非洲豬瘟病毒快速檢測(cè)技術(shù)學(xué)習(xí)總結(jié).非洲豬瘟病毒快速檢測(cè)技術(shù)學(xué)習(xí)總結(jié)

1、部部 門門: :品管部品管部 報(bào)告人報(bào)告人: :日日 期期: 17: 17 MAR 2019 MAR 2019敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)

2、實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效臨床特點(diǎn)臨床特點(diǎn)1 1：1 1、特征、特征- -突然死亡突然死亡2 2、以特急性和急性為主、以特急性和急性為主3 3、所有年齡和性別都可能受到影響、所有年齡和性別都可能受到影響4 4、傳染性相當(dāng)?shù)?、傳染性相?dāng)?shù)? -發(fā)病率不定發(fā)病率不定5 5、耳、四肢和腹部發(fā)紅至發(fā)紺、耳、四肢和腹部發(fā)紅至發(fā)紺6 6、血腥腹瀉、血腥腹瀉7 7、經(jīng)常性流產(chǎn)、經(jīng)常性流產(chǎn)8 8、高熱、出血為主要表現(xiàn)癥狀、高熱、出血為主要表現(xiàn)癥狀敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效臨床特點(diǎn)臨床特點(diǎn)2 2：1 1、脾臟異常腫大

3、、呈紫黑色、質(zhì)地變脆、易碎、脾臟異常腫大、呈紫黑色、質(zhì)地變脆、易碎2 2、胃、肝臟、腎臟、腸系膜等淋巴結(jié)出血、水腫、質(zhì)地柔軟、胃、肝臟、腎臟、腸系膜等淋巴結(jié)出血、水腫、質(zhì)地柔軟、包膜緊張包膜緊張敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效消消毒劑種類毒劑種類優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍適用范圍過(guò)氧化物過(guò)氧化物作用速度快適用于病毒和細(xì)菌具有刺激性預(yù)防病毒性疫病、水線消毒、欄舍熏蒸氯化物氯化物起效速度快對(duì)病毒和細(xì)菌均有效價(jià)格低廉具有腐蝕性、遇有機(jī)物和硬水失活、持續(xù)效果短、具有刺激性欄舍熏蒸環(huán)境消毒苯酚苯酚活性維持時(shí)間長(zhǎng)、對(duì)金屬無(wú)腐

4、蝕性、對(duì)病毒和細(xì)菌效果好、價(jià)格低廉具有毒性、腐蝕橡膠塑料、可能環(huán)境污染水泥地面碘制劑碘制劑安全性高、無(wú)毒無(wú)味、起效速度快、適用于病毒和細(xì)菌價(jià)格較貴某些碘制劑具有毒性預(yù)防病毒性疫病季銨鹽類季銨鹽類適用水線消毒、細(xì)菌消毒效果好、安全性高有機(jī)物存在失效、對(duì)真菌和芽孢效果不佳、不能和清潔劑混用洗手、水線消毒醛類醛類對(duì)病毒和細(xì)菌均有效可能具有毒性水泥地面、車輪浸泡堿類堿類起效速度快、對(duì)病毒和細(xì)菌均有效價(jià)格低廉可能具有毒性水泥地面車輪浸泡敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效 靈敏度高，特異性強(qiáng)，對(duì)生物學(xué)樣本有極強(qiáng)的分辨能力靈敏

5、度高，特異性強(qiáng)，對(duì)生物學(xué)樣本有極強(qiáng)的分辨能力 醫(yī)療、疾控等多個(gè)領(lǐng)域用于確診傳染病的方法醫(yī)療、疾控等多個(gè)領(lǐng)域用于確診傳染病的方法檢測(cè)方法靈敏度(cfu/mL)檢測(cè)時(shí)間免疫學(xué)方法膠體金100,00015分鐘ELISA10,00090-180分鐘顯微鏡檢驗(yàn)10,0005-120分鐘核酸檢測(cè)(qPCR)1-100小于60分鐘病原體培養(yǎng)1-108-20小時(shí)敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效u主機(jī)u配件微量移液器 配制反應(yīng)液 耗材：槍頭金屬浴 暫時(shí)保存反應(yīng)液 樣品前處理 溫控：0-100Mini8 Cube及電腦8樣品孔兩通

