同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件05人類免疫缺陷病毒抗體

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKMY/XMZ205第2版標(biāo)題：人類免疫缺陷病毒抗體(抗HIV)測(cè)定第2章 第05號(hào)第 PAGE 4 頁 共 NUMPAGES 4 頁 目的：檢測(cè)血清標(biāo)本中的抗HIV抗體。 適用范圍：同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科HIV實(shí)驗(yàn)室。 項(xiàng)目名稱：HIV抗體測(cè)定。 檢測(cè)方法：雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法。 檢測(cè)原理：本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用gp36、 gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶，采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本的HIV(1+2)抗體。適用于獻(xiàn)血員及高危人群中人類免疫缺陷病毒抗體的篩查。 試劑：6.1 品牌：上?？迫A。6.

2、2 包裝規(guī)格：96人份。6.3 內(nèi)含物：6.3.1 反應(yīng)板（已包被HIV抗原）：8孔/條12；6.3.2 酶結(jié)合物：12ml/瓶；6.3.3 抗HIV陽性對(duì)照：1ml/瓶；6.3.4 抗HIV陰性對(duì)照：1ml/瓶； 6.3.5洗滌液(1:25稀釋)：80ml/瓶；6.3.6 底物緩沖液：8ml/瓶；6.3.7 TMB：8ml/瓶；6.3.8 終止液：7ml/瓶；6.3.9粘紙膠；若干；6.3.10 說明書：1份；6.3.11 自封袋：一個(gè)。7 儀器品牌、型號(hào)：ELX800酶標(biāo)儀，測(cè)定波長為450nm,參考波長630nm；洗板機(jī)、加樣器、溫育箱；Alisei 全自動(dòng)酶免分析儀。8 操作步驟：8.

3、1 打印工作單：8.1.1 打開電腦及打印機(jī)電源,8.1.2 雙擊齊效檢驗(yàn)系統(tǒng),登入自己的工號(hào)與密碼；8.1.3 雙擊報(bào)告處理,單擊標(biāo)本申請(qǐng)信息打開標(biāo)本申請(qǐng)明細(xì)信息查詢,打開左上角的所有信息,選擇未生成報(bào)告信息。8.1.4 在檢驗(yàn)項(xiàng)目處選擇HIV執(zhí)行查詢,點(diǎn)擊打印申請(qǐng)單，打印出工作單。排列被檢測(cè)標(biāo)本：根據(jù)工作單上的庫位號(hào)找出相應(yīng)標(biāo)本,并按工作單上的順序排列。8.3 裝載試劑：開啟Alisei全自動(dòng)酶免分析儀，根據(jù)待測(cè)標(biāo)本數(shù)量，點(diǎn)擊編輯工作列表，出現(xiàn)試劑及酶標(biāo)板界面。按照屏幕所示放好洗板液，洗針液，標(biāo)本試管，預(yù)稀釋管和試劑。8.4 裝載酶標(biāo)板：點(diǎn)擊Alisei全自動(dòng)酶免分析儀界面的裝卸反應(yīng)板按鈕

4、進(jìn)行裝載反應(yīng)板，按項(xiàng)目順序進(jìn)行裝載。等所有項(xiàng)目酶標(biāo)板裝載完成后，點(diǎn)擊開始按鈕，機(jī)器開始檢測(cè)。 Alisei分析儀檢測(cè)參數(shù):試劑空 白陽性對(duì)照陰性對(duì)照標(biāo) 本兩 孔三孔兩孔單 孔100ul/孔孵育37，60min洗滌洗滌液300ul/孔 5次酶結(jié)合物100ul/孔混勻，37，30min洗滌洗滌液300ul/孔 5次底物緩沖液50ul/孔TMB50ul/孔混勻，37，10min終止液50ul/孔 振蕩混勻讀數(shù)450/630nm讀取OD值結(jié)果：8.4.1 陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔OD值0.8。8.4.3 CUTOFF值的計(jì)算：Cutoff值=陽性對(duì)照平均OD值10%(若陽性對(duì)照OD值2.5按2

5、.5計(jì)算)。8.4.4 結(jié)果判定：樣品OD值Cutoff值者為HIV抗體反應(yīng)陽性。樣品OD值Cutoff值者為HIV抗體反應(yīng)陰性。（初試陽性標(biāo)本應(yīng)重新取樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按“全國HIV檢測(cè)管理規(guī)范”送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)）。8.5 儀器自動(dòng)記錄OD值并可打印測(cè)定結(jié)果，同時(shí)傳入LIS中，發(fā)送報(bào)告詳見“HIV實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析報(bào)告程序”。9. 參考范圍：正常人陰性。10. 臨床意義：抗HIV是HIV的相應(yīng)抗體，幾乎所有個(gè)體在感染HIV后都能產(chǎn)生抗HIV，是HIV感染診斷及篩查的良好指標(biāo)。11. 病人準(zhǔn)備、標(biāo)本要求：標(biāo)本為血清時(shí)最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。12. 注意事項(xiàng)：12.1 開展本項(xiàng)檢測(cè)的單位必須是當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的HIV初篩實(shí)驗(yàn)室。12.2 整個(gè)檢測(cè)工作必須符合HIV實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范和生物安全防護(hù)的有關(guān)規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉感染，操作時(shí)必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。12.3 HIV抗體檢測(cè)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。所有樣品、洗滌液和各種廢物應(yīng)按傳染物處理，終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必需注意安全。12.5標(biāo)本和酶結(jié)合物均應(yīng)使用加樣器加樣,并應(yīng)按科室加樣器校準(zhǔn)要求定期校準(zhǔn)。微孔板從冷藏環(huán)境取出時(shí)，應(yīng)平衡至室溫后方可使用，未用完的微孔板須放入有干燥劑的密封袋中保存。12.7粘紙膠不能反復(fù)使用。