沙門氏菌檢測文件

1、 HYPERLINK / FDA沙門氏菌檢驗標準中文版（一）U.S. Department of Health and Human Services U.S. Food & Drug AdministrationCenter for Food Safety & Applied NutritionBacteriological Analytical Manual April 2003 沙 門 氏 菌 檢 測FDA分析手冊(2003年3月)第5章章節(jié)內(nèi)容1、 簡介2、 設(shè)備和材料3、 培養(yǎng)基和試劑4、 樣品的制備5、 沙門氏菌的分離培養(yǎng)6、 沙門氏菌的鑒定7、 快速檢測方法(附錄1)8、 參考文獻

2、簡介在第8版的BAM手冊中，沙門氏菌的檢測方法有了幾個改變。第一個改變是RV培養(yǎng)基的廣泛使用，即可用于檢測含沙門氏菌量高的食品，又可于檢測含沙門氏菌量低的食品，往常的版本中，RV培養(yǎng)基僅用于蝦類的檢測。依據(jù)AOAC反復(fù)研究的結(jié)果，RV培養(yǎng)基即可用于檢測含沙門氏菌量高的食品，又可于檢測含沙門氏菌量低的食品。除口香糖外的所有食品，RV培養(yǎng)基替代了SC培養(yǎng)基。此外，RV培養(yǎng)基取代了必須含有活性干酵母的LST肉湯培養(yǎng)基。TTB肉湯接著用于第二種選擇性增菌培養(yǎng)基，包括口香糖在內(nèi)的食品，在檢測含菌量高的食品時需進行43培養(yǎng)；在檢測含菌量低的食品時需進行35培養(yǎng)。第二個改變是關(guān)于冷藏食品前增菌和低水份食品選

3、擇性增菌培養(yǎng)的時刻為72小時以內(nèi)，如此，樣品檢測的時刻最遲星期三或星期四能夠開始，周末也不用加班。第三個改變是縮短了在LIA斜面上的培養(yǎng)時刻，在往常的版本(BAM-7)中，TSI和LIA斜面在35培養(yǎng)的時刻分不為242h和482h。未公布的一些資料表明，48小時后觀看LIA斜面結(jié)果是沒有任何診斷價值。對193個LIA斜面進行試驗，培養(yǎng)242h后，所有的斜面都給出了正確的結(jié)果。再培養(yǎng)24h后，試驗的結(jié)果沒有什么重大的改變。因此，TSI和LIA斜面培養(yǎng)基現(xiàn)在改為培養(yǎng)242h。第四個改變是蛋殼表面滅菌步驟的改變。在往常的版本(BAM-7)中，蛋殼表面滅菌的方法是在0.1%的HgCl2溶液中浸泡1h，

4、然后在70%的乙醇溶液中浸泡30分鐘。HgCl2對人體是有害的，依據(jù)環(huán)境愛護組織的要求進行處理，費用是特不昂貴的。在新版的手冊（BAM-7）中，蛋殼表面的消毒只需通過浸泡在含0.1%SDS的次氯酸鈉溶液(含Cl-200PPM)中30分鐘。第五個改變是蛋類樣品的制備。在檢測前，蛋的內(nèi)容物(蛋黃和蛋白)需進行完全混勻。之后，取25ml加入含硫酸鐵的胰酪胨大豆肉湯中。本版中，制定了口香糖的檢測方法。口香糖樣品和增菌肉湯以1：9的比例進行混合，得到的混合物特不粘，不易被吸管吸出。另外添加纖維素酶時，容易被吸管吸出。由于最近桔子汁相關(guān)事件的發(fā)生，其檢驗方法也己制定出，被檢的桔子汁包括經(jīng)巴氏消毒和未經(jīng)巴氏

5、消毒的。從選擇性平板上挑菌落講明更明白和科學(xué)。假如在選擇性平板上沒有可疑的典型菌落，建議挑取幾個非典型菌落接種到TSI和LIA培養(yǎng)基上。由于在過去的幾年里，F(xiàn)DA的科學(xué)家們從一些食品中，特不是從海產(chǎn)品中分離出沙門氏菌，其中4%左右在選擇性平板是非典型菌落。最后，自成BAM-7發(fā)行以來，差不多制定出6種培養(yǎng)基的使用講明。包括3種選擇性培養(yǎng)基（BS瓊脂、HE瓊脂和XLD瓊脂）和3種比較新的培養(yǎng)基(EF-18、XLT、Rambach 瓊脂)。我們的實驗結(jié)果證實，用一種或幾種新的培養(yǎng)基來取代BAM中推舉的培養(yǎng)基是不理想的。因些，我們一直保留下來。A、設(shè)備和材料1、 攪拌器和無菌攪拌杯2、 無菌500M

6、L廣口螺口三角瓶、無菌500ML長頸三角瓶、無菌250ML燒杯、無菌玻璃漏斗、無菌采樣器3、 無菌玻璃涂布捧或塑料涂布捧4、 電子天平，精度0.1g，最大量稱2000g5、 電子天平，精度5mg，最大量稱120g6、 培養(yǎng)箱：3527、 冰箱：428、 水浴箱：4919、 循環(huán)的、溫度可調(diào)的水浴箱：430.210、循環(huán)的、溫度可調(diào)的水浴箱：420.211、無菌藥匙或其它合適的工具：用于稱樣品12、無菌培養(yǎng)皿：15X100MM，玻璃或一次性的13、1ml無菌吸管,刻度0.01ml、5ml和10ml無菌吸管,刻度0.1ml14、接種針和接種環(huán)15、無菌試驗試管或培養(yǎng)試管：16X150MM和20X1

7、50MM血清學(xué)鑒定管：10X75MM或13X100MM16、試管架17、旋轉(zhuǎn)混合器18、無菌剪刀、大剪刀、解剖刀及鑷子19、燈：用于觀看生化反應(yīng)20、電爐21、PH試紙：PH值6-8，最大變色范圍在0.4PH單位22、PH計23、28X37CM的無菌塑料袋，易拉口(在第23-24節(jié)中，檢測蛙腿和兔體時用)24、塑料燒杯：能耐高溫高壓，用于振蕩培養(yǎng)過程中，固定塑料袋B、培養(yǎng)基和試劑1、 乳糖肉湯(M74)2、 脫脂奶粉(M111)3、 SC肉湯(M134)4、 TTB肉湯(M145)5、 RV培養(yǎng)基(M132)6、 XLD瓊脂(M179)7、 HE瓊脂(M61)8、 BS瓊脂(M19)9、 TS

8、I瓊脂(M149)10、色氨酸肉湯(M164) 11、胰酪胨大豆肉湯(M154)12、含硫酸鐵的胰酪胨大豆肉湯(M186)13、月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(M76)14、胰酪胨示胨大豆肉湯(M160)15、MR-VP肉湯(M104)16、西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基M13817、尿素肉湯(M171)18、尿素肉湯(快速)(M172)19、丙二酸鈉培養(yǎng)基(M92)20、LIA培養(yǎng)基(M89)21、賴氨酸脫羧酶肉湯(M87)22、動力培養(yǎng)基(M103)23、KCN培養(yǎng)基(M126)24、苯酚紅糖類發(fā)酵肉湯(M121)25、紫色糖類發(fā)酵肉湯(M130)26、麥康凱瓊脂(M91)27、營養(yǎng)肉湯(M114)28、

