豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查分析6000

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科學(xué)生畢業(yè)論文 豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查分析 姓 名： 專 業(yè)： 指導(dǎo)教師： 分 數(shù)： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)二O一六年四月豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查分析學(xué)生姓名、年級專業(yè)、指導(dǎo)教師摘要：繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是豬“高熱綜合癥”的主要病原之一，它能引起機(jī)體免疫抑制、導(dǎo)致繼發(fā)感染，造成免疫失敗等，對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過對2013年-2015年間*省部分地區(qū)發(fā)生疑似高致病性PRRSV的豬場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，一記錄發(fā)病豬臨床癥狀和解剖癥

2、狀，采集肺、脾、淋巴結(jié)等臨床樣本，利用RT-PCR對PRRSV陽性病料中的Nsp2，并經(jīng)特異性試驗(yàn)、敏感性試驗(yàn)、多重RT PCR檢測，以此分析*省近年來PRRSV的流行情況。關(guān)鍵詞：豬；繁殖與呼吸綜合征病毒；流行病學(xué)前言豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRS)又稱“豬藍(lán)耳病”(Blue ear disease)。PRRS主要引起懷孕母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎和木乃伊胎等繁殖障礙，仔豬和育肥豬出現(xiàn)呼吸道癥狀，感染豬出現(xiàn)免疫抑制和亞臨床感染并對其它致病因子的易感性增加，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，被列為我國二類傳染病。豬是

3、PRRSV主要的自然宿主，不同性別、年齡、品種的豬都可被該病毒感染，但以感染的妊娠母豬和初生仔豬表現(xiàn)的臨床癥狀最為明顯。PRRSV在豬體內(nèi)能形成持續(xù)性感染，感染時(shí)間可達(dá)數(shù)月甚至更長。感染豬可在80-100天內(nèi)排毒并感染同一豬群。對持續(xù)感染的帶毒豬進(jìn)行病毒分離，發(fā)現(xiàn)6-9周齡仔豬分離率最高。PRRSV在豬群中的持續(xù)性感染，給PRRS的控簾和凈化帶來巨大挑戰(zhàn)。故本研究通過對2013年-2015年間*省部分地區(qū)發(fā)生疑似高致病性PRRSV的豬場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，為更好的控制該病提供科學(xué)依據(jù)。1、實(shí)驗(yàn)材料1.1 研究對象1.1.1無臨床癥狀豬。無臨床癥狀豬血樣樣品采集時(shí)間為2013年至2015年，采集*

4、省*市中區(qū)6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)及周邊地區(qū)的12個(gè)兔疫豬場。這些豬場豬群表現(xiàn)正常，未見明顯的PRRSI陸床癥狀。采集完血樣常溫或放置40C冰箱，待212h后，30004000 rpm, 40C離心5 min。取上清置-200C冰箱保存。1.1.2發(fā)病豬病。發(fā)病豬病料采集時(shí)間為2013年至2015年，采集*省*市畜牧獸醫(yī)局獸醫(yī)試驗(yàn)室化驗(yàn)門診病歷，分別來自*市8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)及周邊地區(qū)的48個(gè)不同規(guī)模豬場及農(nóng)村散養(yǎng)戶“疑似豬高熱病”病豬或血樣?！耙伤曝i高熱病”臨床癥狀有:可疑病豬主要有體溫升高，多在39.242之間，呈稽留熱，若用抗生素和解熱藥治療后，體溫恢復(fù)正常，停藥后馬上反彈。精神倦怠，少食或不食。有的表現(xiàn)喘氣或呈

5、不規(guī)則呼吸，部分患豬流鼻涕、打噴嚏、咳嗽、眼分泌物增多、眼瞼腫脹，出現(xiàn)結(jié)膜炎癥狀，部分豬伴有腹瀉，有時(shí)便秘。初期全身皮膚發(fā)紅，后轉(zhuǎn)為耳部、胸腹部、背部及四肢皮膚有紫紅色斑點(diǎn)。懷孕母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)弱胎、死胎及木乃伊胎等現(xiàn)象。共調(diào)查、收集48個(gè)不同規(guī)模豬場及農(nóng)村散養(yǎng)戶172份病料，包括病豬心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)、胎兒組織、胎盤等臟器或血液樣品。每一病例取部分病變組織3.0g左右，加少量滅菌PBS，用滅菌研磨器研磨至糊狀，再加滅菌PBS釋成乳劑，置-70 0C冰箱反復(fù)凍融3次(血清樣品無需研磨反復(fù)凍融)，30004000 rpm, 4離心5 min，取上清置-20 0C冰箱保存。1.2主要

