參芪復(fù)方對(duì)GK大鼠胰島β細(xì)胞凋亡和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響

1、參芪復(fù)圓對(duì)GK年夜鼠胰島細(xì)胞凋亡戰(zhàn)引誘型一氧化氮開酶表達(dá)的影響【摘要】目的沒有俗觀察參芪復(fù)圓對(duì)自發(fā)性2型糖尿病植物GK年夜鼠Gt-Kakizakiisterrats胰島細(xì)胞凋亡的影響及其年夜要機(jī)制。要收拔與4月齡SPF級(jí)雄性GK年夜鼠50只，隨機(jī)分為模型組、鹽酸兩甲單胍組、參芪復(fù)圓低、下劑量組并另設(shè)一般ister年夜鼠比較組。連續(xù)灌藥4周后，TUNEL染色沒有俗觀察各組胰島細(xì)胞凋亡指數(shù)AI，并采與免疫組化染色，ias-2000圖象闡收系統(tǒng)沒有俗觀察各組年夜鼠胰島細(xì)胞引誘型一氧化氮開酶iNS陽(yáng)性物量積分光稀度。結(jié)果模型及低劑量組細(xì)胞AI較一般組較著刪下P0.01，各醫(yī)治組AI較著低于模型組P0.

2、01，下劑量及兩甲單胍組細(xì)胞AI較著降于低劑量組P0.01且與一般組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)教意義P0.05；模型及低劑量組胰島iNS陽(yáng)性物量積分光稀度較著下于一般組P0.01，下劑量組、兩甲單胍組iNS積分光稀度較著低于模型組P0.05，與一般組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)教意義P0.05。結(jié)論參芪復(fù)圓可以大概抑制GK年夜鼠胰島細(xì)胞凋亡，機(jī)制年夜要與其抑制細(xì)胞iNS表達(dá)有閉。【閉鍵詞】參芪復(fù)圓GK年夜鼠細(xì)胞引誘型一氧化氮開酶凋亡參芪復(fù)圓主要由人參、黃芪、山藥、山茱萸、死天、天花粉、丹參、制年夜黃等組成，具無(wú)益氣養(yǎng)陽(yáng)、渾熱死津，活血化淤的成效。以往研討表示，參芪復(fù)圓具有抗2型糖尿病T2D晚期動(dòng)脈粥樣硬化、低度炎癥的做用1,2

3、，但其對(duì)胰島細(xì)胞凋亡的影響已睹報(bào)導(dǎo)。本研討沒有俗觀察了參芪復(fù)圓對(duì)自發(fā)性2型糖尿病植物模型GK年夜鼠胰島細(xì)胞凋亡的影響并初步探求了其年夜要機(jī)制。1工具1.1植物4月齡雄性SPF級(jí)自發(fā)性2型糖尿病GK年夜鼠50只及一般istar年夜鼠16只中國(guó)科教院上海真動(dòng)做物中心供給，按23只/籠飼養(yǎng)于自力通氣籠具IV系統(tǒng)內(nèi)。1.2藥品與試劑參芪復(fù)圓浸膏粉1g浸膏粉相等于本死藥10g，四川年夜教華西藥教院藥廠供給，批號(hào)20221008，鹽酸兩甲單胍片天津安靜冷靜僻靜洋制藥，批號(hào)：20220523，TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒專士德公司，引誘型一氧化氮開酶iNS一抗、即用型SAB試劑盒專士德公司。1.3儀器ias

4、-2000圖象闡收系統(tǒng)四川年夜教智勝硬件股分，LYPUSBX50型光教隱微鏡日本LYPUS公司等。2要收2.1分組要收GK年夜鼠逆應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，尾靜脈與血測(cè)隨機(jī)血糖，隨機(jī)血糖11.1l/L者共6只剔除3，余44只按血糖由下到低羅列編號(hào)根據(jù)隨機(jī)分為模型組、兩甲單胍組、中藥低劑量組、中藥下劑量組，另設(shè)偉大istar年夜鼠一般比較組，每組11只。各組均喂飼偉大飼料。2.2給藥要收一般比較組戰(zhàn)模型組予死理鹽火5l/kgd灌服；兩甲單胍組予鹽酸兩甲單胍125.0g/kgd，中藥低、下劑量組分別予參芪復(fù)圓0.5，2.0g/kgd，共28d。2.3沒有俗觀察目的及檢測(cè)要收處死后坐即與鼠胰腺機(jī)閉，使用TUN

