原百部堿在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

1、原百部堿在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究【摘要】目的建立原百部堿在大鼠體內(nèi)HPL測(cè)定方法，研究原百部堿靜脈注射后在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)。方法大鼠靜脈注射原百部堿不同時(shí)間點(diǎn)眼眶取血，HPL測(cè)定原百部堿的血藥濃度，3P87軟件處理數(shù)據(jù)。結(jié)果大鼠血清樣品中原百部堿在0.1012.60g/l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，大鼠靜脈注射原百部堿后藥時(shí)曲線符合雙室模型,分布速率常數(shù)為2.69h-1,消除速率常數(shù)為0.69h-1，AU為3.82ghL-1。結(jié)論所建立的血藥濃度測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確靈敏、重現(xiàn)性好，可用于原百部堿在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究。原百部堿靜脈注射后分布和消除均較快?！娟P(guān)鍵詞】原百部堿；百部；藥動(dòng)學(xué)；高效液相色譜

2、Abstrat：bjetiveTestablishanHPLethdfrthedeterinatinfprtstenineinratplasaandtstudypharakinetisparaetersinratsafteri.v.injetin.ethdsAftertakingprtsteninethrughi.v.injetin,ratplasasapleserelletedatdifferenttiepints,andtheyeredeterinedbyHPLand3P87talulatedata.ResultsTheresultsshedthatthelinearrangefalibr

3、atinurveasithindrugplasanentratinf0.1012.6g/l,andthepharakinetisfprtstenineinratserefittedtt-partentdel.nlusinTheethdhasgdseletivity,sensitivityandreprduibility，hihanbeusedfrpharakinetistudiesfprtstenineinratplasa.Duetitsfastabsrptinandeliinatin,itanbeadeintslandntrllablereleasedpreparatins.Keyrds：P

4、rtstenine;RadixStenae;Pharakinetis；HPL百部是臨床治療咳嗽的常用有效中藥，又名“嗽藥，功擅潤(rùn)肺止咳，可用于治療新久咳嗽，如急、慢性支氣管炎、百日咳及肺結(jié)核等疾病，療效確切。中藥百部既沒(méi)有嗎啡、可待因的成癮性和呼吸抑制作用，又沒(méi)有右美沙芬導(dǎo)致出現(xiàn)幻覺(jué)、錯(cuò)覺(jué)或其它精神不正常病癥的副作用，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，百部鎮(zhèn)咳作用的有效成分為生物堿13，但相關(guān)的體內(nèi)研究報(bào)道較少。本文以從蔓生百部中別離得到的、具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)咳活性的原百部堿單體為指標(biāo)性成分，通過(guò)建立原百部堿在大鼠體內(nèi)HPL測(cè)定方法，研究原百部堿靜脈注射后在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)，為百部生物堿新劑型設(shè)計(jì)

5、和臨床用藥提供科學(xué)根據(jù)。1儀器與材料1.1材料原百部堿對(duì)照品(自制，批號(hào)20221205,純度為98.0),其余試劑為分析純或色譜純。1.2動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄各半，體質(zhì)量20050g。1.3儀器與設(shè)備Agilent1100高效液相色譜儀，(在線脫氣機(jī)，二元泵，柱溫箱，色譜管理系統(tǒng))，美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品；色譜柱:依利特HypersilDS25，2504.6；LG16-高速離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；X-80A旋渦混勻器，上海精科實(shí)業(yè)；DL-4000B冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；UV-2401P紫外分光光度計(jì)，日本島津；Gilsn移液器，法國(guó)吉爾森公司。2方

6、法和結(jié)果2.1HPL測(cè)定大鼠體內(nèi)原百部堿的方法學(xué)考察2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇將原百部堿單體用甲醇配成適宜濃度，經(jīng)全波長(zhǎng)掃描，最大吸收波長(zhǎng)為305n。2.1.2HPL測(cè)定色譜條件優(yōu)選后的色譜條件為：固定相：HypersilDS，2504.6；流動(dòng)相：乙睛0.25甲酸銨2575；檢測(cè)波長(zhǎng)：305n；流速：1.0l/in；柱溫：25。2.1.3原百部堿標(biāo)準(zhǔn)溶液配制精細(xì)稱(chēng)取原百部堿對(duì)照品10.10g，用甲醇定容至10l,濃度為1010g/l，并依次稀釋成濃度為101.0，50.50，25.25，12.62，6.310，3.155，1.578，0.7890，0.3945g/l的系列對(duì)照品溶液，密封、低溫

7、、避光保存?zhèn)溆谩?.1.4血清樣品的預(yù)處理參考文獻(xiàn)報(bào)道4，確定的血清樣品的預(yù)處理方法為：用微量移液器汲取血清200l于1.5l離心管中，加600l甲醇沉淀蛋白，于渦旋混合器上充分混合30s，離心(4000r/in)15in，取上清液，經(jīng)0.45的微孔濾膜濾過(guò)，取濾液20l進(jìn)樣。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.1.5分析方法驗(yàn)證方法的專(zhuān)屬性：在上述色譜條件下，空白血清中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾原百部堿的測(cè)定，血清樣品中原百部堿的理論塔板數(shù)大于5000,與相鄰色譜峰別離度均大于1.5。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取空白血清200l，參加原百部堿系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各100l，甲醇500l，配制成相當(dāng)于原百部堿濃度為12.6，6.

