革蘭氏染色的過程課件

1、 細(xì)菌的革蘭氏染色第1頁，共15頁。目 的 要 求學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色法。了解革蘭氏染色原理。鞏固顯微鏡的使用方法及無菌操作技術(shù)。第2頁，共15頁。實(shí) 驗 材 料菌種參考菌：金黃色葡萄球菌(G+), 大腸桿菌 (G-)儀器 顯微鏡材料 載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、染色缸等染料 草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番紅染色液第3頁，共15頁。A. 加小滴水 B. 涂成薄層 C. 固定菌體 涂片制備過程革蘭氏染色的過程制片第4頁，共15頁。制片初染媒染脫色復(fù)染鏡檢主要操作步驟第5頁，共15頁。細(xì)水沖洗結(jié)晶紫初染1-2min碘液媒染1min95%酒精脫色 20s-30s蕃

2、紅復(fù)染 2-3min細(xì)水沖洗細(xì)水沖洗第6頁，共15頁。染色示范第7頁，共15頁。第8頁，共15頁。革蘭氏染色的基本原理 根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁的組分和結(jié)構(gòu)不同，通過革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為兩大類G+和G- 革蘭氏染色是丹麥醫(yī)生 C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法第9頁，共15頁。細(xì)胞壁革蘭氏陽性菌 (G+)革蘭氏陰性菌 (G-)厚度與強(qiáng)度厚、致密、堅韌薄、疏松肽聚糖數(shù)量、含量多層、含量高、占細(xì)胞干重4090%單層、含量低、占細(xì)胞干重510%脂類含量少、占細(xì)胞干重1-4%多、占細(xì)胞干重11-22%磷壁酸（垣酸）+-脂多糖、磷脂、脂蛋白-+肽聚糖脂蛋白磷壁酸外膜第

3、10頁，共15頁。革蘭氏染色原理.mp4第11頁，共15頁。革蘭氏染色成敗關(guān)鍵：酒精脫色，脫色不夠?qū)-轉(zhuǎn)變?yōu)镚+，脫色過度將G+變成G-； 涂片要均勻、?。?菌齡影響染色，菌齡老、陳舊的細(xì)菌培養(yǎng)物，往往G+轉(zhuǎn)變成G-，一般做革蘭氏染色用18小時左右的細(xì)菌培養(yǎng)物，不要超過24小時，以免影響染色性。革蘭氏染色.mp4第12頁，共15頁。 革蘭氏染色注意載玻片要潔凈，滴無菌水和取菌不宜過多，涂片要均勻，不宜過厚；熱固定溫度不宜過高，否則會改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài)；水洗時不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下，水流不宜過急，過大，以免涂片薄層脫落。革蘭氏染色結(jié)果是否正確，乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性菌被誤染成陽性菌，脫色過度，陽性菌被誤染為陰性菌。注意事項第13頁，共15頁。實(shí)驗報告1繪圖說明染色結(jié)果。 第14頁，共15頁。實(shí)驗報告2思考題：你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？你的染色結(jié)果是否正確？如果不正確