微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)Alan學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(piyng)Alan第一頁(yè)，共52頁(yè)。第2頁(yè)/共52頁(yè)第二頁(yè)，共52頁(yè)。形態(tài)第3頁(yè)/共52頁(yè)第三頁(yè)，共52頁(yè)。專題2 :微生物的培養(yǎng)(piyng)與應(yīng)用第4頁(yè)/共52頁(yè)第四頁(yè)，共52頁(yè)。 培養(yǎng)(piyng)微生物需要解決的兩個(gè)問題是什么？1、為其提供合適的營(yíng)養(yǎng)條件(tiojin)和環(huán)境條件(tiojin)2、防止雜菌的入侵第5頁(yè)/共52頁(yè)第五頁(yè)，共52頁(yè)。1.1.營(yíng)養(yǎng)成分：營(yíng)養(yǎng)成分：思考(sko)：微生物“吃”什么？水、無機(jī)鹽、碳源、氮源水、無機(jī)鹽、碳源、氮源此外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如:生長(zhǎng)因子)以及(yj)氧氣等的要求。第

2、6頁(yè)/共52頁(yè)第六頁(yè)，共52頁(yè)。1.1.基本成分：基本成分：碳源無機(jī)(wj)碳源：有機(jī)(yuj)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉(ni ru)膏自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：N2、NH4、NO3-蛋白胨第7頁(yè)/共52頁(yè)第七頁(yè)，共52頁(yè)。牛肉牛肉(ni ru)(ni ru)膏蛋白胨培養(yǎng)基膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g分析分析(fnx)(

3、fnx)其營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？其營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？第8頁(yè)/共52頁(yè)第八頁(yè)，共52頁(yè)。C第9頁(yè)/共52頁(yè)第九頁(yè)，共52頁(yè)。.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別(chbi)是( )A碳源 B氮源 C無機(jī)鹽 D特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)A第10頁(yè)/共52頁(yè)第十頁(yè)，共52頁(yè)。（1）按物理性質(zhì)來分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基 （2）按功能來分：選擇(xunz)培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基第11頁(yè)/共52頁(yè)第十一頁(yè)，共52頁(yè)。固體(gt)培養(yǎng)基：菌落第12頁(yè)/共52頁(yè)第十二頁(yè)，共52頁(yè)。分離酵母菌、霉菌等真菌（抑制(yzh)細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)）分離金黃色葡萄球菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物第13頁(yè)/共52頁(yè)第十三頁(yè)，共52頁(yè)。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基是

4、鑒別培養(yǎng)基，可以(ky)用來檢測(cè)自來水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，因?yàn)榈拇x產(chǎn)物與伊紅美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈黑色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來，并沒有促進(jìn)大腸桿菌的生長(zhǎng)和抑制其他微生物的生長(zhǎng)。例如(lr)：鑒別大腸桿菌培養(yǎng)基大腸桿菌(d chn n jn)呈黑色中心 ,有或無金屬光澤第14頁(yè)/共52頁(yè)第十四頁(yè)，共52頁(yè)。防止(fngzh)外來雜菌污染1. 目的：2. 方法： 消毒與滅菌消毒與滅菌的概念和區(qū)別？第15頁(yè)/共52頁(yè)第十五頁(yè)，共52頁(yè)。第16頁(yè)/共52頁(yè)第十六頁(yè)，共52頁(yè)。2.2.無菌范圍無菌范圍(fnwi)(fnwi)：實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)(shyn)操作空間消毒操作空間消毒操作者

5、的手、衣著操作者的手、衣著(yzhu)(yzhu)消毒消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程二二. .無菌技術(shù)：無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作超凈工作臺(tái)臺(tái)第17頁(yè)/共52頁(yè)第十七頁(yè)，共52頁(yè)。 有些細(xì)菌在一定有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面的條件下，細(xì)胞里面形成形成(xngchng)(xngchng)一一個(gè)橢圓形的休眠體，個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。（抗很強(qiáng)的抵抗力。（抗逆性極強(qiáng)）逆性極強(qiáng)）注：不是繁殖體注：不是繁殖體第1

