腦出血微創(chuàng)術(shù)后自體骨髓間充質(zhì)干細胞動員

1、腦出血微創(chuàng)術(shù)后自體骨髓間充質(zhì)干細胞動員對神經(jīng)功能恢復(fù)的影響胡 煒1，楊 楓11九江市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科，江西省九江市 332000。Impact of autologous bone marrow mesenchymal stem cell mobilization on neurological function recovery after minimally invasive surgery with cerebral hemorrhage胡煒，男，1971年生，河南省開封市人，漢族，博士，副主任醫(yī)師，主要從事干細胞培養(yǎng)與移植及神經(jīng)功能缺損修復(fù)方面的研究。 HYPERLINK mail

2、to: 。江西省科技計劃項目：20112BBG70079摘要：目的：觀察微創(chuàng)術(shù)后BMSCs動員對腦出血術(shù)后神經(jīng)功能的影響。方法：腦出血患者35 例隨機分為2 組。對照組15例，常規(guī)立體定向手術(shù)治療，治療組 20例，在術(shù)后35天行BMSCs動員。各組術(shù)前及術(shù)后1，3，6個月行NIHSS量表、FIM量表評分，各組術(shù)前、術(shù)后兩周測定外周血CD133+、CD34+細胞數(shù)，術(shù)后1、6月各組行肝腎功能檢查。結(jié)果：術(shù)后兩組NIHSS、FIM分值均顯著高于術(shù)前(P 0.05)，術(shù)后治療組NIHSS、FIM分值均顯著高于對照組(P 0.05)。術(shù)后2周，治療組外周血CD133+、CD34+細胞在單核細胞（Mon

3、onuclear Cells，MNCs）中的比例明顯高于對照組(P005)。術(shù)后1、6月各組肝腎功能檢查指標正常。結(jié)論：腦出血微創(chuàng)術(shù)后盡早進行BMSCs動員，無不良反應(yīng)，可促進神經(jīng)功能恢復(fù)，提高患者生活能力和質(zhì)量。關(guān)鍵詞：細胞移植；干細胞動員；腦Summary：Objective: To observe the impact of autologous bone marrow mesenchymal stem cell mobilization on neurological function recovery after minimally invasive surgery with cer

4、ebral hemorrhage.Methods: 35 patients with cerebral hemorrhage divided into two groups randomly. 15 cases in control group progress stereotactic surgery; 20 cases in treated group, begain BMSCs mobilization 3 to 5 days postoperation. Preoperative and 1, 3, 6 months postoperative, NIHSS scale and FIM

5、 scale were performed. Preoperative and 2 weeks postoperative, CD133 +, CD34 + cell count was measured in peripheral blood, 1,6 months postoperative liver and renal function were performed in each group.Results: Postoperative NIHSS, FIM scores were significantly higher than preoperative (P 0.05) in

6、two groups, postoperative NIHSS scores and FIM scores in treated group were significantly higher (P 0.05) than control group. Two weeks postoperation, the proportion of CD133+, CD34 + cells in mononuclear cells in peripheral blood of treated group was significantly higher than control group (P 0.05)

7、. 1,6 months postoperative liver and renal function were normal.Conclusion: As early as possible after minimally invasive surgery of cerebral hemorrhage, BMSCs mobilization can performed without adverse reactions, and can promote the recovery of neurological function, improve the capacity and qualit

8、y of life.Keywords: cell transplantation; stem cell mobilization; brain高血壓腦出血為常見病，病殘、病死率高，嚴重威脅人類的健康。降低病死、病殘率是學(xué)者們致力研究、解決的難題。美國卒中協(xié)會自發(fā)性腦出血治療指南（2010年）指出：微創(chuàng)手術(shù)能夠明顯降低腦出血患者死亡率，但神經(jīng)功能改善無顯著性差異。如何進一步改善患者神經(jīng)功能已經(jīng)成為臨床新的難題。神經(jīng)科學(xué)的發(fā)展使人們對干細胞促進神經(jīng)功能恢復(fù)寄予厚望，研究表明：骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）可以在腦中成活并向受損部位遷移，增殖分化為神經(jīng)細胞，l從而促進神經(jīng)功能的恢復(fù)，不斷有BMSCs