9、BHI肉湯(M24)29、5%木瓜蛋白酶溶液(M56a)30、1%纖維素酶溶液(M187)31、月示胨羊血瓊脂基礎(chǔ)(M166)32、通用前增菌肉湯(UPM,M188)33、無水亞硫酸鉀粉末34、200ppm次氯酸鈉溶液，含0.1%SDS(R12a)35、70%乙醇溶液(R23)36、靛基質(zhì)試劑(R38)37、V-P試劑(R89)38、肌酸晶體39、40%KOH溶液(R65)40、1N NaOH溶液(R73)41、1N HCl溶液(R36)42、1%煌綠溶液(R8)43、溴甲酚紫溶液,0.2%(R9)44、甲基紅指示劑(R44)45、無菌蒸餾水46、Tergitol-7(R78)47、Trito

10、n X-100(R86)48、0.85%生理鹽水(R63)49、適當(dāng)濃度的生理鹽水(R27)50、沙門氏菌多價O血清51、沙門氏菌多價H血清52、沙門氏菌多價O群血清：A、B、C1、C2、C3、D1、D2、E1、E2、E3、E4、F、G、H、I、Vi和其它相應(yīng)血清53、沙門氏菌Spicer-Edwards H血清C、樣品制備以下的方法均以25g樣品作為抽檢單位，樣品與肉湯培養(yǎng)液的比例為1:9。依照樣品的組成成份不同，添加足夠的肉湯培養(yǎng)基保持1:9的比例，除非專門講明，例如，蛙腿等不需準確稱量檢測的樣品，需采納專門的方法。1、干蛋黃、干蛋白、干全蛋、液體牛奶(脫脂牛奶、含2%脂肪牛奶、全牛奶和脫

11、脂奶粉)，粉狀調(diào)制食品(蛋糕、甜餅、炸面圈、餅干和面包)、嬰兒食品、口食或軟管進食的含蛋食品。檢驗前的冷凍食品最好不要解凍。假如冷凍樣品必須軟化來獲得待檢部分，盡可能縮短解凍的時刻，使竟爭菌群生長最少，并減小對沙門氏菌的損傷。解凍需在45以下進行，置于能自動控溫的水浴鍋內(nèi)，不斷攪拌15分鐘或在2-5解凍18小時。無菌稱取25克樣品，放入無菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ML)或其它合適的容器內(nèi)。關(guān)于非粉末狀的樣品，加入225ml無菌的乳糖肉湯；關(guān)于粉末狀的樣品，先加入約15ml無菌的乳糖肉湯，用無菌的玻璃捧、藥匙或舌狀器具攪拌，使其均勻懸浮，再加入3份無菌乳糖肉湯，分不為10ml、10ml和190

12、ml,使總量為225ml。充分攪拌，直到樣品完全懸浮，沒有塊狀物。小心地蓋緊瓶蓋，室溫靜置605min。振蕩混勻，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開約1/4圈，置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。2、蛋類a、 含殼蛋。用硬刷子洗蛋并使其干燥，然后浸泡于含0.1%SDS的200ppm 氯離子溶液中30分鐘。此溶液的配制如下：取8ml 5.25%的次氯酸鈉溶液和1gSDS加入992ml蒸餾水中溶解即可。這種消毒液需在使用前配制。無菌打開蛋殼置于無菌的容器內(nèi)，用無菌的藥匙或其它工具混合蛋清和蛋黃。無菌稱取25g于無

13、菌的三角瓶中或其它合適的容器內(nèi)，加入225ml含硫酸鐵的TSB肉湯(1L TSB中加入35mg硫酸鐵)，混勻，室溫靜置605min。振蕩混勻，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。b、液全蛋（均勻狀）。無菌稱取25g于無菌的三角瓶或其他適宜的容器內(nèi)，加入225ml含硫酸鐵的TSB充分搖勻，按上面的方法接著。c、 煮硬的蛋（雞蛋、鴨蛋或其他種類的蛋）。假如蛋殼完整，向上述方法進行消毒，無菌分離蛋殼，弄碎蛋黃和蛋白，稱取25g與無菌的500ml的錐形瓶中或其他的容器內(nèi)，加入225mlTSB，

14、同時搖勻，按上述方法接著。3、脫脂干奶粉a、 速溶型。無菌稱取25g樣品于無菌的燒杯或其他適宜的容器內(nèi)，用滅菌的玻璃或紙質(zhì)的漏斗（用帶卷好以便高壓滅菌）將樣液25ml慢慢注入滅菌的500ml的含225ml的煌綠水的錐形瓶中或其他適宜的容器內(nèi)，使樣液覆蓋在煌綠水的表面，也可多個25g檢測單位混合倒入含有相應(yīng)比例煌綠水的容器內(nèi)，使樣品覆蓋在煌綠水的表面，按每1000ml滅菌蒸餾水中加入2ml2%的煌綠溶液進行配制，將樣品容器室溫靜置605min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35培養(yǎng)242h，按D1-11接著。b、 非速溶。按上述速溶脫脂干奶粉的檢測方法進行，但不同意將多個25g樣品檢測單位混合。

15、4、全脂奶粉。按上述速溶脫脂干奶粉的檢測方法進行，但不同意將多個25g樣品檢測單位混合。5、酪蛋白a、 乳酪。無菌稱取25g樣品于無菌的250ml燒杯或其他適宜的容器內(nèi)，用滅菌的玻璃或紙質(zhì)的漏斗（用帶卷好以便高壓滅菌）將樣液25ml慢慢注入滅菌的500ml的含225ml的一般肉湯的錐形瓶中或其他適宜的容器內(nèi)，使其覆蓋在一般肉湯的表面，也可多個25g檢測單位混合倒入含有相應(yīng)比例一般肉湯的容器內(nèi)，使樣品覆蓋在一般肉湯的表面，將樣品容器室溫靜置605min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35培養(yǎng)242h，按D1-11接著。b、 凝乳酪。無菌稱取25g樣品于無菌的250ml燒杯或其他適宜的容器內(nèi)，用滅

16、菌的玻璃或紙質(zhì)的漏斗（用帶卷好以便高壓滅菌）將樣液25ml慢慢注入滅菌的500ml的含225ml的乳糖肉湯的錐形瓶中或其他適宜的容器內(nèi)，使其覆蓋在乳糖肉湯的表面，也可多個25g檢測單位混合倒入含有相應(yīng)比例乳糖肉湯的容器內(nèi)，使樣品覆蓋在乳糖肉湯的表面，將樣品容器室溫靜置605min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35培養(yǎng)242h，按D1-11接著。c、 咸乳酪。無菌稱取25g樣品于無菌的帶螺旋帽的廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)，添加225ml無菌的乳糖肉湯同時混勻，多個25g樣品檢測單位能夠混合，旋緊瓶塞，室溫下靜置605min，然后搖勻，用PH試紙檢測PH，假如必要調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松