6、8頁(yè)/共52頁(yè)第十八頁(yè)，共52頁(yè)。干熱(n r)滅菌接種(jizhng)環(huán)、接種(jizhng)針等 金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒滅菌滅菌定義定義方法方法較為溫和理化(lhu)方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌高壓蒸汽滅菌二二. .無菌技術(shù)：無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染2.2.消毒與滅菌：消毒與滅菌：第19頁(yè)/共52頁(yè)第十九頁(yè)，共52頁(yè)。第20頁(yè)/共52頁(yè)第二十頁(yè)，共52頁(yè)。1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，

7、還有什么(shn me)目的？2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌(xjn)用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身(zshn)被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第21頁(yè)/共52頁(yè)第二十一頁(yè)，共52頁(yè)。高壓蒸氣滅菌(mi jn)的原理是（ ）A高壓使細(xì)菌DNA變性 B高壓使細(xì)菌蛋白質(zhì)凝固變性 C高溫燙死細(xì)菌 D高溫使細(xì)菌DNA變性B第22頁(yè)/共52頁(yè)第二十二頁(yè)，共52頁(yè)。1、器具(qj)的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、

8、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存第23頁(yè)/共52頁(yè)第二十三頁(yè)，共52頁(yè)。涂布器涂布器接種接種(jizhng)環(huán)環(huán)接種接種(jizhng)針針第24頁(yè)/共52頁(yè)第二十四頁(yè)，共52頁(yè)。第25頁(yè)/共52頁(yè)第二十五頁(yè)，共52頁(yè)。四四. .大腸桿菌的純化大腸桿菌的純化(chn hu)(chn hu)培養(yǎng)：培養(yǎng)：制備牛肉制備牛肉(ni ru)(ni ru)膏蛋白胨固體培養(yǎng)基膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.1.計(jì)算計(jì)算(j sun)(j sun)2.稱量3.3.溶化溶化牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋4.4.調(diào)調(diào)pHpH、分裝、封口、分裝、封口5.5.滅菌滅菌6.6.倒平板倒平板 7.7.無菌檢查：

9、無菌檢查：37培養(yǎng)培養(yǎng)24-48h24-48h培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿防瓊脂糊底第26頁(yè)/共52頁(yè)第二十六頁(yè)，共52頁(yè)。第27頁(yè)/共52頁(yè)第二十七頁(yè)，共52頁(yè)。約約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成(zo chn)污染污染灼燒滅菌，防止(fngzh)瓶口的微生物污染培養(yǎng)基第28頁(yè)/共52頁(yè)第二十八頁(yè)，共52頁(yè)。第29頁(yè)/共52頁(yè)第二十九頁(yè)，共52頁(yè)。第30頁(yè)/共52頁(yè)第三十頁(yè)，共52頁(yè)。b.純化(chn hu)大腸桿菌接種方法有：平板劃線(hu xin)法和稀釋涂布平板法第31頁(yè)/共52頁(yè)第三十一頁(yè)，共52頁(yè)。接種(jizhng)方法有：平板劃線法和稀釋涂

10、布平板法 一、 平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼(ruyn)可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.第32頁(yè)/共52頁(yè)第三十二頁(yè)，共52頁(yè)。將接種環(huán)放在火焰(huyn)上灼燒，直到接種環(huán)_在在_旁冷旁冷卻接種卻接種(jizhng)(jizhng)環(huán)，環(huán)，并打開棉塞并打開棉塞 將試管(shgun)口通過火焰 .將已_的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液 左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃_條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。.將試管通過火焰，并塞上棉塞 火焰冷卻三

11、至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的第一區(qū)域劃線的_開始往開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連相連。末端燒紅將平板_放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 倒置第33頁(yè)/共52頁(yè)第三十三頁(yè)，共52頁(yè)。二二. .大腸桿菌的純化大腸桿菌的純化(chn hu)(chn hu)培養(yǎng)：培養(yǎng)：純化純化(chn hu)(chn hu)大腸桿菌：大腸桿菌：平板平板(pngbn)(pngbn)劃線法：劃線法：菌種菌種劃劃3 3個(gè)平板個(gè)平板1 1個(gè)不劃線個(gè)