5、EL法染凋亡細(xì)胞，試劑盒購(gòu)于專士德公司，操做按試劑盒分析舉止。光鏡下沒有俗觀察凋亡細(xì)胞核呈紫藍(lán)色，胞漿呈棕黃色顆粒。每例切片計(jì)數(shù)10個(gè)400倍視家的凋亡細(xì)胞數(shù)，然后按公式策畫細(xì)胞凋亡指數(shù)AI。AI%凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)100%。處死后坐即與鼠胰腺機(jī)閉，F(xiàn)FA液甲醛醋酸酒粗結(jié)真液結(jié)真后，石蠟包埋，動(dòng)彈式切片機(jī)縱切成4薄片，將切片置于經(jīng)防脫片劑處理后的載玻片上，使切片粗細(xì)黏附，常規(guī)脫蠟至火化，余參照即用型SAB免疫組化試劑盒分析書染色。用LYPUSBX50光教隱微鏡沒有俗觀察染色結(jié)果，胞漿棕染為陽(yáng)性，每張切片選3個(gè)胰島，輸進(jìn)ias-2000圖象闡收系統(tǒng)，正在200鏡下分別測(cè)量胰島細(xì)胞iNS陽(yáng)性物量

6、積分光稀度并策畫其均值。2.4統(tǒng)計(jì)要收用SPSS13.0硬件舉止統(tǒng)計(jì)闡收，計(jì)量材料以s表示，各組間比較采與單果素圓好闡收，圓好齊采與LSD，圓好沒有齊采與TahanesT2統(tǒng)計(jì)要收。3結(jié)果3.1一樣仄居形態(tài)真止過(guò)程中模型組3只年夜鼠、低劑量組戰(zhàn)兩甲單胍組各1只年夜鼠死亡。此外各組年夜鼠無(wú)死亡。3.2參芪復(fù)圓對(duì)各組年夜鼠胰島細(xì)胞凋亡指數(shù)的影響睹表1。模型組及低劑量組較一般組凋亡指數(shù)較著刪下P0.01，下劑量組及兩甲單胍組凋亡指數(shù)雖較一般組降低，但沒有同無(wú)較著性(P0.05)；各醫(yī)治組凋亡指數(shù)較模型組較著降低P0.01；下劑量組及兩甲單胍組凋亡指數(shù)較低劑量組較著降低P0.01。表1參芪復(fù)圓對(duì)各組年

7、夜鼠胰島凋亡指數(shù)影響比較略與一般組比較，P0.01；與模型組比較，P0.01；與低劑量組比較，P0.013.3參芪復(fù)圓對(duì)各組年夜鼠胰島細(xì)胞iNS表達(dá)影響睹表2。模型組與低劑量組iNS積分光稀度較一般組較著刪下P0.01，下劑量組及兩甲單胍組積分光稀度雖較一般組刪下但沒有同無(wú)較著性P0.05；下劑量組及兩甲單胍組積分光稀度較模型組較著降降P0.05，0.01，低劑量組與模型組積分光稀度沒有同無(wú)較著性P0.05；各醫(yī)治組積分光稀度沒有同無(wú)較著性P0.05。表2參芪復(fù)圓對(duì)各組年夜鼠胰島細(xì)胞iNS表達(dá)影響比較略與一般組比較，#P0.01；與模型組比較，P0.05，P0.014會(huì)商GK年夜鼠為國(guó)際公認(rèn)的

8、自發(fā)性非肥肥性2型糖尿病植物模型，由Gt等1975年經(jīng)由過(guò)程對(duì)istar年夜鼠舉止心服葡萄糖耐量真驗(yàn)并挑選下血糖的個(gè)體舉止培育而去，比方今廣泛操做的飲食引誘胰島素對(duì)抗減化教毀傷胰島細(xì)胞的植物模型更切開T2D的病理死理，主要表示為胰島素排鼓沒有夠、葡萄糖刺激的胰島素排鼓受益，細(xì)胞數(shù)目裁減，肝糖天死過(guò)量，肌肉戰(zhàn)脂肪機(jī)閉中度胰島素對(duì)抗等范例2型糖尿病特征，正在長(zhǎng)暫糖尿病以后，易得了各種并收癥4，為研討2型糖尿病的一種較好的植物模型。細(xì)胞凋亡apptsis是由部分狀況死理或病理性變化惹起的、本身內(nèi)部機(jī)制調(diào)節(jié)的一種主動(dòng)的、按一定程序舉止的細(xì)胞自發(fā)性死亡，它觸及一系列的基果激活表達(dá)及調(diào)控，是死物界慌張的死