6、試劑及儀器Taq DNA聚合酶、鼠源反轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV)，RNA酶抑制劑(Rnase Inhibitor )，dNTP，pMD 18-T載體均購白大連寶生物工程有限公司；Trizol Reagent購白invitrogen公司；DEPC購白Amresco公司；瓊脂糖購白Sigma公司。其他化學(xué)試劑（如：氯仿、異丙醇、無水乙醇等）均為國產(chǎn)分析純產(chǎn)品；PRRSV抗體檢測試劑盒(購自北京愛德士元亨生物科技有限公司)。TGL-16G型高速臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；80-2B型低速臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；HH.B 11型電熱恒溫培養(yǎng)箱(濰坊醫(yī)療器械廠)；SW-TC-2A型超凈工作臺(

7、上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)；ELX800型酶標(biāo)儀(美國BioTek公司)；TGL-16G型常溫離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠制造)；PCR儀、Centrifuge 54178臺式冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf公司)，JA1003型電子天平(上海精科天平)；DYYIII-31 A/31 B型電泳槽(北京六一儀器廠)；Gdldoc EQ凝膠成像分析系統(tǒng)(美國BIO-RAD公司)；SUB28型恒溫水浴水槽(英國Grant公司)；超凈工作臺(加拿大Canadian Cabinets公司)。1.3引物根據(jù)GeneBank中已發(fā)表的豬繁殖與呼吸綜合征病毒JXA 1毒株，設(shè)計(jì)合成目的基因PRRSV Nsp2基因

8、片段引物PN 1, PN2和擴(kuò)增ORFS基因的引物P51, P52，同時(shí)根據(jù)己發(fā)表的CSFV核酸序列，選擇高度保守性的5端非編碼區(qū)設(shè)計(jì)豬瘟引物CS 1, C52,引物由上海生工生物工程公司合成，使用前用滅菌超純水配成濃度為25Pmol/L，-20 0C保存?zhèn)溆?。?jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證PN 1, PN2, CS 1, C52可以組合為多重RT PCR同時(shí)檢測高致病性PRRSV與CSFV。(見表2)。表1.引物設(shè)計(jì)名稱Name引物序列Primers引物位置Primer position片段大小/opFragment size/bp用途appticationPN15'-CGGTTTTGATGGGCGAC

9、A-3'27382755nt718/807多重RT-PCRPN25'-TGCAGGCGTGCGAGGTAA-3'34383456nt檢測高致C515-AGACGGAGGGACTAGCCGT-3120138nt267病性 PRRSVC525-GATTCAACTCCATGTGCCATG-3366386nt與CSFVP515'-AAGCGGTGGGCAACCGTTT-31363713656nt697PRRSV ORFSP525'-TTTGTGAGCCGTGCTATCA-31431414333nt基因的擴(kuò)增1.4主要緩沖溶液及相關(guān)試劑配制電泳緩沖液(SOXTAE

10、 ) : Tris base 242 g加入到700 mL ddH20中，再加入冰醋酸57.1 mL, 0.5 mol/L EDTA (pH8.0) 100 mL，用ddH20定容至1000 mL。0.8%瓊脂糖凝膠：2 mL 50×TAE緩沖液、98 mL ddHzO、瓊脂糖0.8 g，加熱溶解。瓊脂糖凝膠上樣緩沖液購自寶生物公司。TE緩沖液(pH8.0 )：1 mmol/L EDTA (pH8.0)，10 mmol/L Tris.Cl (pH8.0)。質(zhì)粒提取用緩沖溶液:溶液I（Solution I )，溶液II（Solution II ),溶液III (Solution III

11、)購自上海生工。DEPC處理水:0.1 % DEPC 。PBS:稱取8 g NaCI，0.2 g KCI，1.44 g NaZHP04，0.24 g KHZP04，溶于800mL ddH20中，調(diào)pH至7.2，定容至1000 mL，高壓蒸氣滅菌，室溫保存?zhèn)溆谩?.5感受態(tài)細(xì)胞制備保存用試劑0.1 mol/L CaC12溶液:取27 g CaC126HZ0溶于ddH20中并定容至過濾除菌，分裝后置一20保存，用于大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備。20%甘油:取20m1甘油溶液無菌ddH20中并定容至100m1，搖勻，高壓下蒸氣滅菌20 min，置于4保存。2、研究內(nèi)容與方法2.1樣品采集與處理血液和組織