17、開約1/4圈，置于35培養(yǎng)242h。以下試驗接D,1-11進行。6、豆粉。按上述凝乳酪和咸乳酪的方法進行檢測，但多個25g樣品不能混合。7、含蛋制品(面條、蛋卷、空心粉、意大利面條)、干酪、面團、調(diào)制色拉(火腿、蛋、雞肉、金槍魚、火雞)、新奇的、冷凍的或干的水果和蔬菜、果仁和甲殼類動物(小蝦、蟹、小龍蝦、大蝦、大龍蝦)和魚。檢測前最好不要解凍，如檢測樣品必須解凍，需在45以下進行，置于能自動控溫的水浴鍋內(nèi)，不斷攪拌15分鐘或在2-5解凍18小時。無菌稱取25克樣品，放入無菌的均質(zhì)器內(nèi)。加入225ml無菌的乳糖肉湯均質(zhì)2分鐘。再無菌轉(zhuǎn)移均質(zhì)混合物于無菌的廣口的帶有旋螺帽的錐型瓶或其它合適的容器中

18、，蓋緊瓶蓋，室溫靜置605min。振蕩混勻，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。8、干酵母(活性和無活性酵母)無菌稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的胰酪胨大豆肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60min。搖勻，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。9、冷凍和高級混合食品無

19、菌稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的營養(yǎng)肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60min。搖勻，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。10、調(diào)料a、 黑胡椒、白胡椒、芹菜種子或芹菜葉片、干辣椒粉、紅辣椒、茴香、皺葉歐芹片、迷迭香、芝麻、百里香和蔬菜片。無菌稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的TSB肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60m

20、in。搖勻，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。b、 洋蔥片、洋蔥粉和大蒜片。無菌稱取25g樣品于滅菌的帶螺旋帽的廣口瓶或其它合適的容器內(nèi)，樣品的前增菌培養(yǎng)基用含K2SO4的TSB肉湯(1000mlTSB肉湯中加入5g K2SO4，最終濃度為0.5%)，將K2SO4加入TSB肉湯中，分裝每瓶225ml，121高壓滅菌15min，滅菌后，無菌測定其容量。假如必須，調(diào)整容量至225ml，將225ml含有K2SO4的TSB加入樣品中混勻，以下按C-10a進行。c、 多香果

21、粉、肉桂、丁香及薄荷調(diào)味料目前還沒有方法能夠中和這4種調(diào)料的毒性。將它們稀釋至無毒的程度后，再進行檢測。檢測多香果粉、肉桂和薄荷時，樣品與肉湯的比例為1:100，而丁香與肉湯的比例為1:1000；檢驗葉狀調(diào)味品時，由因此脫水產(chǎn)品，可汲取部分肉湯，在實際檢測中樣品與肉湯的比例大于1:10，檢測這些調(diào)味品時，按以上C-10a進行，保持推舉的樣品與肉湯的比例。11、密餞和糖衣(包括巧克力)無菌操作稱取25g樣品于滅菌的攪拌器內(nèi)，加入225ml重溶的脫脂奶粉，攪拌2分鐘，再無菌操作移取樣品液到滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，室溫下靜置605min。搖勻，用PH試紙測P

22、H值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。加入0.45ml1%亮綠水溶液，混勻，把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。12、椰子無菌操作稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，室溫下靜置605min。搖勻的攪拌器內(nèi)，加入225ml乳糖肉湯，攪拌2分鐘，再無菌操作移取樣品液到，用PH試紙測PH值，假如需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N HCl調(diào)PH值至6.80.2。加入2.25ml已蒸過的Tergitol-7溶液，混勻。也可用已蒸過的Triton-100。這些表面活性劑要使用最

23、少的量，剛好產(chǎn)生氣泡。Triton-100滴上2-3小滴即可。把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,1-11進行。13、食品染料和食品色素PH值6.0或以上的染料(10%的水懸浮液)，按上述干全蛋方法(以上C-1法)進行檢測。沉淀染料或PH值低于6.0的染料，無菌操作稱取25g樣品，放入滅菌的帶螺旋帽的500ml廣口瓶內(nèi)，加入225ml不含煌綠的TTB肉湯混勻，蓋緊瓶塞，室溫下靜止605min。用PH計調(diào)整PH值至6.80.2，加入2.25ml 1%的煌綠溶液，搖勻，把瓶蓋松開約1/4圈置于35培養(yǎng)242h。以下試驗按D,3-11進行。14、明膠無菌操作稱取25g樣品，放入滅

24、菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。加入225mL滅菌的乳糖肉湯和5mL5%明膠酶水溶液?；旌暇鶆?，蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。轉(zhuǎn)動混勻，用試紙測定pH值。必要時調(diào)節(jié)pH值至6.80.2。將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)，置35培養(yǎng)242小時。以下試驗按D,1-11進行。15、肉、肉代用品、肉副產(chǎn)品、動物產(chǎn)品、腺體制品和粗粉（魚，肉，骨）無菌操作稱取25g樣品放入滅菌的攪拌器中。加入225mL滅菌的乳糖肉湯，攪拌2分鐘。再無菌操作轉(zhuǎn)移已攪拌的混合物到滅菌的帶螺旋帽的500mL廣口瓶中或其他合適的容器內(nèi)。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。假如混合物為粉狀，研磨過或已粉碎的，則不用攪拌。不需要攪拌

25、的樣品，加入乳糖肉湯，并充分混勻；蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。旋動使充分混勻，用試紙測定pH值。必要時調(diào)節(jié)pH值至6.80.2?？傆嫾尤?.25mL已蒸過（15分鐘）的Tergitol-7，混勻。也可用已蒸過（15分鐘）的Triton-100來代替。操縱使用這些表面活性劑劑量，剛剛起泡沫即可。實際用量取決于試驗材料的成分；分析粉狀腺體制品，不需要用表面活性劑。將瓶蓋旋松1/4轉(zhuǎn)后，將樣品混合物置35培養(yǎng)242小時。以下試驗按D,1-11進行。16、田雞腿（此方法用于國內(nèi)的和國外的所有田雞腿檢驗）將15對田雞腿放入滅菌塑料袋內(nèi)，并用滅菌乳糖肉湯浸沒，其比例樣品比乳糖肉湯為1:9(見以上A，23

26、-24)。假如單個腿可能平均重在25g或以上，則只需檢查15對的每對中的一條腿。把袋放入大塑料燒杯內(nèi)或其它合適的容器中，在機械蕩器上震蕩15min，以4cm（1-1/2in）機械振蕩100次/分鐘。從袋中傾倒出乳糖肉湯于另一個滅菌塑料袋內(nèi)。加更多的乳糖肉湯，使總量為3500mL。充分混勻，于室溫下靜置60分鐘。必要時調(diào)節(jié)pH值至6.80.2。再把裝有乳糖肉湯的塑料袋放入塑料燒杯或其它合適的容器內(nèi)，于35培養(yǎng)242小時。接下去按下面的D，1-11進行。17、野兔骨架（此方法用于國內(nèi)的和國外的所有的野兔骨架）取3只野兔骨架放入滅菌塑料袋內(nèi)，并用滅菌乳糖肉湯浸沒，其比例：樣品比乳糖肉湯為1:9(見上

