微生物實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)教案

1、會計(jì)學(xué)1微生物實(shí)驗(yàn)室微生物實(shí)驗(yàn)室第一頁，共29頁。2總則：環(huán)境(hunjng)與設(shè)施2.1.1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不應(yīng)影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.1.2實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)與辦公區(qū)域明顯分開。2.1.3實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域面積和總體布局應(yīng)能滿足從事檢測工作需求，實(shí)驗(yàn)室布局應(yīng)采用單方向工作流程，避免交叉污染。2.1.4實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合(fh)工作要求。2.1.5食品樣品檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈區(qū)域進(jìn)行，潔凈區(qū)域的應(yīng)有明顯標(biāo)示。2.1.6病原微生物分離鑒定工作應(yīng)在二級或以上生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。第1頁/共29頁第二頁，共29頁。3一般分為下列區(qū)域:接樣室、樣品保存室、培養(yǎng)基配制室、潔凈室、生化室、培養(yǎng)室、儀器

2、室和洗刷(xshu)消毒室，此外還有辦公室。微生物實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)(fn q)第2頁/共29頁第三頁，共29頁。4第3頁/共29頁第四頁，共29頁。5實(shí)驗(yàn)室核心(hxn)工作間的照度不低于350 lx,其他區(qū)域照度不低于200 lx，宜采取吸頂式防水潔凈照明燈。實(shí)驗(yàn)室的溫度宜控制1826范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室的相對濕度宜控制30%70%范圍內(nèi)。在安全柜開啟情況下，核心(hxn)工作間的噪聲應(yīng)不大于68 dB(A)。 -GB 19489-2008 實(shí)驗(yàn)室 生物安全通用要求第4頁/共29頁第五頁，共29頁。6病原(bngyun)微生物分類國家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個(gè)體或者群體的危害程度，將病原微生物

3、分為四類：第一類 指能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重(ynzhng)疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。（天花病毒）第二類 指能夠引起人類或者動物嚴(yán)重(ynzhng)疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。（甲、乙型肝炎病毒）第三類 指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重(ynzhng)危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重(ynzhng)疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。（沙門氏菌）第四類 指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第5頁/共29頁第六頁，共29頁。7微生物實(shí)驗(yàn)室分級(fn j)

4、 根據(jù)對所操作生物因子采取的防護(hù)措施，將實(shí)驗(yàn)室安全(nqun)防護(hù)水平（bio-safety level，BSL）分為14級，BSL-1防護(hù)水平最低。病原病原(bngyun)微生物微生物實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室一類 四級 二類 三級三類（食品致病菌） 二級四類 一級 二級生物安全柜生物安全柜三級第6頁/共29頁第七頁，共29頁。8微生物實(shí)驗(yàn)室主要(zhyo)技術(shù)指標(biāo)-GB 50346-2011 生物安全(nqun)實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范第7頁/共29頁第八頁，共29頁。9BSL-2第8頁/共29頁第九頁，共29頁。10潔凈室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺室內(nèi)

5、溫度控1826，相對濕度45%65%緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級別不同的相鄰房間(fngjin)之間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300lx。 -中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范第9頁/共29頁第十頁，共29頁。11潔凈室分級(fn j)-GB 50346-2011 生物安全(nqun)實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范第10頁/共29頁第十一頁，共29頁。12無菌室的管理(gunl)無菌室在使用前和使用后應(yīng)進(jìn)行有效的消毒。無菌室的消毒效果應(yīng)至少每兩周驗(yàn)證一次。應(yīng)

6、制定清潔、消毒、滅菌、使用和應(yīng)急處理程序。應(yīng)建立(jinl)環(huán)境監(jiān)測結(jié)果，并歸檔保存。不符合規(guī)定時(shí)應(yīng)立即停止使用。第11頁/共29頁第十二頁，共29頁。13微生物實(shí)驗(yàn)室的消毒處理(chl)方法 1 紫外線消毒在室溫2025時(shí)，220V 30W 波長253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)70W/cm2，低于此值時(shí)應(yīng)更換。適當(dāng)數(shù)量的紫外燈，確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。紫外線消毒時(shí)，無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。在無人條件下，可采取紫外線消毒，作用時(shí)間(shjin)應(yīng)30min，室內(nèi)溫度20或40、相對濕度60%時(shí)，應(yīng)適當(dāng)延長照射時(shí)間(shjin)。用紫外線消毒物品表面時(shí)，應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射，

7、且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。人員在關(guān)閉紫外燈后至少30min方可入內(nèi)操作。按照ISO18953的規(guī)定，評價(jià)紫外線的消毒與殺菌效果。第12頁/共29頁第十三頁，共29頁。14微生物實(shí)驗(yàn)室的消毒(xio d)處理方法 2 無菌室臭氧消毒封閉無菌室內(nèi)(sh ni)，無人條件下，采用20mg/m3濃度的臭氧，作用時(shí)間應(yīng)30min。消毒后臭氧濃度0.2mg/m3時(shí)方可入內(nèi)操作。按照GB/T18202的規(guī)定，檢測室內(nèi)(sh ni)臭氧濃度。第13頁/共29頁第十四頁，共29頁。15微生物實(shí)驗(yàn)室的消毒(xio d)處理方法 3 甲醛熏蒸 40%甲醛溶液(rngy)加高錳酸鉀。配制的量：每m3需甲醛10ml，高錳