12、的采集處理。將采集的血液在常溫條件下放置20min，等血清析出后，收集于1.5 m1EP管中，置于4條件下，5000 r/min離心30 min，收集上清于另取一干凈無菌EP管中。采集的組織病料，加入3-5倍的DMEM培養(yǎng)基，置于無菌的勻漿器中研磨，將研磨好的組織勻漿-80凍融三次，然后于4條件下，8000 r/min離心15 min，收集上清。將收集的血清和組織勻漿上清用0.22 m的濾膜過濾后，冰凍在-80保存?zhèn)溆谩?.2總RNA的提取 (1)取100l血清或組織勻漿液上清于一無菌1.5m1離心管中，加入1 mlTrizol ,充分混勻，室溫靜置35min。(2)向靜置后混合液中加入200

13、1氯仿，混合均勻。(3)將離心管置于冰中冰浴10min 。(4)將離心管放入離心機(jī)中4條件下，12000rpm，離心l0min。(5)用移液器小心吸出上層水相，加入另一無RNA酶的干凈離心管中，然后再向離心管中加入等體積的異丙醇，輕輕搖勻。室溫放置l0min 。(6)再將離心管置于離心機(jī)中4條件下，12000rpm，離心l0 min。(7)離心完后，取出離心管，吸棄上清，加入lml 75%乙醇洗滌。(8) 4條件下，7500rpm,離心5min。(9)小心吸棄上清，自然風(fēng)干。(10)等乙醇全部散去，加入適量0.1 % DEPC充分溶解。2.3兩步法RT PCR第一步:cDNA合成RT反應(yīng)體系:

14、MGC12 (25mM)2l10×RT Buffer1lRnase Free dH202.75ldNTP Mixture(10 mM)1lRNase Inhibitor(40 U/l)0.25lAMV Reverse Transeriptase(5U/l)0.5lOligo Dt(2.5pmol/l)0.5l實(shí)驗(yàn)樣品RNA2lTotal10lRT的反應(yīng)程序?yàn)?2.0反轉(zhuǎn)錄30 min，95.0 5 min，5 5 min進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。將合成好的cDNA用于第二步PCR反應(yīng)。第二步:特異性片段合成PCR反應(yīng)體系:滅菌蒸餾水27.88l5×PCR Buffer10lTaKaPa

15、Ex Tap HS0.25lcDNA10 lTotal50 l上游特異性PCR引物（20 pmol/l）0.5l下游特異性PCR引物（20 pmol/l）0.5lNSP2-del-F/R檢測引物反應(yīng)條件:94.0預(yù)變性5 min， 94.0變性0.5 min,57.0 退火0.5 min，72.0延伸40 s，36個(gè)循環(huán)數(shù)，72.0延伸10 min，4保存，其擴(kuò)增產(chǎn)物大小為508bp或418bp。NSP2F/R引物反應(yīng)條件:94.0預(yù)變性5 min，94.0變性0.5 min，57.0退火0.5 min, 72.0延伸1.5 min，36個(gè)循環(huán)數(shù)，72.0延伸10 min，4 保存，其擴(kuò)增產(chǎn)物

16、大小約lkb。ORFSF/R引物反應(yīng)條件:94.0預(yù)變性5 min，94.00C變性0.5 min, 57.0退火0.5 min, 72.0 延伸1 min，35個(gè)循環(huán)數(shù)，72.0 延伸10 min，4 保存，其擴(kuò)增產(chǎn)物大小約650 bp。2.4特異性試驗(yàn)分別取試驗(yàn)室保存的PRRSV SX-1變異毒株與CSFV疫苗毒株作為陽性對照，使用四對引物混合物，分別對陽性對照和陰性對照進(jìn)行擴(kuò)增試驗(yàn)，測試引物特異性。2.5敏感性試驗(yàn)核酸蛋白檢測儀測定PRRSV SX-1株和CSFV疫苗毒株的混合RNA以確定其基因組RNA的濃度，并將提取的RNA依次做10倍梯度稀釋，每個(gè)稀釋度取3L作為模板，進(jìn)行多重RT