6、道：FAM/ROX無(wú)需預(yù)熱免校準(zhǔn)、免維護(hù)220V/12V(車載供電）移動(dòng)電源供電130瓦時(shí)可使用4小時(shí)支持兩輪實(shí)驗(yàn)手持研磨器固體樣品處理耗材：研磨頭雙電單充迷你離心機(jī)樣品前處理配制反應(yīng)液TS：5000rpm敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效uMini8Mini8 Cube系統(tǒng) 小巧，機(jī)動(dòng) 供電方式靈活 免校準(zhǔn)，免維護(hù) 軟件友好，操作簡(jiǎn)單 人醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)：CFDA三類醫(yī)療器械注冊(cè)證敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效試劑盒特點(diǎn)：免核酸提取試劑盒特點(diǎn)：免核酸提取1. 操作簡(jiǎn)單2. 快速3. 無(wú)需專門實(shí)驗(yàn)室4. 結(jié)果更準(zhǔn)確5. 試劑開(kāi)放敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)

7、務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效【用法用法】 1. 1. 適用樣本類型適用樣本類型 本試劑盒適用于豬口鼻眼拭子、組織和血液本試劑盒適用于豬口鼻眼拭子、組織和血液或血清等樣本中非洲豬瘟病毒的核酸檢或血清等樣本中非洲豬瘟病毒的核酸檢 測(cè)。測(cè)。 2. 2. 樣本采集樣本采集 2.1 2.1 口鼻眼口鼻眼拭子樣本的采集：拭子樣本的采集： 采集患病豬口鼻眼拭子樣本，用專用采樣棉簽，適度采集患病豬口鼻眼拭子樣本，用專用采樣棉簽，適度拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物，拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物， 眼分泌物要用拭子在眼瞼下充分擦拭，眼分泌物要用拭子在眼瞼下充分擦拭，迅速將棉簽放入裝有迅速將棉簽放入裝有400400

8、L L樣本稀釋液的采樣本稀釋液的采 樣管中，在靠近頂端處折斷樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。拭子采樣以溶解棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。拭子采樣以溶解 到樣本稀釋液中到樣本稀釋液中可以看到組織懸浮物為最佳?？梢钥吹浇M織懸浮物為最佳。 2.2 2.2 組織樣本的采集：組織樣本的采集： 無(wú)菌采集病豬組織無(wú)菌采集病豬組織樣本約樣本約0.1g0.1g，置于，置于1.5mL 1.5mL 無(wú)菌離心管中。無(wú)菌離心管中。 2.3 2.3 全血樣本的采集：全血樣本的采集： 抽取抽取豬靜脈血豬靜脈血1mL1mL，置于含有適量抗凝劑的采血管中（抗凝劑建議采用，置于含有適量抗凝劑的采血管

9、中（抗凝劑建議采用EDTA EDTA 或或檸檸 檬酸三鈉，不應(yīng)采用肝素）；檬酸三鈉，不應(yīng)采用肝素）； 2.4 2.4 血清樣本的采集：血清樣本的采集： 抽取豬靜脈血抽取豬靜脈血1mL, 1mL, 注入無(wú)菌收集管中，室溫不超過(guò)注入無(wú)菌收集管中，室溫不超過(guò)4 4小時(shí)（約小時(shí)（約30-6030-60分鐘），待樣分鐘），待樣 本本自行析出血清，或直接自行析出血清，或直接1600rpm1600rpm離心離心5 5分鐘分離出血清，轉(zhuǎn)移至新的滅菌離分鐘分離出血清，轉(zhuǎn)移至新的滅菌離心管心管 敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效【操作程序操作程序】 1. 1. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備 從

10、試劑盒中取出從試劑盒中取出ASFV-PCRASFV-PCR反應(yīng)液、反應(yīng)液、ASFV-ASFV-陰性對(duì)照品和陰性對(duì)照品和ASFV-ASFV-陽(yáng)性對(duì)照品，待所陽(yáng)性對(duì)照品，待所 有組分完全溶解后，振蕩混勻有組分完全溶解后，振蕩混勻5 5秒，瞬時(shí)離心秒，瞬時(shí)離心5 5秒。秒。 2. 2. 樣本處理樣本處理 2.1 2.1 口鼻眼拭子樣本處理：口鼻眼拭子樣本處理： 無(wú)需樣本處理，即可直接上樣。無(wú)需樣本處理，即可直接上樣。 2.2 2.2 組織樣本處理：組織樣本處理： 取約取約黃豆粒大小組織樣本（約黃豆粒大小組織樣本（約0.1g0.1g）置于無(wú)菌）置于無(wú)菌1.5mL1.5mL離心管中，加入離心管中，加入2

