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1、如果我們想知道1g土壤中有多少分解尿素的細(xì)菌,該如何去做?第1章 發(fā)酵工程1.2 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用第2課時(shí) 微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)如何從土壤中篩選出分解尿素的細(xì)菌?1資料一水生棲熱菌能在70-80的高溫條件下生存,而絕大多數(shù)微生物則不能。1973年,科學(xué)家利用水生棲熱菌的這種特性,從美國(guó)黃石國(guó)家公園的熱泉中將其篩選出來(lái),從中提取出耐高溫的DNA聚合酶現(xiàn)廣泛應(yīng)用于PCR技術(shù)。選擇培養(yǎng)微生物的生長(zhǎng)需要哪些條件?1選擇培養(yǎng)基允許特定種類微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。如何從土壤中篩選出分解尿素的細(xì)菌?1選擇培養(yǎng)資料二尿素的含氮量很高,化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定,是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要
2、的氮肥。土壤中某些可以合成脲酶的細(xì)菌能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃镹H3并作為氮源加以利用;而不能合成脲酶的菌,則無(wú)法將尿素作為生長(zhǎng)的氮源。微生物的生長(zhǎng)需要哪些條件?1如何從土壤中篩選出分解尿素的細(xì)菌?1選擇培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入凝固劑(瓊脂)較多菌種分離,鑒定,計(jì)數(shù)半固體培養(yǎng)基加入凝固劑較少微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn),連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成,培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成,培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn),降低成本目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基添加(或缺少)某種化學(xué)成分菌種的篩
3、選微生物的生長(zhǎng)需要哪些條件?1如何從土壤中篩選出分解尿素的細(xì)菌?1培養(yǎng)菌種類型原理配制特點(diǎn)結(jié)果尿素分解菌選擇培養(yǎng)基合成脲酶以尿素作為唯一氮源僅允許特定微生物生長(zhǎng)鑒別培養(yǎng)基酚紅遇堿變紅添加酚紅菌落周圍出現(xiàn)紅圈培養(yǎng)菌種類型原理配制特點(diǎn)結(jié)果纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基合成纖維素酶以纖維素作為唯一碳源僅允許特定微生物生長(zhǎng)鑒別培養(yǎng)基剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物添加剛果紅菌落周圍出現(xiàn)透明圈如何對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)?2NO.1稀釋涂布平板法1.選擇多大稀釋范圍進(jìn)行計(jì)數(shù)?2.為減小誤差,同一濃度樣品液在涂板計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)如何去做?3.選擇菌落數(shù)為多少的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)較為適宜?4.此法計(jì)數(shù)結(jié)果與土壤中的實(shí)際數(shù)目一致嗎?思 考如何
4、對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)?2NO.1稀釋涂布平板法計(jì)算1.將1g土壤溶解于9ml無(wú)菌水中,充分搖勻。取0.1ml接種到培養(yǎng)基上,均勻涂布,培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù),若平板上菌落數(shù)的平均值為200,則1g土壤中的活菌數(shù)約為多少?2.若菌液的稀釋倍數(shù)為103呢?如何對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)?2NO.2顯微鏡計(jì)數(shù)法血細(xì)胞計(jì)數(shù)板如何對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)?2NO.2顯微鏡計(jì)數(shù)法血細(xì)胞計(jì)數(shù)板兩種計(jì)數(shù)方法有何不同?思 考如何對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)?2顯微鏡計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)工具血細(xì)胞計(jì)數(shù)板平板計(jì)數(shù)對(duì)象顯微鏡下菌體本身培養(yǎng)基上的菌落數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果實(shí)際值實(shí)際值原因活菌和死菌的總和多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)僅呈現(xiàn)出一個(gè)菌落優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便,操作簡(jiǎn)單活菌計(jì)數(shù)缺點(diǎn)死菌也計(jì)算在內(nèi)操作復(fù)雜,誤差較大直接計(jì)數(shù)間接計(jì)數(shù)12345制備選擇培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源配置選擇培養(yǎng)基樣品稀釋對(duì)土壤樣品進(jìn)行梯度稀釋預(yù)實(shí)驗(yàn)了解大致范圍培養(yǎng)待培養(yǎng)液吸收倒置平板將空白平板和對(duì)照平板一同放入恒溫培養(yǎng)箱土壤取樣取地表下3-8cm
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