17、PCR擴(kuò)增以檢測其敏感性。2.6臨床病料的多重RT PCR檢測利用建立的多重RT PCR方法對棗莊地區(qū)的不同規(guī)模豬場及農(nóng)村散養(yǎng)戶“疑似豬高熱病”病豬或血樣進(jìn)行檢測，同時(shí)以PRRSV SX-1株和CSFV疫苗株為陽性對照，以滅菌水作為陰性對照。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析3.1無臨床癥狀豬血清抗體檢測結(jié)果3.1.1無臨床癥狀豬不同疫苗血清抗體的檢測結(jié)果結(jié)果顯示，對所采集的2008-2010年間采集的12個(gè)免疫豬場的929份血清，4個(gè)未免豬場的126份血清進(jìn)行ELISA抗體檢測，未免疫PRRSV疫苗的無臨床癥狀豬群抗體陽性率達(dá)53.2%（ 67/126 )，免疫滅活疫苗的無臨床癥狀豬群免疫抗體抗體陽性率為7

18、1.1 % (404/568 )，免疫弱毒疫苗的無臨床癥狀豬群免疫抗體陽性率為88.I% （318/361)。經(jīng)ELISA檢測，結(jié)果見表2。表2 本地區(qū)PRRS血清學(xué)調(diào)查結(jié)果豬群樣品數(shù)陽性樣品數(shù)陽性率（%）免疫弱毒苗豬群36131888.1免疫滅活苗豬群56840471.1未免疫豬群1266753.23.1.2 不同年齡段豬血清中PRRSV抗體的陽性率比較對所采集到861份血清進(jìn)行PRRSV抗體檢測，按仔豬、幼豬、成豬三個(gè)生長階段分析結(jié)果見表3。從表格中可見，按不同生長階段豬血清中PRRSV抗體的陽性率差異較大，仔豬的血清抗體陽性率最高，達(dá)到95.6%，成豬的血清抗體陽性率最低，為53.7%，

19、幼豬的血清陽性率居中，為88.0%，血清抗體陽性率仔豬與成豬之間差異顯著(P<0.05)；幼豬與成豬之間差異顯著(P<0.05 )；仔豬與幼豬之間差異不顯著(P>0.05)。表3不同年齡段豬血清中PRRSV抗體的陽性率統(tǒng)計(jì)分析年齡段樣品數(shù)陽性樣品數(shù)陽性率（%）仔豬20319495.6幼豬27233688.0成年豬27214653.7合計(jì)85767678.93.2發(fā)病豬病料多重RT-PCR檢測結(jié)果3.2.1特異性試驗(yàn)分別提取PRRSV SX-1變異毒株與CSFV疫苗毒株，利用表2中四對引物的混合物，對上述模板進(jìn)行擴(kuò)增。結(jié)果在PRRSV的模板中，擴(kuò)增出了大小約為719bp的特異性

20、片段;在含有CSFV的模板中，擴(kuò)增出了大小約為267 by的特異性片段。同時(shí)對臨床“疑似高熱病料”進(jìn)行檢測，結(jié)果見圖1，反應(yīng)特異性良好。圖1 引物特異性分析3.2.2敏感性試驗(yàn)用核酸蛋白檢測儀測定得到PRRSV SX-I株與CSFV疫苗毒株的混合基因組RNA濃度為20g/mL。將提取的RNA依次做10倍梯度稀釋，每個(gè)稀釋度取10L模板，用引物PI和P2進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示其敏感性為20 pg。3.2.3多重RT-PCR檢測病料RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳司一見兩條特異性擴(kuò)增片段的條帶，大小分別為750bp和260bp左右，與預(yù)期結(jié)果一致。多重RT-PCR方法檢測部分樣品的

21、電泳結(jié)果如圖2所示。多重RT-PCR檢測病料結(jié)果見表4。圖2 多重RT-PCR檢測結(jié)果表4 本地區(qū)病例多重RT-PCR檢測結(jié)果抗原2013年陽性率2014年陽性率2015年陽性率合計(jì)PRRSV65.351.68.356.4CSFV36.724.78.331.4PRRSV+ CSFV14.311.3-12.2從表6結(jié)果顯示，20132015年間本地區(qū)采集的172份疑似“豬高熱病”樣品高致病性PRRSV陽性占56.4%（97/172），CSFV陽性占31.4%(54/172)。PRRSV和CSFV的多重混合感染，陽性占12.2%（21/172)。4、討論從2006年以來，棗莊地區(qū)許多中小規(guī)模豬場或