27、述A，23-24)，把袋放入大塑料燒杯內(nèi)或其它合適的容器中，在機械震蕩器上以4cm（1-1/2in）幅度振蕩100次/分鐘，震蕩15min。從袋中傾倒出乳糖肉湯混合物于另一個滅菌塑料袋內(nèi)，加更多的乳糖肉湯，使總量為3500mL。充分混勻，于室溫靜置60分鐘。必要時用pH試紙調(diào)置6.80.2，于35培養(yǎng)242小時。接下去按下面D，1-11進行。18、口香糖無菌操作稱取25g樣品到滅菌燒杯（250mL）或其他合適容器中。制備過濾除菌的1.0%纖維素酶溶液（加1g纖維素酶到99mL無菌水中），用0.45um膜過濾除菌，置于150mL瓶中。（纖維素酶溶液在2-5可保存最長2周時刻）。加入225mL無菌

28、乳糖肉湯和2.25mL無菌1%纖維素酶溶液于500mL無菌帶螺旋蓋的廣口瓶或其他合適容器。用磁力攪拌器劇烈攪拌酶/肉湯混合物時，通過無菌玻璃漏斗迅速倒入25g待檢樣品。旋好瓶蓋，室溫下靜置60分鐘，無須調(diào)pH值。旋松瓶蓋，35培養(yǎng)242小時。以下按D，1-11進行。19、桔子汁、蘋果汁(經(jīng)巴氏消毒或未經(jīng)巴氏消毒)和果酒(經(jīng)巴氏消毒)無菌稱取25ml樣品加入到含有225mlUPB肉湯中，放入滅菌的帶螺旋帽的500ml廣口瓶內(nèi)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，充分搖勻，室溫下靜止605min。不用調(diào)PH值，旋松瓶蓋，35培養(yǎng)242小時。以下按D，1-11進行(按低含量微生物進行處理)。20、豬耳和狗顎

29、類從每個樣品中挑出一片(尺寸小的可挑2-3片)置于無菌的塑料袋中，將塑料袋置于大燒杯中或其它合適的容器內(nèi)，按1:9的比例(g/L) (見以上A，23-24)加入無菌的乳糖肉湯，浸沒樣品。蓋緊瓶蓋在室溫下靜置60分鐘。旋動使充分混勻，用試紙測定pH值。必要時調(diào)節(jié)pH值至6.80.2。加入0-1%已蒸過（15分鐘）的Tergitol-7或已蒸過（15分鐘）的Triton-100來代替。操縱使用這些表面活性劑劑量，剛剛起泡沫即可。例如，225ml乳糖肉湯加入最大體積為2.25ml。將樣品混合物置35培養(yǎng)242小時。接下來的試驗按D,1-11進行。D、沙門氏菌的分離培養(yǎng)1、 擰緊瓶蓋并輕輕振蕩培養(yǎng)過的

30、樣品混合物?？谙闾牵何?ml樣品液到10ml的SC肉湯中，另取1ml樣品液到10ml TTB肉湯中，混勻。所有其它食品：吸取0.1ml樣品液到10ml的RV培養(yǎng)基中，另取0.1ml樣品液到10mlTTB肉湯中，混勻。2、 選擇性增菌按如下步驟進行：含菌量高的食品：RV培養(yǎng)基在420.2（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時。TTB肉湯在430.2（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時。含菌量低的食品(口香糖除外)：RV培養(yǎng)基在420.2（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時。TTB肉湯在352（水浴、循環(huán)的、溫度可調(diào)）中培養(yǎng)242小時?？谙闾牵篠C和TTB肉湯在35培養(yǎng)242小時

31、。3、 混合均勻（假如是試管，渦旋式混合），用3mm直徑的接種環(huán)，滿環(huán)（10l）劃線接種TTB肉湯于亞硫酸鉍（BS）瓊脂，XLD瓊脂和HE瓊脂平板上。BS瓊脂平板于劃線接種的前一天制備好儲存在室溫暗處。4、 再用3mm直徑的接種環(huán)，從RV培養(yǎng)基（樣品為含菌量高的食品和菌量高的食品）和SC肉湯（樣品為口香糖）取滿環(huán)（10l），劃線接種于上述平板上。5、 參考官方檢測方法994.04，關(guān)于冷藏食品的前增菌和低水份食品的選擇性增菌(僅SC和TTB肉湯)方法。如此樣品的檢測最遲可從星期四開始，周末不用加班工作。6、 把選擇性平板置35培養(yǎng)242小時。7、 檢查平板中可疑沙門氏菌菌落的存在。FDA沙門氏

32、菌檢驗標準中文版（二）典型的沙門氏菌菌落形態(tài)：從每個通過242小時培養(yǎng)后選擇性平板上挑取2個或更多個菌落。典型的沙門氏菌菌落如下：a、 在HEKTOEN氏腸道菌（HE）瓊脂上。菌落呈蘭綠至蘭色，帶或不帶黑色中心。許多沙門氏菌培養(yǎng)物可呈現(xiàn)大的光澤黑色中心或幾乎全部黑色的菌落。b、 在木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上. 粉色菌落，帶或不帶黑色中心。許多沙門氏菌培養(yǎng)物可有大的光澤黑色中心或呈幾乎全部黑色的菌落。c、 亞硫酸鉍（BS）瓊脂上。呈褐色，灰色或黑色，有時帶有金屬光澤。菌落周圍的培養(yǎng)基通常開始呈褐色，但伴隨培養(yǎng)時刻的延長而變?yōu)楹谏⒂兴^的暈環(huán)效應(yīng)。假如典型菌落出現(xiàn)在經(jīng)242小時培養(yǎng)后

33、的BS瓊脂上，則挑取2個或更多個典型菌落。不論BS瓊脂平板在培養(yǎng)242小時時是否挑取過菌落，BS平板再培養(yǎng)242小時。培養(yǎng)了482小時后，假如BS平板上出現(xiàn)典型菌，則挑取2個或更多個菌落，假如只在通過242小時培養(yǎng)的BS平板上挑取了菌落，接種到三糖鐵瓊脂（TSI）和賴氨酸瓊脂（LIA）上，會呈現(xiàn)非典型反應(yīng)以至視為培養(yǎng)物中不存在沙門氏菌 。參見下面D.8部分和D.9部分，有關(guān)TSI和LIA反應(yīng)的詳細描述。非典型的沙門氏菌菌落形態(tài):不存在典型的或可疑的沙門氏菌菌落時，按如下步驟檢驗非典型的沙門氏菌菌落。a. HE和XLD瓊脂. 非典型的沙門氏菌在HE和XLD瓊脂上呈黃色菌落，帶或不帶黑色中心。HE