8、30，3.15，1.58，0.79，0.40，0.20，0.10，0.05g/l的血清樣品，按“2.1.4依法操作，進(jìn)樣20l，記錄色譜圖；以待測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)展回歸計(jì)算，獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.9776+46.4783X，線性相關(guān)系數(shù)r值為0.9997，線性范圍為0.1012.60g/l，最小檢測(cè)限S/N3為0.025g/l，最小定量限S/N10為0.082g/l。含量測(cè)定方法的精細(xì)度實(shí)驗(yàn)、回收率和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：勸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下低、中和高3個(gè)濃度原百部堿的質(zhì)量濃度分別為0.10、1.58和12.6g/l的對(duì)照品溶液，按“2.1.2項(xiàng)下條件分別連續(xù)測(cè)定5次，求算本法的精

9、細(xì)度，RSD分別為6.58，1.32和0.97。取9份200l空白血清，分別參加0.40，6.31，50.5g/l3個(gè)濃度的原百部堿標(biāo)準(zhǔn)溶液100l，甲醇500l，按“2.1.4項(xiàng)下依法操作，得0.10，1.58，12.6g/l3個(gè)濃度的原百部堿血清樣品溶液，進(jìn)樣20l，測(cè)定峰面積；同時(shí)測(cè)定0.10，1.58，12.6g/l3個(gè)濃度的原百部堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，以?xún)烧叻迕娣e比計(jì)算原百部堿在血清中的回收率，結(jié)果分別為90.9，96.6，95.8，平均回收率為94.4，(n=9)，RSD為3.20。本實(shí)驗(yàn)考察了原百部堿血清樣品室溫放置的穩(wěn)定性，結(jié)果說(shuō)明12h內(nèi)被測(cè)樣品溶液峰面積下降了3.47，24h

10、后峰面積下降了9.27，故樣品應(yīng)在12h內(nèi)測(cè)定。2.2大鼠靜脈注射原百部堿體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究2.2.1給藥方案與樣品采集取SD安康大鼠12只,雌雄各半,體質(zhì)量在(20050)g之間,給藥前禁食不禁水12h,將原百部堿樣品用生理鹽水配制10g/l的濃度，以10g/kg的劑量經(jīng)大鼠尾靜脈注射給藥(給藥體積1.0l/kg)，并于給藥后0.125，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3h眼眥取血0.6l,置于1l離心管中,離心，取血清200l于1.5l離心管中,按“2.1.4項(xiàng)下操作,由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算原百部堿的血藥濃度。2.2.2研究數(shù)據(jù)原百部堿大鼠靜注給藥后不同時(shí)間點(diǎn)血藥濃度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2。2

11、.2.3統(tǒng)計(jì)結(jié)果由3P87藥物動(dòng)力學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)展處理，以大鼠的平均血藥濃度和時(shí)間計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，通過(guò)R值及AI法綜合判斷房室模型。曲線的擬合以?xún)墒夷Ｐ蜑樽詈?，?quán)重系數(shù)1/2。結(jié)果見(jiàn)表1。表1藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t-partent略3討論本文優(yōu)選的原百部堿HPL色譜條件，原百部堿的理論塔板數(shù)大于5000，別離度大于1.5，最小檢測(cè)限為0.025g/l，最小定量限為0.082g/l，可用于原百部堿體外和體內(nèi)的測(cè)定。血清樣品在12h內(nèi)根本穩(wěn)定，但在室溫和冷藏條件下放置過(guò)夜后再處理進(jìn)樣,原百部堿峰面積下降率較大，提示原百部堿在血清中長(zhǎng)時(shí)間放置不穩(wěn)定。因此處理好的血清樣品應(yīng)盡量在當(dāng)天測(cè)定，原百部堿血清標(biāo)準(zhǔn)液宜隨

12、行配制。據(jù)AI法判斷,原百部堿在大鼠體內(nèi)的藥時(shí)過(guò)程符合二室模型。分布速率常數(shù)為2.69/h，消除速率常數(shù)為0.69/h，AU為3.82ghL-1。說(shuō)明大鼠靜注原百部堿后，快速地分布到中央室，然后逐漸向周邊室轉(zhuǎn)運(yùn)，在中央室和周邊室之間進(jìn)展著可逆性的轉(zhuǎn)運(yùn)。藥物在中央室按一級(jí)過(guò)程消除，半衰期為1.0h，消除較快，提示原百部堿靜脈注射后藥效維持時(shí)間也較短，可考慮局部制成緩控釋制劑，以延長(zhǎng)原百部堿在體內(nèi)的藥效維持時(shí)間?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1Hi-Singhung,P-ingHn,GeLin.AntitussiveAtivityfStenaAlkalidsfrStenatuberseJ.Plantaed，2022，69:914.2HGreger.Struturalrelatinships,distributinandbilgialativitiesfste