22、散養(yǎng)豬場開始爆發(fā)“豬高熱病”，不同的是，到2008年之前的“豬高熱病”主要感染仔豬和保育豬，最近發(fā)生的疫情對母豬和育成豬也有較高的發(fā)病率和死亡率。用ELISA檢測未進(jìn)行PRRSV疫苗免疫的豬場的血清中檢測出陽性抗體，結(jié)果顯示陽性率高達(dá)53.2%（67/126），表明調(diào)查豬場有PRRS自然感染。近年來，國內(nèi)普遍采用疫苗免疫的方法控制PRRS的發(fā)生，本試驗(yàn)對棗莊免疫滅活疫苗和弱毒疫苗的12個(gè)無臨床癥狀豬群場進(jìn)行ELISA抗體檢測，結(jié)果顯示，免疫滅活疫苗的無臨床癥狀豬群陽性率為71.1%（404/568），免疫弱毒疫苗的無臨床癥狀豬群陽性率為88.1% (318/361)，這與杜蘭榮報(bào)道的山東省7個(gè)

23、規(guī)?；i場進(jìn)行火活疫苗免疫后豬群的平均PRRS抗體陽性率為75.49%, 9個(gè)規(guī)?；i場進(jìn)行弱毒疫苗免疫后豬群的平均PRRS抗體陽性率達(dá)90.65%相一致。結(jié)果表明，不同疫苗引起的免疫應(yīng)答存在一定差異，弱毒疫苗的抗體陽性率普遍高于滅活苗。同時(shí)進(jìn)行PRRSV疫苗免疫的豬場的血清中檢測出陽性抗體普遍高于70%，說明棗莊地區(qū)該豬場針對PRRS己進(jìn)行相應(yīng)的疫苗防治，并取得一定效果。不同年齡段豬相比，仔豬的抗體陽性率為95.6%，顯著高于成年豬。結(jié)果表明:仔豬與其他日齡豬相比抗體水平最高，可能與母源抗體有關(guān)。本研究僅限于針對滅活疫苗和弱毒疫苗的抗體檢測與分析，得出PRRSV弱毒疫苗產(chǎn)生免疫應(yīng)答水平高于滅

24、活疫苗。但本研究未能對弱毒疫苗的安全性及抗體中和情況進(jìn)行研究，而且本研究只用血清學(xué)方法對豬的PRRSV抗體進(jìn)行檢測，不能檢測免疫豬與自然感染豬的抗體不同。在現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)中，存在疫苗免疫后高抗體陽性率的豬群仍有感染發(fā)病的現(xiàn)象，因此對于PRRS疫苗的免疫效果的評價(jià)仍然需要進(jìn)一步探討。2006年6月份以來，我國爆發(fā)了從南到北幾乎席卷全國的“豬高熱病”疫情，給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中高致病性PRRSV是導(dǎo)致豬“高熱綜合癥”的主要病原之一，在有些病例也檢測到CSFV。目前，很多豬場都存在有這兩種傳染病，并且CSFV和PRRSV常呈混合感染，每年都給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。通過對感染PRRSV的

25、豬仔細(xì)觀察、分析發(fā)現(xiàn)，PRRS感染豬常伴隨著混合感染或繼發(fā)感染，各個(gè)豬場的感染情況又不盡相同，所以在臨床癥狀和剖解病變上的表現(xiàn)也不同。有的PRRSV發(fā)病豬場由于混合感染了附紅細(xì)胞體，還會有以下癥狀:尿的顏色呈濃茶樣，胸部、腹部、肛門等處皮膚發(fā)給，解剖可見皮下脂肪和組織漿膜黃染以及皮下出血點(diǎn)等特征;有的豬場由于混合感染胸膜肺炎，會出現(xiàn)明顯的纖維素性胸膜肺炎病變，肺臟與胸膜粘連，心包膜與心臟粘連，胸腔和腹腔有纖維蛋白的滲出;有的豬場混合感染豬瘟，可見脾臟邊緣有出血性梗死灶，腎臟和膀膚粘膜有出血點(diǎn)等病變?？傊總€(gè)豬場發(fā)病豬所表現(xiàn)的癥狀和病變多種多樣，但是高致病性PRRSV作為最重要的致病性特征是感染

