姜黃素對H202損傷HK-2細(xì)胞的修改

1、姜黃素對H202損傷的HK-2細(xì)胞的保護(hù)作用導(dǎo) 師 紀(jì)玉蓮碩 士 洪漢利1研究背景急性腎功能衰竭是臨床常見的綜合征,其死亡率一直居高不下。各種病因?qū)е碌腁RF均有腎小管上皮細(xì)胞,包括近端小管(HK-2細(xì)胞)等受到嚴(yán)重受損或死亡的顯著特點(diǎn) 。A越來越多的資料表明,腎小管上皮細(xì)胞過度凋亡在ARF的發(fā)病機(jī)制中起了重要作用。2研究背景近年來的研究證明，在腎缺血或中毒性ARF中,細(xì)胞凋亡明顯增加。腎缺血與缺血后再灌注均可使氧自由基與活性氧增多,大量氧自由基生成又是造成缺血再灌注損傷的重要介質(zhì)。34研究背景各種氧化劑 (如過氧化氫)可以直接誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。a抑制aSOD的活性也可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。a使用抗氧化

2、劑(如:Vit E 等)可以阻斷氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。5研究背景姜黃素(Curcumin,Cur)是從姜黃中提取的酚性色素,為姜黃的主要有效成分,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明它具有抗氧化作用。ARajakrishnan等發(fā)現(xiàn)Cur 可通過抗氧化作用而對乙醇誘導(dǎo)的腦細(xì)胞損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用。AACur 可否通過抗氧化作用而對H2O2誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用尚未見報導(dǎo)。 Sujata MK ,et al Biophys Chem,1999;80(2) Rajakrishnan V,et al;Phytother Res,19996研究目的探討姜黃素對H2O2誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響7研究內(nèi)容探討

3、H2O2誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。姜黃素對HK-2細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用8 第一部分H2O2對HK-2細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用9實(shí)驗(yàn)方法:不同濃度H2O2與HK-2細(xì)胞共同培養(yǎng),觀察凋亡率H2O220umol/L100umol/L200umol/L400umol/L1.電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化.2.MTT(甲氮甲唑藍(lán))法檢測細(xì)胞增殖狀況3.碘化丙啶(PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞凋亡.4.羅丹明123(RH123)染色FCM檢測細(xì)胞線粒體膜電位.5.DHR染色FCM檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量.6.熒光測定免疫吸附法(FIENT)測定Caspase3活性.10預(yù)期結(jié)果H2O2有誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡的作用,并且呈劑量依賴關(guān)系。11第二部分姜黃素對H2O2損傷的HK-2細(xì)胞的保護(hù)作用12實(shí)驗(yàn)方法:以H2O2損傷HK-2 細(xì)胞為模型研究姜黃素對HK-2細(xì)胞的保護(hù)作用檢測指標(biāo):1.電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化2.測定Caspase活性3.檢測細(xì)胞線粒體膜電位4.測定細(xì)胞內(nèi)ROS.5.檢測Bcl-2表達(dá)