12、不劃線1.1.接種：接種：接種環(huán)接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）第34頁(yè)/共52頁(yè)第三十四頁(yè)，共52頁(yè)。1.1.接種環(huán)只蘸一次菌液接種環(huán)只蘸一次菌液, ,但要在培養(yǎng)基不同但要在培養(yǎng)基不同(b (b tn)tn)位置連續(xù)劃線多次位置連續(xù)劃線多次. .2.2.劃線首尾不能相接劃線首尾不能相接3.3.劃線后劃線后, ,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)劃線劃線(hu xin)分離法分離法注意事項(xiàng)注意事項(xiàng):第35頁(yè)/共52頁(yè)第三十五頁(yè)，共52頁(yè)。第36頁(yè)/共52頁(yè)第三十六頁(yè)，共52頁(yè)。第37頁(yè)/共52頁(yè)第三十七頁(yè)，共52頁(yè)。第38頁(yè)/共52頁(yè)第三十八頁(yè)，共52頁(yè)。6 6

13、支試管，分別加入支試管，分別加入9ml9ml無菌水無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋稀釋(xsh)(xsh)涂布平板法：涂布平板法：a.a.梯度梯度(t d)(t d)稀釋菌液：稀釋菌液：菌液微量微量 移液器移液器第39頁(yè)/共52頁(yè)第三十九頁(yè)，共52頁(yè)。稀釋稀釋(xsh)(xsh)涂布平板法：涂布平板法：a.a.梯度梯度(t d)(t d)稀釋菌液：稀釋菌液：b.b.涂布平板涂布平板(pngbn)(pngbn)：不超過不超過0.1ml0.1ml各梯度分別涂布各梯度分別涂布3個(gè)平板個(gè)平板1 1個(gè)不涂布作空白對(duì)照個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼涂稀稀釋釋101

14、03 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍第40頁(yè)/共52頁(yè)第四十頁(yè)，共52頁(yè)。第41頁(yè)/共52頁(yè)第四十一頁(yè)，共52頁(yè)。2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌平板(pngbn)劃線法:稀釋(xsh)涂布平板法:(1)接種(jizhng)方法.連續(xù)劃線，.逐步稀釋.梯度稀釋，.分別涂布.第42頁(yè)/共52頁(yè)第四十二頁(yè)，共52頁(yè)。平板平板(pngbn)(pngbn)劃線法：劃線法：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：1.1.接種：接種：稀釋稀釋(xsh)(xsh)涂布平板法：涂布平板法：2.2.培養(yǎng)培養(yǎng)

15、(piyng)(piyng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，觀察并記錄第43頁(yè)/共52頁(yè)第四十三頁(yè)，共52頁(yè)。第44頁(yè)/共52頁(yè)第四十四頁(yè)，共52頁(yè)。三三. .菌種的保藏菌種的保藏(bocng)(bocng)：1.1.臨時(shí)臨時(shí)(ln sh)(ln sh)保藏：保藏：試管試管(shgun)(shgun)固體斜固體斜面培養(yǎng)基上面培養(yǎng)基上42.2.長(zhǎng)期保存：長(zhǎng)期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020第45頁(yè)/共52頁(yè)第四十五頁(yè)，共52頁(yè)。第46頁(yè)/共52頁(yè)第四十六頁(yè)，共52頁(yè)。第47頁(yè)/共52頁(yè)第四十七頁(yè)，共

16、52頁(yè)。第48頁(yè)/共52頁(yè)第四十八頁(yè)，共52頁(yè)。編號(hào)編號(hào)成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例3右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是 。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)(lngfi)此培養(yǎng)基，可再加入 . （提示：金黃色葡萄球菌具耐鹽性）自養(yǎng)(z yn)型微生物 含碳有機(jī)物 第49頁(yè)/共

17、52頁(yè)第四十九頁(yè)，共52頁(yè)。（3）若除去(ch q)成分，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有 類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是 。固氮( dn)微生物 3 調(diào)整(tiozhng)pH 編號(hào)編號(hào)成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2O O100ml100ml第50頁(yè)/共52頁(yè)第五十頁(yè)，共52頁(yè)。（6）右表中各成分重量確定的原則是 。（7）若右表培