26、豬后，導(dǎo)致豬體免疫抑制，機(jī)體抵抗力下降，從而出現(xiàn)激發(fā)或混合感染，最后導(dǎo)致較高的發(fā)病率和死亡率。本研究通過建立的多重RT PCR，對2013-2015年從*市8個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)及周邊地區(qū)的48個(gè)不同規(guī)模豬場及散戶所采集的172份臨床疑似“豬高熱病”樣品進(jìn)行了檢測，檢測方法靈敏，結(jié)果可信度較高。棗莊地區(qū)采集的172份臨床疑似“豬高熱病”樣品，PRRSV陽性占56.4% (97/172 )，CSFV陽性占31.4%( 54/ 172)。這與王仕榮等在廣西“豬高熱綜合征”主要病原調(diào)查中，檢出率最高的為PRRSV變異株毒株占59. 59%(87/ 146)相似，李維華(2008)等報(bào)道的CSFV感染的陽性率較低，

27、僅為3.13%，與本結(jié)果不完全一致。本試驗(yàn)結(jié)果表明，雖然棗莊地區(qū)已經(jīng)進(jìn)行了相應(yīng)的疫苗預(yù)防，但是從疑似“豬高熱病”樣品上檢測到PRRSV和CSFV的感染仍然存在。王義桂等(2007)報(bào)道近幾年山東養(yǎng)豬業(yè)存在CSFV和PRRSV及PRV等多種病毒的混合感染。本試驗(yàn)進(jìn)一步對采集的172份樣品進(jìn)行了多重RT PCR檢測，結(jié)果顯示，本地區(qū)也均存在PRRSV和CSFV的混合感染，陽性占12.2% (21/172)。由于PRRSV能引起免疫抑制，促進(jìn)CSFV等病毒的感染，造成細(xì)菌大量繼發(fā)感染，可能加重豬發(fā)病并導(dǎo)致死亡。因此，在今后的疾病防控中，如何提高豬體的免疫力值得重視。5、結(jié)論5.1 通過對203年一2

28、015年*省多個(gè)地區(qū)發(fā)生可疑豬繁殖與呼吸障礙綜合征的豬場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明各種日齡的豬群均可感染發(fā)病，且發(fā)病率和死亡率均較高。5.2 PRRSV發(fā)病豬臨床癥狀典型，母豬流產(chǎn)，小豬高熱；同時(shí)解剖癥狀表明，從疑似“豬高熱病”樣品上檢測到PRRSV和CSFV的感染仍然存在，并且存在PRRSV和CSFV混合感染的狀況。5.3通過幾年來對PRRS防控措施的實(shí)施，效果顯著，免疫接種、科學(xué)管理、藥物防治等是控制該病發(fā)生和流行的重要措施。致 謝本論文是在導(dǎo)師*教授的悉心指導(dǎo)下完成的，老師在百忙之中抽出時(shí)間幫助我，為我解疑答惑，開闊了我的思路，同時(shí)還引導(dǎo)我不斷創(chuàng)新，讓我的論文更加的題文結(jié)合，在此我向我的

29、指導(dǎo)老師表達(dá)我誠摯的謝意！從論文選題到現(xiàn)在的完成，老師、學(xué)長、學(xué)姐、同學(xué)、朋友們都幫助了我很多，千言萬語只能說一句感謝！正是要謝謝大家的無私幫助，這篇論文才會完成，在這里，謹(jǐn)向*老師致以最崇高的謝意！參考文獻(xiàn)1 張玉德，王光祥，吳錦艷，等.2007-2010年間我國西北地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查J.中國獸醫(yī)科學(xué)，2012(10)：1081-1088.2 李冰，高慎陽，盧赫，等.歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒遼寧分離株全基因測序與遺傳演化分析J.畜牧與獸醫(yī)，2015，47(2)：755-757.3 Li Y，Wang X，Bo K，et al. Emergence of a hi

30、ghly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus in the Mid-Eastern region of ChinaJ. The Veterinary Journal，2007，174(3)：577-584.4 安同慶，田志軍，李冉，等.我國高致病性豬藍(lán)耳病病毒的潛在起源與演變軌跡.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集，2010: 377.5 Shi M, Lam T T Y, Hon C C, et al. P坷logeny-based evolutionary, demographical, and geographical dissection of North American type 2 porcine reproductive and respiratory syndrome virusesJ. Journal of virology，2010，84(17)：8700-8711.6 周鐵忠.遼寧