采樣技術(shù)課件

1、重大疫病采樣技術(shù)目的與意義在重大動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與檢測(cè)時(shí)，采樣方法、采樣數(shù)量和樣品質(zhì)量直接決定檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和結(jié)論的科學(xué)性。Company Logo采樣的一般原則凡發(fā)現(xiàn)患畜(包括馬、牛、羊及豬等)有急性死亡時(shí)，如懷疑是炭疽，則不可隨意解剖，應(yīng)采取患畜的血液，萬(wàn)不得已時(shí)局部解剖作脾臟觸片的顯微鏡檢查。只有在確定不是炭疽后，方可進(jìn)行剖檢。1采樣時(shí)應(yīng)從胸腔到腹腔，先采實(shí)質(zhì)器官做到無(wú)菌，避免外源性的污染，最后采污染的組織，如胃腸組織、糞便等。2采取的病料必須有代表性，采取的組織器官應(yīng)病變部位明顯。采取病料時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的疫病或檢驗(yàn)?zāi)康?，采取相?yīng)樣品。3Company Logo病料應(yīng)在使用治療藥物前采取，內(nèi)

2、臟病料的采取，如患畜已死亡，應(yīng)盡快采集，最遲不超過(guò)6h。4血液樣品在采集前一般禁食8h。采集血樣時(shí)，應(yīng)根據(jù)采樣對(duì)象、檢驗(yàn)?zāi)康募八柩看_定采血方法和采血部位。5做好個(gè)人防護(hù)，預(yù)防人畜共患病。防止污染環(huán)境，防止疫病轉(zhuǎn)播，做好環(huán)境消毒和廢棄物的處理。6Company Logo1.診斷采樣方法3.疫情監(jiān)測(cè)或流行病學(xué)調(diào)查2.免疫效果監(jiān)測(cè)Company Logo采樣時(shí)機(jī)病初發(fā)熱期癥狀典型期疾病發(fā)展階段一個(gè)免疫間期Company Logo采樣數(shù)量1診斷：1-3頭具有典型癥狀或病死動(dòng)物有病變的器官組織。2免疫效果監(jiān)測(cè)：符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。3疫情監(jiān)測(cè)或流行病學(xué)調(diào)查：年齡、季節(jié)、周邊疫情和估算其感染率。4種群疫病監(jiān)

3、測(cè)凈化Company Logo器械采樣記錄用品保存液人員防護(hù)用具采樣器械物品的準(zhǔn)備Company Logo1.耳緣靜脈采血2.前腔靜脈采血：（1）站立保定、（2）仰臥保定3.股靜脈4.橈頭靜脈4.隱靜脈1.雛雞心臟采血2.成年禽的心臟采血：（1）側(cè)臥保定、（2）仰臥保定3.翅靜脈1.牛、羊頸靜脈采血2.牛尾靜脈采血3.乳房靜脈采血血液樣品的采集方法禽豬牛、羊Company Logo血液樣品的制備1.抗凝血：采血前，預(yù)先在采血容器內(nèi)按每10毫升加入0.1%肝素1毫升或EDTA20毫克，采血后立即混勻。Text2.血清：室溫下靜置2h4h(防止曝曬)，待血液凝固，有血清析出時(shí)，然后置4冰箱過(guò)夜，取

4、出血清，必要時(shí)經(jīng)低速離心（1500-2000ram5分鐘）分離出血清。 3.血片Company Logo動(dòng)物活體樣品的采集豬家禽1.喉拭子和泄殖腔拭子：無(wú)菌棉簽，插入雞喉頭內(nèi)或泄殖腔轉(zhuǎn)動(dòng)3圈，取出，插入離心管（事先加入含有6000u雙抗PBS）。2.羽毛采集：含豐富羽髓的翅羽或大羽，剪下羽根置入小試管中。1.鼻腔拭子、咽拭子：無(wú)菌棉簽采集鼻咽分泌物，立即置入保存液（雙抗PBS 、滅菌肉湯、30%甘油鹽水、乳蛋白水解液），密封低溫。2.肛拭子：無(wú)菌棉簽插入肛門采集內(nèi)容物或分泌物。3.扁桃體Company Logo1.牛、羊食道-咽部分泌物(O-P液)樣品： 被檢動(dòng)物在采樣前禁食(可飲水)12小時(shí)