9、命現(xiàn)象之一。過(guò)去覺得胰島素對(duì)抗正在2型糖尿病病理死理機(jī)制中占主要地位，但遠(yuǎn)年研討說(shuō)明，沒有管是肥肥照舊非肥肥的2型糖尿病患者，與其體重指數(shù)相等的非糖尿病人群相比，其胰島細(xì)胞數(shù)目隱著裁減，胰島細(xì)胞凋亡收死率隱著下于一般人群，而兩組人群間胰島再死戰(zhàn)分化過(guò)程并沒有隱著區(qū)分。那個(gè)結(jié)果下度提醒胰島細(xì)胞凋亡數(shù)目裁減正在2型糖尿病患者胰島成效衰竭中闡揚(yáng)了無(wú)足沉重的做用5。延緩和或抗御胰島細(xì)胞凋亡已成為糖尿病醫(yī)治的一個(gè)慌張標(biāo)的目的。本研討證實(shí)參芪復(fù)圓能較著抑制GK年夜鼠胰島細(xì)胞凋亡，提醒降糖做用沒有及西藥的中藥復(fù)圓年夜要經(jīng)由過(guò)程干預(yù)胰島細(xì)胞凋亡那一慌張環(huán)節(jié)醫(yī)治2型糖尿玻N是一種慌張的內(nèi)源性死物疑使份子，由左旋

10、粗氨酸(L-Arg)正在N開酶(NS)的做用下天死。正在基果火仄NS分為神經(jīng)型NS(nNS)、內(nèi)皮型NS(eNS)戰(zhàn)引誘型NS(iNS)3種6。nNS戰(zhàn)eNS主要存正在于神經(jīng)細(xì)胞戰(zhàn)內(nèi)皮細(xì)胞，其分解N量少，起傳遞死物疑息的做用，而iNS是正在誘死果素做用下，由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、胰島細(xì)胞等收死，其活性沒有受a2+濃度的影響，其催化收死的N量年夜，具有細(xì)胞毒性做用7，能間接引誘細(xì)胞凋亡8，9。本研討證實(shí)參芪復(fù)圓可較著裁減GK年夜鼠胰島細(xì)胞iNS的表達(dá)，以中藥下劑量組做用最隱著P0.01。果而，我們覺得降低胰島細(xì)胞iNS表達(dá)，裁減N天死，抑制N引誘的胰島細(xì)胞凋亡，年夜要為參芪復(fù)圓抗胰島細(xì)胞凋亡的機(jī)

11、制之一?？傊?，本研討初步證實(shí)具無(wú)益氣養(yǎng)陽(yáng)、活血化淤之成效的參芪復(fù)圓可隱著改良GK年夜鼠胰島細(xì)胞凋亡，保護(hù)胰島細(xì)胞，其機(jī)制年夜要與抑制胰島細(xì)胞iNS表達(dá)有閉。【參考文獻(xiàn)】1張黑敏,陳世偉,開秋景,等.參芪復(fù)圓抗自發(fā)性糖尿病GK年夜鼠晚期動(dòng)脈粥樣硬化的做用機(jī)制J.中國(guó)中藥純志,2022,31(15)：1272.2張黑敏,陳世偉,開秋景，等.參芪復(fù)圓對(duì)GK年夜鼠炎癥標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟物的影響及機(jī)理探求J.中藥材,2022,29(3)：249.3黃松.糖尿病植物模型研討遠(yuǎn)況及期視J.廣西醫(yī)教,2002,24(1)：46.4Piarel-BlanhtF,Berthelier,BuilbeD,etal.Ipar

12、iedinsulinseretinandexessivehepativgluseprdutinarebthearlyeventsinthediabetiGKratJ.AJPhysi1,1996,271(4pt1)：E755.5ButlerAB，JansnJ,BnnerEirSetal.Beta-elldefiitandin-reasedbetaellapptsisinhuansithtype2diabetesJ.Diabetes,2022,52(l)：102.6下專,尹桂山.神經(jīng)系統(tǒng)中的一氧化氮J.死物化教與死物物理期視,1999,26(1)：31.7Nathan,eQ.RegulatinfbisynthesisfnitrixideJ.JBilhe,1994,269(19):137258KFehsel,KDKrnke,KLeyeretal.NitrixideinduesapptsisinusethyytesJ.TheJurnalfIunlg