8、酸鉀5g。最好的條件是溫度為2440,濕度在65%以上。房間熏蒸消毒時(shí)間為12小時(shí)以上，消毒結(jié)束后打開門窗通風(fēng)。對居民住房要求甲醛含量不大于3，可對熏蒸后的空間進(jìn)行檢測。第14頁/共29頁第十五頁，共29頁。16總則(zngz)：2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備2.3.1實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)滿足檢驗(yàn)工作的需要(xyo)，常見設(shè)備見。2.3.2實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)放置于適宜的環(huán)境條件下，便于維護(hù)、清潔、消毒與校準(zhǔn)，并保持整潔與良好的工作狀態(tài)。2.3.3實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢查和/或檢定（加貼標(biāo)識）、維護(hù)和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。2.3.4實(shí)驗(yàn)設(shè)備應(yīng)有日常監(jiān)控記錄或使用記錄。第15頁/共29頁第十六頁，共29頁。17天平(ti

9、npng)最大量程(lingchng)：100g、120g等可讀性精度：第16頁/共29頁第十七頁，共29頁。18精密(jngm)電子稀釋儀 樣品量：0.5-1000g（依靠系數(shù)調(diào)整）稀釋系數(shù)：2-1000液流速度：950ml/min重量誤差精度：1%能夠準(zhǔn)確釋放稀釋液的重量。借助經(jīng)過消毒的均質(zhì)袋，可對樣本進(jìn)行準(zhǔn)確的稀釋，最大程度地減少手工接觸(jich)操作，避免樣品污染。第17頁/共29頁第十八頁，共29頁。19均質(zhì)機(jī)將樣品和稀釋液加入到無菌的均質(zhì)袋中 ，然后將均質(zhì)袋放入拍擊式均質(zhì)器 中，關(guān)上門即開始和完成樣品的處理。拍擊時(shí)間：0.199分鐘。拍擊速度：312次/秒實(shí)際(shj)拍擊次數(shù)顯

10、示，系統(tǒng)自動調(diào)節(jié)拍擊速度。第18頁/共29頁第十九頁，共29頁。20電熱(dinr)鼓風(fēng)干燥箱RT+10250；均勻度1% 溫度波動0.5。用于玻璃器皿等耐熱(nai r)物品的烤干和滅菌。玻璃器皿等物的滅菌，溫度160165，滅菌2小時(shí)。第19頁/共29頁第二十頁，共29頁。21高壓(goy)滅菌鍋樣式大小分為手提式高壓滅菌器、立式(l sh)壓力蒸汽滅菌器、臥式高壓蒸汽滅菌器等。手提式高壓滅菌器為18L、24L、30L立式(l sh)高壓蒸汽滅菌器從30L200L用于器皿、培養(yǎng)基和廢氣污染物的滅菌。第20頁/共29頁第二十一頁，共29頁。22滅菌(mi jn)鍋的使用首先，檢查鍋內(nèi)蒸餾水量

11、是否充足，第二，檢查個(gè)個(gè)閥門(f mn)及開關(guān)是否工作正常。第三，將待滅菌的物品用一層牛皮紙或兩層報(bào)紙包好，一定要包完整！放入鍋內(nèi)，物與物之間一定要有空隙。第四，蓋好鍋蓋，螺母對稱擰緊，打開放氣閥，關(guān)閉閥門(f mn)。第五，打開電源觀察放氣閥是否有蒸汽流出，確定后關(guān)閉放氣閥，待壓力表到達(dá)0.1-0.15kpa（溫度121左右）時(shí)計(jì)時(shí)，15-30分鐘，關(guān)閉開關(guān)。第六，待壓力表指針歸零后，打開放氣閥，按對稱方式打開鍋蓋，取出物品。注意事項(xiàng): 1.鍋內(nèi)水必須用蒸餾水或純化水。 2.鍋蓋螺母必須對稱擰緊。 3.一定要在放氣閥出大量蒸汽在關(guān)閉 。第21頁/共29頁第二十二頁，共29頁。23恒溫(hng

12、wn)水浴鍋RT+599 恒溫波動度 0.5 用于實(shí)驗(yàn)備用(biyng)培養(yǎng)基或試劑的保溫。常配置：37、42、56各一個(gè)。第22頁/共29頁第二十三頁，共29頁。24恒溫(hngwn)培養(yǎng)箱控溫范圍：室溫(sh wn)+565溫度波動度：0.2定時(shí)范圍：0999分鐘用于細(xì)菌、霉菌和酵母菌的培養(yǎng)常配置：28、36、42、56各一個(gè)。第23頁/共29頁第二十四頁，共29頁。25 超凈工作臺和生物安全柜最大的區(qū)別在于(ziy)送風(fēng)的方式。 生物安全柜是一種負(fù)壓的凈化工作臺，正確操作生物安全柜，能夠完全保護(hù)工作人員、受試樣品并防止交叉污染的發(fā)生；而超凈工作臺只是保護(hù)操作對象而不保護(hù)工作人員和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的潔凈工作臺。超凈工作臺和生物(shngw)安全柜（二級（二級A2型）型）第24頁/共29頁第二十五頁，共29頁。26電子顯微鏡以顯微原理分類分為偏光(pin un)顯微鏡、光學(xué)顯微鏡與電子顯微鏡和數(shù)碼顯微鏡。常用物鏡可按放大率分為低倍(4)、中倍(10或20)、高倍(40)和油浸物鏡(100)。用于觀察微生物的形態(tài)，便于菌種的鑒定。第25頁/共29頁第二十六頁，共29頁。27冰箱(bngx