9、應(yīng)用于臨床。2 而動員自體BMSCs修復(fù)損傷神經(jīng)的方法，以其無創(chuàng)傷性，不必體外分離、純化、擴增等特點受到廣泛關(guān)注。臨床有關(guān)立體定向術(shù)后BMSCs動員治療腦出血的報道較少。本研究主要針對基底節(jié)、丘腦高血壓腦出血患者，在腦出血急性期立體定向血腫引流后行BMSCs動員，觀察術(shù)后BMSCs動員對患者神經(jīng)功能的影響。1 對象和方法1.1對象：選擇本科收治的腦出血患者45例，男33例，女12例；按入院單雙日分2組，治療組25例，男19例，女6例，年齡3965歲，平均52.6210.70歲。血腫量2566ml，平均32.512.32ml。出血至手術(shù)時間，824 h 20例，2472 h 5例，平均30.15

10、11.45 h。對照組20例。男14例，女6例，年齡3461歲，平均54.349.35歲。血腫量3258ml，平均33.514.68ml。出血至手術(shù)時間：824 h 13例，2472 h 7例，平均27.159.82 h。診斷標準：腦出血的診斷符合全國第4次腦血管病學(xué)術(shù)會議通過的診斷標準3，并經(jīng)過顱腦CT檢查證實。納入標準：經(jīng)顱腦CT檢查證實的腦出血患者。生命體征穩(wěn)定者。入院時格拉斯哥評分（GCS）613分且血腫穩(wěn)定。出血至手術(shù)時間：872 h。對治療方案知情同意者。1.2 方法：所用患者均接受常規(guī)脫水降顱壓、營養(yǎng)腦組織、預(yù)防肺部感染等藥物治療。對照組：行立體定向血腫腔置管引流手術(shù)。 治療組：

11、在立體定向血腫腔置管引流手術(shù)的基礎(chǔ)上，術(shù)后35天開始自體BMSCs動員。以重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-cSF)和重組人粒-巨噬細胞集落刺激因子(rhGM-cSF)，2.5ugkg皮下注射，1次3天，交替使用，共7次。應(yīng)用動員劑前查血常規(guī)和凝血功能，若白細胞數(shù)20109L，繼續(xù)使用；若白細胞數(shù)20109L，暫停注射，隔日復(fù)查后根據(jù)情況應(yīng)用，總注射次數(shù)不變。動員后第7、14、21天檢測肝腎功能。1.3指標檢測及療效評定：以美國國立衛(wèi)生院神經(jīng)功能缺損評分量表(NIHSS)、功能獨立性評定量表（FIM）評估患者神經(jīng)功能恢復(fù)情況、生活能力。各組術(shù)前及術(shù)后1，3，6個月行NIHSS量表、FIM量表評

12、分并等對比分析。采用流式細胞儀測定各組術(shù)前及術(shù)后兩周已知抗體標記的外周血CD133+、CD34+細胞數(shù)(即內(nèi)皮祖細胞，EPCs)，通過檢測其在外周血單核細胞(Mononuclear Cells，MNCs)中的比例來判斷動員的BMSCs數(shù)量，評估干細胞動員效果。術(shù)后1、6月各組行生化全套檢查。1.4統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 12.0軟件完成統(tǒng)計學(xué)處理，數(shù)據(jù)資料以s表示，組間比較應(yīng)用t 檢驗，P 0.05)，具有可比性。表1 兩組患者年齡、NIHSS 及 格拉斯哥評分、出血量、手術(shù)時間等基線值比較（s）組別n年齡（歲）NIHSSGCS評分出血量（ml）手術(shù)時間（h）治療組2552.6210.701

13、4.563.279.222.7532.512.3230.1511.45對照組2054.349.3513.873.518.823.1533.514.6827.159.82t0.220.581.110.350.28P0.570.34兩組NIHSS評分、FIM評分比較兩組術(shù)后1，3，6個月行NIHSS評分量表評分、功能獨立性評定（FIM）等對比分析。見表2。表2 兩組患者治療前后NIHSS評分量表評分比較（s）指標治療組（n=25）對照組（n=20）術(shù)前19.563.2718.873.51e術(shù)后1月13.212.5115.653.38a，3月9.731.0412.542.68a，6月7.260.72

14、a，11.871.04a，b注：與術(shù)前比較，aP 0.05,；與治療組比較，bP 0.05, dP 0.05，術(shù)前組間比較。兩組間手術(shù)前的NIHSS評分比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。各組術(shù)后1、3、6月NIHSS評分較術(shù)前均降低且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）；術(shù)后1、3、6月治療組NIHSS評分均低于對照組且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05），而治療組NIHSS評分差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。表3 功能獨立性評定（FIM）比較（s）指標治療組（n=25）對照組（n=20）術(shù)前33.8211.9331.2110.67術(shù)后1月52.1410.8349.3211.703月82.32

