際的大小會發(fā)生變化。分類流動相為有機溶劑：流動相為有機溶劑：凝膠滲透色譜：凝膠滲透色譜：GPC （或稱為油溶性或稱為油溶性SEC） 流動相為水：流動相為水：凝膠過濾色譜：凝膠過濾色譜：GFC （或稱為水溶性（或稱為水溶性SEC）凝膠滲透色譜（GPC）GPC（油性（油性SEC）通常使用聚合物色譜柱。聚合物色譜柱最常用的填料是聚苯乙烯（準確的說應(yīng)該是苯乙烯和二乙烯基苯的共聚物）。 GPC分析的時候，首先必須選擇能溶解樣品的溶劑。GPC用的溶劑最常用的是THF（四氫呋喃）。如果THF能溶解樣品的話那

4、當然沒問題，如果不能溶解的話就必須尋找能使之溶解的溶劑。除了THF，常用的GPC流動相還有氯仿，DMF（二甲基甲酰胺），HFIP（六氟異丙醇），喹啉，二氯苯，乙酸甲酯，四氯乙烷等。一般來說就把能溶解樣品的溶劑直接當成流動相來使用。凝膠過濾色譜（GFC）GFC（水性（水性SEC）用的色譜柱分硅膠基質(zhì)色譜柱和聚合物基質(zhì)色譜柱。這兩種做比較，硅膠色譜柱的校正曲線比較平緩，所以硅膠柱的分離性能比較好。然而，硅膠填料如果開大點的孔硅膠的結(jié)構(gòu)會被破壞，所以就不能做成排除界限分子量大的凝膠。與此相對，聚合物的構(gòu)造與硅膠相比更加堅固，可以開較大的孔。而且，聚合物填料的化學性質(zhì)也比硅膠穩(wěn)定，可以作為流動相使用的

5、溶劑的選擇范圍非常廣，這也是聚合物色譜柱的一個特點。 硅膠柱可以用來分析以蛋白質(zhì)為代表的糖蛋白，肽，核酸等物質(zhì)。聚合物色譜柱，除了和硅膠柱同樣的使用以外，還能用來進行硅膠柱不能測定的分子量大的水溶性超高分子的分子量測定。應(yīng)用分子量分布的測定(C6H5CH=CH2)聚苯乙烯是由無數(shù)個苯乙烯分子聚合而成。由于苯乙烯的分子量是104（12818），所以分子量為104萬的聚苯乙烯分子是由1萬個苯乙烯分子聚合而成的。然而，實際的聚苯乙烯制造過程中，不能單獨生產(chǎn)1萬個苯乙烯聚合而成的產(chǎn)物。所以在制造聚苯乙烯的過程中，除了10000個聚合的產(chǎn)物，10012，9985類似這種聚合物也被制造出來，形成了以100

6、00個為中心的分子帶。這就是分子量的分布。為了計算分子量的分布，必須先做標準曲線。這就必須用已知分子量的聚苯乙烯作標準試劑來進行測定。比如，根據(jù)（圖-1），可以由各分子量（MW : Molecular Weight）對應(yīng)峰頂點來求其溶出對應(yīng)的時間（溶出時間=Rt : Retention time）。如（圖-2）a）所示，縱軸表示分子量，橫軸表示溶出的時間，把每個點連接起來即成校正曲線。然后，進行待測聚苯乙烯的分析，得到了像b）那樣的譜圖。這個峰是第13.9分鐘時開始脫出，第18.8分鐘時結(jié)束的，這種那個聚苯乙烯的分子量就在6200至1,100,000的范圍內(nèi)。圖-1圖-2然而，實際的校正曲線是像下圖顯示的那樣，比排除界限分子量大的成分都在同一時間洗脫。所以，校正曲線既有直線部分也有不是直線的部分。如果要計算分子量的分布，只能使用校正曲線顯示直線的部分。分子量保留時間通過尺寸排阻法進行分離不僅僅可以通過尺寸排阻法進行分子量分布的檢測，還可以用來分離樣品中的不同成分。開孔孔徑比較大的（排除界限分子量大）填料，主要用于測定聚合物的分子量分布，開孔孔徑比較小的（排除界限分子量小）填料，主要用來分離分子量小的不同成分。 右圖是