34、和XLD平板經(jīng)242小時培養(yǎng)后，沒有典型的沙門氏菌菌落，則挑取2個或更多個非典型的沙門氏菌菌落。b. BS瓊脂.某些非典型菌株產(chǎn)生綠色菌落，其周圍培養(yǎng)基略微或不呈暗色。假如BS平板培養(yǎng)242小時后，沒有出現(xiàn)典型菌落，則不挑取任何菌落，讓平板接著培養(yǎng)242小時。假如經(jīng)482小時培養(yǎng)后，仍沒有典型或可疑的菌落出現(xiàn)，則挑取2個或更多個非典型的菌落。參考的對比培養(yǎng)物除了陽性對比外（典型沙門氏菌），3個附加的沙門氏菌培養(yǎng)物也可用來輔助非典型沙門氏菌在選擇性平板上的獲得，這些對比是乳糖陽性，H2S陽性的沙門氏菌（ATCC12325）和乳糖陰性，H2S陰性的沙門氏菌（ATCC9842），或者乳糖陽性，H2S

35、陰性的沙門氏菌（ATCC29934），這些菌種可從ATCC購買到。8、 用滅菌接種針輕輕地接觸每個菌落中心部位，接種TSI斜面，先在斜面上劃線，再于底層穿刺。不需灼燒接種針，即可接種LIA斜面，先穿刺接種底層兩次，再劃線斜面上。由于賴氨酸脫羧反應(yīng)需嚴格厭氧條件，因而LIA斜面必須有深的底層（4cm）。將已挑過菌落的選擇性平板于5-8儲存。9、 將TSI和LIA瓊脂斜面于35分不培養(yǎng)242小時。當(dāng)進行斜面培養(yǎng)時放松試管帽以保持需氧條件，以防止過量的H2S產(chǎn)生。在TSI瓊脂中，典型的沙門氏菌培養(yǎng)物使斜面呈堿性（紅色），底層呈酸性（黃色），產(chǎn)生或不產(chǎn)生H2S（瓊脂變黑色）。在LIA瓊脂中，典型的沙門

36、氏菌培養(yǎng)物其試管底層呈堿性（紫色）反應(yīng)。只有試管底層呈明顯黃色時才認為有酸性（陰性）反應(yīng)。不要單純依照其試管底層產(chǎn)生的褪色反應(yīng)就排除它。在LIA中，大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物皆產(chǎn)生H2S；一些非沙門氏菌培養(yǎng)物產(chǎn)生磚紅色反應(yīng)。10、 在LIA瓊脂上所有底層呈堿性反應(yīng)的培養(yǎng)物，不管其在TSI瓊脂上反應(yīng)如何，皆應(yīng)全部保留為可疑的沙門氏菌分離物，并進一步做生化和血清學(xué)試驗。在LIA中呈酸性底層反應(yīng)和在TSI中呈斜面堿性，底層酸性的培養(yǎng)物，均視為可疑的沙門氏菌分離物，應(yīng)進一步做生化和血清學(xué)試驗。在LIA中呈酸性底層和在TSI中呈酸性斜面和酸性底層的培養(yǎng)物，可視為非沙門氏菌培養(yǎng)物而棄去。對所保留的擬定陽性TIS

37、瓊脂培養(yǎng)物，可按下面四，11節(jié)敘述的進行檢測，是否為沙門氏菌，包括亞利桑那沙門氏菌。假如TSI中培養(yǎng)物沒有呈現(xiàn)沙門氏菌的典型反應(yīng)（斜面堿性，底層酸性），再從未擬定陽性的選擇性平板上另外挑取可疑菌落，象上面四，8節(jié)所述的接種TSI和LIA斜面。11、 生化和血清學(xué)鑒定試驗：a. 從RV培養(yǎng)基（或口香糖中亞硒酸鹽胱氨酸肉湯）劃線分離的選擇性瓊脂平板上所挑取的3個擬定陽性TSI瓊脂培養(yǎng)物和從四硫磺酸鹽肉湯劃線分離的選擇性平板所挑取的3個擬定陽性TSI瓊脂培養(yǎng)物，進行生化和血清學(xué)鑒定試驗。b. 如從一組選擇性瓊脂平板未分離出3個擬定陽性的TSI瓊脂培養(yǎng)物，則對其它已分離到的擬定陽性的TSI瓊脂培養(yǎng)物進

38、行生化和血清學(xué)鑒定試驗。對所分析的每個25g樣品，至少應(yīng)檢查6個TSI培養(yǎng)物。E、沙門氏菌的鑒定：1、 混雜培養(yǎng)物. 對呈混雜菌的TSI瓊脂培養(yǎng)物，皆應(yīng)劃線接種于麥康凱（MC）瓊脂，HE瓊脂，或木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上，于35培養(yǎng)242小時。檢查平板上可疑沙門氏菌存在與否。a. 在麥康凱（MC）瓊脂上：典型菌落呈透明、無色，有時帶有暗色中心。沙門氏菌菌落有時可使培養(yǎng)基中其它細菌所造成的膽鹽沉淀區(qū)透明。b. 在HE瓊脂上：見上述四，7ac. 在木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂上：見上述四，7b. 按上面的四，7節(jié)所述轉(zhuǎn)種至少2個可疑沙門氏菌菌落到TSI瓊脂和LIA瓊脂斜面上，接下去

39、按上述的四，9節(jié)進行鑒定.2、 純培養(yǎng)物：a、 尿素酶試驗（常規(guī)）。由每個擬定陽性TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物，用滅菌針分不接種生長物到每個尿素肉湯試管中。間或也會有未接種的尿素肉湯管變紫紅色（試驗陽性），因而應(yīng)包括未接種該肉湯管作為對比，于35培養(yǎng)242小時。b、 可選的尿素酶試驗（快速法）。用3mm直徑接種環(huán)，自每一擬定陽性的TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物中取2環(huán)轉(zhuǎn)種到快速尿素肉湯管中，370.5水浴中培養(yǎng)2小時。棄去所有呈陽性結(jié)果的培養(yǎng)物，保留所有陰性反應(yīng)的（培養(yǎng)基不變色）培養(yǎng)物，為進一步研究試驗用。3、 血清學(xué)多價鞭毛（H）試驗：a、 現(xiàn)在或以后進行多價鞭毛（H）試驗，可按下面五，4節(jié)所述進行。從每個尿

40、素酶陰性的TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物接種到以下任一項， 1）腦心浸液肉湯，于35培養(yǎng)46小時，直到可見的生長物出現(xiàn)（供當(dāng)日試驗用），或2）胰胳胨大豆肉湯，于35培養(yǎng)242小時（供次日試驗用）。在各5mL肉湯培養(yǎng)物中加2.5mL甲醛生理鹽水溶液。b、 選兩個以甲醛處理的肉湯培養(yǎng)物同沙門氏菌多價鞭毛（H）抗血清試驗。在1075mm或13100mm血清學(xué)試管內(nèi)，加入0.5mL經(jīng)合適稀釋的沙門氏菌多價鞭毛（H）抗血清，再加入0.5mL待測抗原進行試驗。并以0.5mL甲醛生理鹽水溶液同0.5mL甲醛處理的抗原混合好，制成鹽水對比，將各混合物于48-50水浴培養(yǎng)，每隔15分鐘觀看一次初步結(jié)果，并于1小時讀數(shù)最終