5、，以免反芻胃內(nèi)容物嚴(yán)重污染O-P液。采樣探杯在使用前經(jīng)0.2檸檬酸或2氫氧化鈉浸泡5分鐘，再用自來(lái)水沖洗。每采完一頭動(dòng)物,探杯要重復(fù)進(jìn)行消毒和清洗。采樣時(shí)動(dòng)物站立保定，將探杯隨吞咽動(dòng)作送入食道上部1015cm處，輕輕來(lái)回移動(dòng)23次，然后將探杯拉出。如采集的O-P液被反芻胃內(nèi)容物嚴(yán)重污染，要用生理鹽水或自來(lái)水沖洗口腔后重新采樣。 將探杯采集到的35mL O-P液倒入15 mL的塑料離心管中, 容器中應(yīng)事先加有35mL磷酸鹽緩沖液（0.04mol/L 、pH7.4），加蓋密封后充分搖勻，盡快放入裝有冰塊的冷藏箱內(nèi)，然后轉(zhuǎn)往冰箱凍存。通過(guò)病原檢測(cè)，做出追溯性診斷。 2.眼睛分泌物：無(wú)菌棉簽輕輕擦拭。

6、牛羊Company Logo 以發(fā)病動(dòng)物(牛、羊或豬)未破裂的舌面或蹄部,鼻鏡,乳頭等部位的水泡皮和水泡液最好。對(duì)臨床健康但懷疑帶毒的動(dòng)物可在撲殺后采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等組織樣品作為檢測(cè)材料。 水泡樣品采集部位可用清水清洗，切忌使用酒精、碘酒等消毒劑消毒、擦拭。 未破裂水泡中的水泡液用滅菌注射器采集至少1毫升，裝入滅菌小瓶中(可加適量抗菌素)，加蓋密封；盡快冷凍保存。 剪取新鮮水泡皮35克放入滅菌小瓶中,加適量（2倍體積）50甘油/磷酸鹽緩沖液(pH7.4), 加蓋密封；盡快冷凍保存。 在無(wú)法采集水泡皮和水泡液時(shí)，可采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等組織樣品35克裝入潔凈的小瓶?jī)?nèi), 加蓋密封；盡快冷凍

7、保存。 水泡樣品 Company Logo其他 糞便1.用于病毒檢驗(yàn)2.細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)3.寄生蟲學(xué)檢驗(yàn) 生殖道樣品1.流產(chǎn)胎兒及胎盤2.精液3.陰道、陰莖包皮分泌物皮膚、濃汁、尿液、乳汁 關(guān)節(jié)及胸腔腹腔積液樣品1.皮下水腫、關(guān)節(jié)囊滲出液2.胸腔積液3.腹腔積液Company Logo病死畜禽組織樣品的采集一、小家畜或家禽致死后，裝入密封袋中，低溫送檢六：腸1.腸管2.腸內(nèi)容物二、實(shí)質(zhì)器官：小的器官（脾、腎、淋巴結(jié)）完整采取，大的器官（心、肝、肺）采集病變部分，要采集病變與健康組織交界處。1.病理組織學(xué)2.病原學(xué)三、骨五、腦：采樣勺采集法：采集后，浸入30%甘油鹽水液中 或冰凍保存。全腦采集：分兩部

8、分。四、皮膚Company Logo樣品登記表與樣品信息1.采樣同時(shí)，填寫采樣單2.每頭動(dòng)物的不同部位的組織樣品應(yīng)單獨(dú)包裝3.采樣單隨樣品同時(shí)送到、部分要附病史資料。家禽采樣單家畜采樣單Company Logo1.容器的選擇：完整、密封、清潔樣品包裝要求2.容器外的標(biāo)示：樣品編號(hào)、樣品名、日期等。Company Logo樣品的保存1血清學(xué)檢驗(yàn)材料：1.避免高溫、陽(yáng)光2.防漏、防破損2微生物學(xué)檢驗(yàn)材料：1.液體病料：滅菌瓶?jī)?nèi)，密封，裝入大容器；棉拭子蘸取，投入滅菌試管。2.實(shí)質(zhì)臟器：短時(shí)間內(nèi)送到。30%、50 %甘油生理鹽水毒物檢驗(yàn)材料：無(wú)菌采集可合裝一清潔容器內(nèi)。污染性的裝一起。3病理組織學(xué)1