11、00200L L樣本稀樣本稀 釋液，使用釋液，使用手持式組織研磨儀充分研磨至勻漿。另取出一個(gè)新的無(wú)菌手持式組織研磨儀充分研磨至勻漿。另取出一個(gè)新的無(wú)菌 1.5mL 1.5mL 離心離心 管，加入管，加入3030L L組組織樣本裂解液，再加入織樣本裂解液，再加入3030L L組織勻漿液，渦旋混勻，置于組織勻漿液，渦旋混勻，置于9595加加 熱熱5min5min后，后，12000rpm12000rpm離離心心2min2min，吸取上清液，吸取上清液5 5L L上樣。上樣。 2.3 2.3 血液樣本處理：血液樣本處理： 全血樣本處理：經(jīng)樣本稀釋液稀釋全血樣本處理：經(jīng)樣本稀釋液稀釋1010倍后，即可直

12、接上樣；倍后，即可直接上樣； 血清樣本處理：經(jīng)樣本稀釋液稀釋血清樣本處理：經(jīng)樣本稀釋液稀釋5 5倍后，即可直接上樣。倍后，即可直接上樣。 3. 3. 加樣加樣 按下表體系，在按下表體系，在 0.2mL PCR 0.2mL PCR 管中配制反應(yīng)液。試劑用畢后將剩余試劑立即放入管中配制反應(yīng)液。試劑用畢后將剩余試劑立即放入-20 -20 55保存。保存。 成分成分 體積體積 ASFV-PCRASFV-PCR反應(yīng)液反應(yīng)液 2020L L 經(jīng)預(yù)處理的樣本經(jīng)預(yù)處理的樣本 5 5L L 總體積總體積 2525L L 3.1 3.1 在一個(gè)分裝有反應(yīng)液的在一個(gè)分裝有反應(yīng)液的PCRPCR反應(yīng)管中加入反應(yīng)管中加入

13、5 5L L的的ASFV-ASFV-陰性對(duì)照品；陰性對(duì)照品； 3.2 3.2 將步驟將步驟2.2.樣樣本處理中取得的待檢樣本充分震蕩混勻，然后按照本處理中取得的待檢樣本充分震蕩混勻，然后按照5 5L/L/樣本分別加樣本分別加 入分裝有反應(yīng)液的入分裝有反應(yīng)液的PCRPCR反應(yīng)管中；反應(yīng)管中； 3.3 3.3 在最后一個(gè)分裝有反應(yīng)液的在最后一個(gè)分裝有反應(yīng)液的PCRPCR反應(yīng)管中加入反應(yīng)管中加入5 5L L的的ASFV-ASFV-陽(yáng)性對(duì)照品陽(yáng)性對(duì)照品； 以上操作建議在冰浴條件下進(jìn)行，操作完畢壓緊管蓋，瞬時(shí)離心。以上操作建議在冰浴條件下進(jìn)行，操作完畢壓緊管蓋，瞬時(shí)離心。 注：使用卡尤迪生注：使用卡尤迪

14、生物科技物科技Mini8 Mini8 全系列熒光定量全系列熒光定量PCRPCR儀時(shí)，建議使用無(wú)色透明的儀時(shí)，建議使用無(wú)色透明的 0.2mL PCR 0.2mL PCR 管，切勿使用有管，切勿使用有顏色，磨砂的顏色，磨砂的PCRPCR管，因?yàn)樵搩x器熒光讀取方式為側(cè)管，因?yàn)樵搩x器熒光讀取方式為側(cè) 面激發(fā)和收集熒光信號(hào)。面激發(fā)和收集熒光信號(hào)。操作程序操作程序敬業(yè)敬業(yè) 自律自律 務(wù)實(shí)務(wù)實(shí) 專業(yè)專業(yè) 嚴(yán)謹(jǐn)嚴(yán)謹(jǐn) 高效高效【注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)】 1. 1.開(kāi)始檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)，按要求操作。開(kāi)始檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)，按要求操作。 2. 2. 各各區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，避免污染；實(shí)驗(yàn)后立即清潔

15、工作臺(tái)。區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，避免污染；實(shí)驗(yàn)后立即清潔工作臺(tái)。 3. 3. 擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，很容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，很容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照按照臨床臨床 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范配備設(shè)備及操作人員。配備設(shè)備及操作人員。 4. 4. 本試本試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供科研使用，對(duì)病豬的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供科研使用，對(duì)病豬的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/ /體征，病體征，病史，史， 其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。 5. 5. 檢測(cè)為陰性，并檢測(cè)為陰性，并不代表為非感染狀態(tài)，具體診斷結(jié)果須結(jié)合其他臨床診斷結(jié)果判不代表為非感染狀態(tài)，具體診斷結(jié)果須結(jié)合其他臨床診斷結(jié)果判 斷。造斷。造成檢測(cè)為陰性的可能是：不合理樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、樣本中病毒成檢測(cè)為陰性的可能是：不合理樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、樣本中病毒濃度濃度 過(guò)低，未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾因素如：服用抗病毒藥物等。過(guò)低，未經(jīng)