41、結(jié)果。陽性反應(yīng)：在甲醛肉湯培養(yǎng)物與血清混合物中凝集，而在甲醛肉湯培養(yǎng)物與甲醛鹽水管中（對比管）不凝集。陰性反應(yīng)：在甲醛肉湯培養(yǎng)物與血清混合物中（試驗混合物）不凝集，在對比管中也不凝集。非特異反應(yīng)：在試驗混合物與對比管中皆出現(xiàn)凝集。對出現(xiàn)這類結(jié)果的培養(yǎng)物，需用“SpicerEdwards”氏抗血清做進一步試驗。4、 Spicer-Edwards血清試驗用那個實驗可代替多價H血清試驗，也可用來關(guān)于多價H血清反應(yīng)不明顯的培養(yǎng)物的進一步的實驗。如E、3b所述，進行Spicer-Edwards抗原實驗，當(dāng)結(jié)果是H血清陽性時，需按E、5a-c進行生化實驗；假如兩個通過甲醛處理的培養(yǎng)物是陰性的，按E、3a得

42、到的四個額外的培養(yǎng)物進行血清學(xué)實驗，假如可能，獲得兩個陽性培養(yǎng)物，按E、3a進行附加的生化實驗，假如所有的來自于樣品的尿素酶陰性反應(yīng)的TSI培養(yǎng)物的H血清實驗是陰性的，按E、5a-c進行附加的生化實驗。5、 尿素酶陰性培養(yǎng)物試驗. a、 賴氨酸脫羧酶肉湯。假如所做的LIA試驗是中意的，則不需重復(fù)試驗。假如培養(yǎng)物呈現(xiàn)可疑的LIA反應(yīng)，則以賴氨酸脫羧酶肉湯進行賴氨酸脫羧酶的最終鑒定。將少量可疑沙門氏菌陽性TSI瓊脂斜面培養(yǎng)物接種至賴氨酸脫羧酶肉湯管。將試管帽旋緊，置于35培養(yǎng)482小時，至少每隔24小時檢查一次。沙門氏菌因堿性反應(yīng)，則使整個培養(yǎng)基呈紫色。陰性反應(yīng)則使整個培養(yǎng)基呈黃色。假如培養(yǎng)基出現(xiàn)

43、褪色現(xiàn)象（即不呈紫色也不呈黃色），可加入幾滴0.2%溴甲酚紫溶液，然后再觀看試管的反應(yīng)。b、 酚紅衛(wèi)茅醇肉湯或含有0.5%衛(wèi)茅醇的紫色肉湯基礎(chǔ)液。由TSI瓊脂上取少量培養(yǎng)物接種至肉湯管中。將試管帽放松。置于35培養(yǎng)482小時，但24h后觀看反應(yīng)。大多數(shù)沙門氏菌呈陽性實驗結(jié)果，表現(xiàn)為內(nèi)部發(fā)酵管中產(chǎn)氣和培養(yǎng)基變酸（黃色）。產(chǎn)酸為陽性反應(yīng)。陰性反應(yīng)為倒管內(nèi)無氣體產(chǎn)生。整個培養(yǎng)基呈紅色（有酚紅指示劑）或紫色（有溴甲酚紫指示劑）。c、 胰蛋白胨（或色氨酸）肉湯。將少量TSI瓊脂培養(yǎng)物接種到肉湯管中，置35培養(yǎng)242小時，并按以下進行試驗。1) 氰化鉀（KCN）肉湯。從24h色氨酸培養(yǎng)物移取3mm接種環(huán)一

44、環(huán)轉(zhuǎn)種到KCN肉湯管中。將管口加熱，以便加塞時蠟封良好。35培養(yǎng)482小時，但24h后觀看反應(yīng)。有生長者（有渾濁）為陽性。大多數(shù)沙門氏菌在此培養(yǎng)基中不能生長，即無渾濁現(xiàn)象。2) 丙二酸鹽肉湯。用3mm接種環(huán)移取24h色氨酸肉湯培養(yǎng)物，轉(zhuǎn)種到丙二酸鹽肉湯管中。因間或會出現(xiàn)未接種的丙二酸鹽肉湯在存放期間變蘭（陽性反應(yīng)），因此應(yīng)有未接種的丙二酸鹽肉湯管作對比。35培養(yǎng)482小時，但在培養(yǎng)24h后觀看反應(yīng)。大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物在此肉湯中為陰性反應(yīng)（綠色或不變色）。3) 吲哚試驗。轉(zhuǎn)種5mL24h色氨酸肉湯培養(yǎng)物到空試管中，加入0.2-0.3mLKovacs氏試劑，大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物為陰性反應(yīng)（在肉湯

45、表面無深紅色）。并記錄呈桔色和粉色變化的中間型為反應(yīng)。4) 沙門氏菌血清學(xué)鞭毛（H）試驗。假如未做多價鞭毛（H）試驗或Spicer-Edwards氏鞭毛（H）試驗，可任選其一。5) 吲哚試驗陽性和血清學(xué)鞭毛（H）試驗陰性；或者KCN試驗陽性和賴氨酸脫羧酶試驗陰性的非沙門氏菌任一培養(yǎng)物予以去除。6、 沙門氏菌血清學(xué)菌體（O）試驗。（用已知沙門氏菌培養(yǎng)物同所有抗血清做予試驗）。a、 多價菌體（O）試驗：用蠟筆在每個玻璃或塑料平板（15100mm）內(nèi)側(cè)劃出2個約12cm的區(qū)域?？墒褂蒙唐坊姆謪^(qū)載玻片，用2mL0.85%生理鹽水乳化從24-48hTSI斜面或者更好是胰胨血瓊脂基礎(chǔ)（無血），用3mm接

46、種環(huán)移取培養(yǎng)物。加1滴菌懸液于用蠟筆標出的每一矩形區(qū)域的上部。這一區(qū)域的下部加1滴生理鹽水。在另一區(qū)域加1滴沙門氏菌多價菌體（O）抗血清。再以潔凈滅菌的接種環(huán)或針將一個區(qū)域內(nèi)的菌懸液和生理鹽水混合。在另一區(qū)域內(nèi)菌懸液和抗血清液混合。將混合液前后傾斜移動1min，并在良好照明下對著黑暗背景觀看，任何程度的凝集都視為陽性反應(yīng)。多價菌體（O）試驗結(jié)果分類如下：陽性反應(yīng)：混合物試驗?zāi)?，而在鹽水對比中不凝集。陰性反應(yīng)：混合物試驗不凝集，在鹽水對比中也不凝集。非特異性反應(yīng)：混合物試驗和鹽水對比中皆凝集，需按Edwards和Ewing氏的腸桿菌科鑒定中所描述的進一步作生化學(xué)和血清學(xué)試驗。b、 菌體(O)群