9、.10%福爾馬林、2.90%酒精Company Logo防泄漏：具有堅(jiān)實(shí)的大容器，具有足夠的墊料樣品的運(yùn)送詳細(xì)標(biāo)簽，低溫保存，避免反復(fù)凍融時(shí)間：立即送到，如距離遠(yuǎn)，24h內(nèi)，4左右。24h外，冰凍。Company Logo1234各地州根據(jù)全年監(jiān)測(cè)任務(wù)合理安排上下年送檢任務(wù)，在規(guī)定的時(shí)間范圍內(nèi)送檢。集中監(jiān)測(cè)送樣時(shí)間：上半年5月份，下半年10月份。地州疾控中心收到各縣樣品后，應(yīng)應(yīng)先匯總整理，不要以縣市為單位送檢樣品。送檢樣品需航空運(yùn)輸，或?qū)Ｈ怂蜋z。各種疫病在采樣單的填寫上都應(yīng)嚴(yán)格地去填所有需要填的內(nèi)容，不能空格不填。沒(méi)有的項(xiàng)可畫斜線表示或?qū)憻o(wú)。送檢單必須加蓋單位公章。送檢單及樣品不合格，退回。

10、實(shí)驗(yàn)室部分送檢要求Company Logo5定點(diǎn)、定期、定量、定性監(jiān)測(cè)工作機(jī)制自治區(qū)定點(diǎn)到縣，地州（市）定點(diǎn)到鄉(xiāng)，按2011年監(jiān)測(cè)計(jì)劃要求采集樣品，原則上種畜場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)、活畜交易市場(chǎng)要相對(duì)固定，散養(yǎng)戶根據(jù)實(shí)際情況采集樣品，監(jiān)測(cè)采樣要有連續(xù)性，便于數(shù)據(jù)分析。采樣數(shù)量按監(jiān)測(cè)計(jì)劃要求制定，采樣要合理布局。實(shí)驗(yàn)室部分送檢要求Company Logo1.2011年豬瘟、高致病性藍(lán)耳病病原學(xué)集中監(jiān)測(cè)任務(wù) 中，所采樣品為同一樣品，不必重復(fù)采樣，在采樣 單上注明豬瘟、高致病性藍(lán)耳病免疫狀況。實(shí)驗(yàn)室部分送檢要求2.2011年禽流感、新城疫病原學(xué)集中監(jiān)測(cè)任務(wù)中， 所采樣品為同一樣品，不必重復(fù)采樣，在采樣單 上注明

11、禽流感、新城疫免疫狀況。3.喉頭拭子與泄殖腔拭子要放入同一試管（1.5ml離 心管）內(nèi)，喉頭拭子采集的為喉頭氣 管內(nèi)的黏液（分泌物）。4.野禽（小珍禽）必須為新鮮糞便。5.活畜與屠宰場(chǎng)采樣比例失調(diào)，采集屠宰場(chǎng)樣品 多，采集活畜樣品少，動(dòng)物疫病在活畜存在的風(fēng) 險(xiǎn)大，采樣比例應(yīng)大。Company Logo附錄 1不同動(dòng)物采血部位豬前腔靜脈馬、牛、山羊、綿羊頸靜脈狗、貓心臟狗、貓股動(dòng)脈大量血牛尾靜脈雞、鴨、鵝翼下靜脈狗、貓頸靜脈狗、貓前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈狗、貓后肢外側(cè)皮下小隱靜脈中量血雞、鴨、鵝冠、腳蹼皮下靜脈狗、貓、豬、山羊、綿羊耳靜脈少量血?jiǎng)游锓N類采血部位采血量Company Logo病名樣品口蹄

12、疫 水皰皮、水皰液、食道-咽分泌物、扁桃體非洲豬瘟全血、脾臟、扁桃體 豬瘟全血、扁桃體、淋巴結(jié)、腎、脾、腎臟小反芻獸疫 全血、眼鼻分泌物、淋巴、脾、肺、扁桃體藍(lán)舌病全血、脾、肝癢病腦牛海綿狀腦病腦禽流感、新城疫鼻、咽、氣管分泌物、泄殖腔拭子、肝、脾、腎、腸管、糞便豬流感鼻、氣管或支氣管拭子、肝、脾等狂犬病唾液、腦附錄 2 部分動(dòng)物疫病病原檢驗(yàn)取樣樣品參考表 Company Logo牛肺疫肺、胸腹積液炭疽 全血（涂片）、脾、耳部皮膚偽狂犬病腦、脊髓液、扁桃體、淋巴結(jié)、流產(chǎn)胎兒、胎盤（豬）巴氏桿菌病全血（涂片）、肝、腎、脾、肺布氏桿菌病流產(chǎn)胎兒、胎盤、乳汁、精液結(jié)核病乳汁、痰液、糞便、尿、病灶分泌物、病變組織細(xì)小病毒病牛：腸粘膜、局部淋巴結(jié)豬：流產(chǎn)胎兒、胎盤、鼻咽氣管分泌物、氣管粘膜犬：小腸及內(nèi)容物、糞便、水泡皮（液）、食道咽分泌物、扁桃體 高致病