15、10.6968.7710.87a，6月93.7511.24a78.6011.37a，b注： aP 0.05, 與術(shù)前比較；bP 0.05, 術(shù)前組間比較；dP 0.05）。兩組術(shù)后FIM分值均高于術(shù)前，術(shù)后1個月FIM分值均顯著高于術(shù)前(P 0.05)，并且隨著時間的延長差異性更為顯著；組內(nèi)比較，術(shù)后6個月FIM分值顯著高于術(shù)后1個月(P 0.05)。治療組術(shù)后1、3、6個月FIM分值顯著高于對照組，術(shù)后3、6個月時的兩組FIM分值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。2.3 兩組術(shù)前及術(shù)后兩周外周血CD133+、CD34+細胞計數(shù)兩組術(shù)前及術(shù)后兩周外周血CD133+、CD34+細胞計數(shù)情況見表4

16、。表4 各組不同時間點CD133+、CD34+細胞計數(shù)（%MNC，s）組別n術(shù)前術(shù)后2周治療組250.150.09b2.110.29對照組200.170.060.240.18注： 與對照組比較，aP 0.05。兩組患者術(shù)前外周血CD133+、CD34+細胞在MNCs中的比例無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)，術(shù)后2周時，治療組外周血CD133+、CD34+細胞在MNCs中的比例明顯高于對照組(P0.05)，術(shù)后2周時，治療組外周血CD133+、CD34+細胞在MNCs中的比例明顯高于對照組(P 0.05）。各組術(shù)后1、3、6月NIHSS評分較術(shù)前均降低且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）；術(shù)后1、3、6

17、月治療組NIHSS評分均低于對照組且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05），而治療組NIHSS評分差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。術(shù)后1個月兩組FIM分值均顯著高于術(shù)前(P 0.05)，并且隨著時間的延長差異性更為顯著；組內(nèi)比較，術(shù)后6個月FIM分值顯著高于術(shù)后1個月(P 0.05)。治療組術(shù)后1、3、6個月FIM分值顯著高于對照組，術(shù)后3、6個月時的兩組FIM分值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。說明隨時間延長兩組患者的生活能力均有逐漸的恢復(fù)，而治療組患者的生活能力恢復(fù)明顯優(yōu)于對照組。干細胞移植治療腦出血的最佳時機尚未明確，有學(xué)者認為在出血后急性期腦組織局部存在興奮性神經(jīng)遞質(zhì)、自由基以及炎性因子

18、等，這些因子有促進細胞增殖和趨化的作用，但是同時對移植物的存活不利9,10,11但是，如選擇在發(fā)病數(shù)月再行干細胞移植或動員，則錯過了神經(jīng)組織早期修復(fù)時機。實驗盡早進行立體定性引流手術(shù)并選擇術(shù)后3-5天開始進行干細胞動員，即腦內(nèi)血腫引流完畢后盡早開始干細胞動員，目的是盡可能避免了血紅蛋白、凝血酶等神經(jīng)毒性介質(zhì)對動員的干細胞的影響，同時讓干細胞盡早參與到神經(jīng)組織修復(fù)過程中。實驗中所有患者均完成治療過程，并獲得6個月隨訪。干細胞動員期間有3例患者感乏力及低熱，發(fā)生率12，停用rhG-CSFrhGM-CSF后恢復(fù)正常。12例患者出現(xiàn)輕度凝血功能異常，主要為D-二聚體輕度升高，考慮和腦出血后病人處于高凝

19、狀態(tài)并伴有纖溶功能亢進有關(guān)12。其余動員患者未見異常，且術(shù)后1、6月生化全套檢查各項生化指標正常。表明rhG-CSFrhGM-CSF進行干細胞動員安全性可靠。綜上所述，微創(chuàng)術(shù)后自體BMSCs動員的開展可望在明顯降低患者死亡率的基礎(chǔ)上，進一步有效改善高血壓腦出血患者神經(jīng)功能，提高患者生活能力和質(zhì)量，值得進一步臨床推廣。參考文獻1 步星耀, 張峰, 張圣旭, 等. 缺血性腦損傷的骨髓間質(zhì)干細胞移植治療研究. 河南醫(yī)學(xué)研究, 2007,16(4): 302-306. 2 朱建新, 李忠民, 肖太武, 等. 自體骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療腦出血32例:是否安全、可行及有效. 中國組織工程研究與臨床康復(fù),

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