47、試驗. 如有各群菌體（O）抗血清，包括Vi，代替沙門氏菌多價菌體（O）抗血清，按上述五，5a試驗。對Vi凝集反應(yīng)陽性的可參照官方分析分析方法的967.28B部分專門處理這些培養(yǎng)物。與菌體（O）群抗血清呈陽性凝集的培養(yǎng)物，作該菌體（O）群陽性記錄；不能與菌體（O）群抗血清發(fā)生反應(yīng)者，做該菌體（O）群試驗陰性記錄。7、補充生化試驗. 按表1中1-11項試驗，對培養(yǎng)物呈典型沙門氏菌反應(yīng)者，進行沙門氏菌分類。如在25g分析樣品中有一個TSI培養(yǎng)物被劃為沙門氏菌，則該25g分析樣品的其他TSI培養(yǎng)物就無需進一步試驗。沙門氏菌鞭毛（H）試驗陽性表明有沙門氏菌抗原，但不具有沙門氏菌生化特性者，應(yīng)對培養(yǎng)物作純

48、分離（按上述五、1），按上述五、2開始重新做試驗。對表1中1-11項目，不呈典型沙門氏菌反應(yīng)的培養(yǎng)物做以下補充試驗以最終推斷為非沙門氏菌。a、 酚紅乳糖肉湯或紫色乳糖肉湯。1) 從每個尚未分類的24-48hTSI瓊脂斜面上挑取少許培養(yǎng)物，接種到肉湯管中，35培養(yǎng)482h。并在24h后開始觀看變化。陽性反應(yīng)：產(chǎn)酸（黃色）和在倒立發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)氣。只要產(chǎn)酸就視為陽性反應(yīng)。大多數(shù)沙門氏菌為陰性結(jié)果。即在倒立發(fā)酵管內(nèi)沒有氣體形成，和整個培養(yǎng)基呈紅色（含酚紅指示劑）或紫色（含溴甲酚紫指示劑）。2) 除培養(yǎng)物在TSI瓊脂斜面上產(chǎn)酸和在LIA中呈陽性反應(yīng)，或丙二酸鹽肉湯試驗呈陽性的培養(yǎng)物外，棄去乳糖試驗陽性的非

49、沙門氏菌培養(yǎng)物。為了證明他們是否為亞利桑那菌，需對這些培養(yǎng)物作進一步試驗。b.酚紅蔗糖肉湯或紫色蔗糖肉湯。按上述五,7a-1所敘述的程序進行，除那些培養(yǎng)物在TSI瓊脂斜面上產(chǎn)酸和在LIA中呈陽性反應(yīng)者外，呈蔗糖試驗陽性結(jié)果者皆作為非沙門氏菌棄去。c. MR-VP肉湯.對每個未分類的TSI瓊脂斜面上可疑沙門氏菌培養(yǎng)物，挑取少許，接種到此肉湯管中，置于35培養(yǎng)482h。1) 在室溫下按下述進行Voges-Proskauer氏(VP)試驗：移取1mL48h培養(yǎng)物于試管中，并將剩余的MR-VP肉湯于35再培養(yǎng)48h。加入0.6mL-萘酚溶液于試管中并振搖；加40%KOH溶液0.2mL，并振搖。為了加快

50、反應(yīng)速度，加少許肌酸結(jié)晶。4h后觀看結(jié)果：陽性反應(yīng)為整個培養(yǎng)基由粉紅色轉(zhuǎn)變至紅寶石色。絕大多數(shù)沙門氏菌VP試驗陰性，即整個肉湯不呈粉紅至紅色變化。2) 甲基紅試驗：吸取經(jīng)96h培養(yǎng)的MR-VP肉湯5mL于試管中，加入5-6滴甲基紅指示劑，立即觀看結(jié)果。絕大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物呈陽性結(jié)果，即培養(yǎng)基呈彌散性紅色。明顯的黃色為陰性結(jié)果。對KCN陽性，V-P試驗陽性及甲基紅試驗為陰性培養(yǎng)物，皆可作為非沙門氏菌棄去。d. Simmons氏枸櫞酸鹽瓊脂. 從未分類的TSI瓊脂斜面上，用接種針沾取培養(yǎng)物，劃線接種于枸櫞酸鹽瓊脂斜面上，并穿刺底層。置于35培養(yǎng)962h，按下述方法讀取結(jié)果。陽性反應(yīng)：能生長，通常

51、伴隨顏色由綠色變蘭色。大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物為枸櫞酸鹽陽性。陰性反應(yīng)：不生長或微弱生長，而且不變色。8、培養(yǎng)物的分類：沙門氏菌培養(yǎng)物應(yīng)具有表1反應(yīng)模式。凡培養(yǎng)物具有表2所列任何一小項結(jié)果，為非沙門氏菌則棄去。對任何培養(yǎng)物，當(dāng)不能按表1的分類表，明確地鑒定為非沙門氏菌屬，或也不能依照表2所列試驗反應(yīng)從沙門氏菌屬中排除者，可按Edwards和Ewings氏的“腸桿菌科鑒定”所述的補充試驗進一步分類。如2個TSI培養(yǎng)物皆不能按生化試驗證實分離物為沙門氏菌時，則對同一個25g檢驗樣品中保留的尿素酶陰性TSI培養(yǎng)物，按五，5開始進行生化學(xué)試驗。FDA沙門氏菌檢驗標準中文版（三）表1.沙門氏菌的生化和血清學(xué)

52、反應(yīng) 反應(yīng)和底物 結(jié)果 沙門氏菌的反應(yīng)(a) 陽性 陰性 1.葡萄糖(TSI) 黃色底部 紅色底部 + 2.賴氨酸脫酸酶(LIA) 紫色底部 黃色底部 + 3.H2S(TSI和LIA) 黑色 無黑色 + 4.尿素酶 紫紅色 無顏色變化 - 5.賴氨酸脫酸酶肉湯 紫色 黃色 + 6.苯酚紅衛(wèi)茅醇肉湯 黃色(產(chǎn)或不產(chǎn)氣) 不產(chǎn)氣或無顏色變化 +(b) 7.KCN肉湯 生長 不生長 - 8.丙二酸鈉肉湯 藍色 無顏色變化 -(c) 9.吲哚試驗 溶液表面為紫色 溶液表面為黃色 - 10.多價鞭毛試驗 凝集 不凝集 + 11.多價菌體試驗 凝集 不凝集 + 12.苯酚紅乳糖肉湯 黃色(產(chǎn)或不產(chǎn)氣) 不

53、產(chǎn)氣；無顏色變化 -(c) 13.苯酚紅蔗糖肉湯 黃色(產(chǎn)或不產(chǎn)氣) 不產(chǎn)氣；無顏色變化 - 14.V-P試驗 粉色至紅色 無顏色變化 - 15.甲基紅試驗 紅色 黃色 + 16.西蒙氏枸櫞酸鹽 生長，藍色 不生長，無顏色變化 v a+， 90%陽性(1-2天內(nèi))；- ，90%陰性(1-2天內(nèi))；V，不穩(wěn)定b大部分亞利桑那沙門氏菌陰性c大部分亞利桑那沙門氏菌陽性 表2.分離非沙門氏菌的關(guān)鍵特征 反應(yīng)和底物 結(jié)果 1、尿素酶2、吲哚多價H血清實驗 陽性（粉-紅色）陽性（粉-紅色）陰性（不凝集） 吲哚Spicer-Edwards血清試驗 陽性（粉-紅色）陰性（不凝集） 3賴氨酸脫羧酶KCN肉湯 陰

54、性（黃色）陽性（生長） 4、苯酚紅乳糖肉湯 陽性（黃色、有或沒有氣體）（a） 5、苯酚紅蔗糖肉湯 陽性（黃色、有或沒有氣體）（a）（b） 6、KCN肉湯V-P實驗中性紅實驗 陽性（生長）陽性（粉-紅色）陰性（明顯的黃色） a 丙二酸鈉陽性的培養(yǎng)物需進行進一步的實驗確定是否是S.arzonae；b 假如在LIA上有典型的沙門氏特征的培養(yǎng)物不要棄去，需進行進一步的實驗，確定是否是沙門氏菌。 9. 沙門氏菌屬的擬定性鑒定。使用5種商品化的生物化學(xué)試劑盒（API 20E, Enterotube II, Enterobacter aceae II, MICRO-ID,或Vitek GNI）中任一種，代替

55、常規(guī)的生化管系統(tǒng)，鑒定擬定食源性沙門氏菌屬。按本節(jié)鑒定所述，檢驗人員依照自己試驗室選擇商品試劑盒與生化管系統(tǒng)相適應(yīng)的一種商品試劑盒。生化學(xué)商品試劑盒不能用來代替血清學(xué)試驗（1）。組裝試劑盒，配制試劑盒所需試劑。參照官方分析方法的978.24部分（API-20E, Enterotube II和Enterobacterlaceae II）,989.12部分（MICRO-ID）,和991.13部分（Vitek GNI）,接種于每個組合，并按規(guī)定的時刻與溫度進行培養(yǎng)。加試劑，觀看與記錄結(jié)果。參照上述Ref.1把培養(yǎng)物擬定為沙門氏菌或非沙門氏菌屬。為證實擬定為沙門氏菌的培養(yǎng)物，尚需進行沙門氏菌菌體（O）

56、血清學(xué)試驗，按上述五，5；和沙門氏菌鞭毛（H）血清試驗，按上述五，3；或進行Spicer-Edwards氏鞭毛（H）試驗。并按下列原則對培養(yǎng)物進行分類：a. 用商品化試劑盒擬定為沙門氏菌的培養(yǎng)物，若沙門氏菌菌體（O）血清學(xué)試驗陽性與沙門氏菌鞭毛（H）血清學(xué)試驗陽性的則報告為沙門氏菌。b. 用商品化試劑盒確定為非沙門氏菌的培養(yǎng)物，參照AOAC標準（1）確定亦為非沙門氏菌，應(yīng)作非沙門氏菌予以排除。c. 凡不符合a或b的培養(yǎng)物，應(yīng)按上述五,2-7項中有關(guān)規(guī)定作進一步試驗，或按Ewing(2)氏的有關(guān)項目進一步試驗，或送至標準定型實驗室，做最后的血清定型與鑒定。10. 鞭毛（H）試驗陰性培養(yǎng)物的處理：

57、對一些生化反應(yīng)典型，被認為是沙門氏菌，但鞭毛（H）試驗陰性的培養(yǎng)物，可能是無動力的菌株，或鞭毛抗原發(fā)育不充分，對此培養(yǎng)物的動力測定方法如下：從TSI斜面上挑取少量的培養(yǎng)物，接種于動力試驗培養(yǎng)基平板中，在距平板邊緣10mm處一次穿刺2-3mm深，不要刺到平板底或接種到其他任何部位。置于35培養(yǎng)24h。假如細菌游散生長至40mm或更遠，按下述方法再試驗：在游散生長最遠處，用3mm接種環(huán)轉(zhuǎn)種一環(huán)培養(yǎng)物至胰酪胨大豆蛋白胨肉湯中。重復(fù)沙門氏菌多價鞭毛（H）（按上述五，3）或作Spicer-Edwards氏鞭毛（H）血清學(xué)試驗。假如培養(yǎng)物經(jīng)第一個24h培養(yǎng)后無動力，于35培養(yǎng)24h；假如仍無動力，則置25

58、再培養(yǎng)5天。假如上述試驗仍為陰性，把該培養(yǎng)物定為無動力菌株。假如鞭毛（H）陰性培養(yǎng)物，按生化學(xué)反應(yīng)可疑為沙門氏菌，應(yīng)將培養(yǎng)物呈送微生物學(xué)實驗室作進一步的鑒定和/或血清學(xué)分型。11.血清學(xué)定型培養(yǎng)物遞送。除非另有講明，每個檢驗樣品要遞送1個分離物。培養(yǎng)物要放在腦心浸液瓊脂斜面的試管(13X100mm或16X125mm)內(nèi)遞送。試管的螺旋帽應(yīng)擰緊以確保安全。試管標貼上樣品編號，分析編號和密碼。提交的每一個樣品應(yīng)有以下記錄：1)收集報告 FD-464或進口報告FD-784；2)檢測者的工作記錄 FD-431；3)沙門氏菌的記錄 FD-431g。放置培養(yǎng)物于培養(yǎng)容器內(nèi)并加蓋FDA印章封口，此培養(yǎng)物的記

59、錄(以上E-11)放在搬運箱內(nèi)，但不要放在加蓋FDA印章的容器內(nèi)。提交關(guān)于樣品編號的申請或信函，以便早日出結(jié)果，按病原微生物的運輸規(guī)定進行運輸。依據(jù)聯(lián)邦登記以最快的方式進行運輸。關(guān)于提交的樣品需保留一份拷貝。沙門氏菌沙門氏菌（Salmonella）沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)覺的近一千種(或菌株)。按其抗原成分，可分為甲、乙、丙、丁、戊等差不多菌組。其中與人體疾病有關(guān)的要緊有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引起人類的疾病外，大多數(shù)僅能目引起家畜、鼠類

60、和禽類等動物的疾病，但有時也可污染人類的食物而引起食物中毒。沙門氏菌差不多介紹沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門氏菌屬腸道細菌科，包括那些引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細菌。它們除可感染人外，還可感染專門多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾，它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動物的生殖生產(chǎn)力。蛋、家禽和肉類產(chǎn)品是沙門氏菌病的要緊傳播媒介，感染要緊取決于沙門氏菌的血清型和食用者的軀體狀況，受威脅最大的是小孩、老年人及免疫缺陷個體。依照國際慣例，要求對易受沙門氏菌污染的食品進行分類治理，以使