香菇多糖對(duì)荷瘤鼠免疫細(xì)胞及生存率的影響

1、香菇多糖對(duì)荷瘤鼠免疫細(xì)胞及生存率的影響【摘要】目的討論香菇多糖對(duì)荷瘤S180鼠免疫細(xì)胞及生存率的影響。方法昆明小鼠70只，分為正常鹽水對(duì)照組，腫瘤模型、組，香菇多糖實(shí)驗(yàn)、組，生存實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M，生存實(shí)驗(yàn)給藥組。觀察計(jì)算小鼠體重、瘤重、腫瘤指數(shù)及抑瘤率，脾重及脾指數(shù)，脾組織構(gòu)造，體視學(xué)方法計(jì)量脾白髓相對(duì)面積百分比及單位面積中脾小體的個(gè)數(shù)，外周血白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，小鼠生存質(zhì)量和生存天數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果香菇多糖有顯著的抑瘤作用，并可明顯延長(zhǎng)荷瘤鼠的生存時(shí)間。香菇多糖使脾指數(shù)明顯升高，使荷瘤鼠脾白髓相對(duì)面積及脾小體個(gè)數(shù)明顯增加。香菇多糖使末梢血中性幼稚細(xì)胞比例明顯增加。結(jié)論香菇多糖能使荷瘤鼠免疫細(xì)胞數(shù)量增加，明

2、顯延長(zhǎng)腹水型S180小鼠的生存期?！娟P(guān)鍵詞】香菇多糖；S180；生存率；體視學(xué)；白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)Abstrat：bjetiveTinvestigatetheeffetsflentinaniunyteandsurvivalrateinS180tur-bearingie.ethds70ieeredividedint7grups:nralsalinentrlgrup，tursalinentrlgrup，tursalinentrlgrup，turlentinangrup，turlentinangrup，survivedelgrupandsurvivelentinangrup.Evaluatinfthee

3、xperientalresultinludedthegeneralnditinftheie,inhibitryratefS180tur,survival,hangesinbdyEight,turEIght,turindex,spleeneights,spleenindex,relativeareasfspleenhitepulp,splenindulenuberandBunts.Results1.LentinauldinhibitthegrthfS180saraandprlnglifeftur-bearingiebviusly.2.Spleenindexeseregreatlyhigheran

4、drelativeareasfspleenhitepulpandsplenindulenuberereinreasedinturlentinangrupthanthers.3.Iatureneutrphilratiinturlentinangrupinreased.nlusinLentinaanstiulateiunyteprpagatingandprlnglifeftur-bearingiebviusly.Keyrds：Lentina;S180；Surviverati;Sterelgy;Peripheralleuytesunt香菇多糖lentinan,LTN作為一種重要的生物調(diào)節(jié)劑，因其確定

5、的抗瘤效應(yīng)，毒副作用小，已廣泛應(yīng)用于腫瘤的免疫治療1。但香菇多糖對(duì)荷瘤者生存質(zhì)量和生存率的影響，以及它對(duì)荷瘤者免疫器官組織構(gòu)造的影響，那么少見(jiàn)研究。本實(shí)驗(yàn)以小鼠S180移植性腫瘤為模型，通過(guò)對(duì)腫瘤指數(shù)、抑瘤率、脾指數(shù)，脾組織構(gòu)造觀察，體視學(xué)方法計(jì)量脾白髓相對(duì)面積百分比及單位面積中脾小體的個(gè)數(shù)，外周血白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，小鼠生存質(zhì)量和生存天數(shù)的觀察等各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定分析，觀察了香菇多糖對(duì)荷瘤S180機(jī)體免疫功能的影響，討論了香菇多糖對(duì)腫瘤的作用效果及其可能的作用機(jī)制，為香菇多糖的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)。1材料小鼠S180細(xì)胞株Sara180由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥研究所購(gòu)進(jìn)，本院科研中心傳代培養(yǎng)。實(shí)

6、驗(yàn)用56天齡昆明小鼠，由贛南醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。注射用香菇多糖消費(fèi)廠家：南京康海藥業(yè)，批號(hào)：051107。lypus顯微鏡。SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件包。2方法2.1荷瘤S180鼠模型的建立取已接種7d腫瘤生長(zhǎng)良好的S180腹水型小鼠，抽吸乳白色的濃稠腹水以無(wú)菌生理鹽水稀釋后，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)展活細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1107，制成腫瘤細(xì)胞懸液活細(xì)胞率95%。在小鼠右前腋皮下注射0.2lS180細(xì)胞懸液，制成實(shí)體瘤模型。2.2動(dòng)物分組及處理昆明小鼠70只，隨機(jī)分為7組，雌雄各半，后兩組用作生存率實(shí)驗(yàn)。第1組為正常鹽水對(duì)照組，右前腋皮下注射0.2l生理鹽水，7d后處死；第2組為腫瘤模型組，第3組

7、為腫瘤模型組，第4組為香菇多糖實(shí)驗(yàn)組,第5組為香菇多糖實(shí)驗(yàn)組，這4組于接種腫瘤后第2天始分別隔日腹腔注射生理鹽水0.2l和香菇多糖0.2l(每只每次0.025g)，第2，4組腹腔注射3次，第3，5組腹腔注射7次，均于最后1次給藥后第2日處死；第6，7組處理方法分別同第3，5組，但7次腹腔注射后不處死，繼續(xù)按常規(guī)飼養(yǎng)，并每日觀察記錄一般情況。2.3取材小鼠2%戊巴比妥鈉全身麻醉，稱重后剪開(kāi)頸部皮膚，注射器穿刺頸內(nèi)靜脈取血，分別置抗凝管中和作二張血涂片；開(kāi)胸，從左心室灌注生理鹽水，至右心房流出清亮液體后改用4%多聚甲醛溶液灌注固定，迅速剝離腫瘤并取脾，電子天平稱重后記錄。然后按每只小鼠的不同編號(hào)分

8、別入4%多聚甲醛溶液中后固定。血涂片自然風(fēng)干后，甲醇固定，瑞氏染液染色待檢。2.4檢測(cè)指標(biāo)2.4.1生存質(zhì)量和壽命延長(zhǎng)率每日觀察記錄生存實(shí)驗(yàn)各組小鼠的一般情況和腫瘤生長(zhǎng)情況。壽命延長(zhǎng)率=(給藥組平均生存時(shí)間模型組平均生存時(shí)間)/模型組平均生存時(shí)間。2.4.2脾重及脾指數(shù)，腫瘤重、腫瘤指數(shù)及抑瘤率計(jì)算公式：脾指數(shù)g/g=脾體質(zhì)量g/小鼠體質(zhì)量g；腫瘤指數(shù)g/g=腫瘤體質(zhì)量g/小鼠體質(zhì)量g；抑瘤率(%)=(腫瘤模型組腫瘤平均體質(zhì)量給藥組腫瘤平均體質(zhì)量)/腫瘤模型組腫瘤平均體質(zhì)量100%。2.4.3脾白髓相對(duì)面積及脾單位面積中脾小體的個(gè)數(shù)所取各組脾臟固定24h后，按常規(guī)脫水透明，低溫石蠟包埋。作連續(xù)

9、切片，片厚5，隔10片取1片，每例取3片，HE染色，用體視學(xué)方法計(jì)量脾本質(zhì)中構(gòu)造的變化情況。計(jì)量方法如下：用物鏡校準(zhǔn)片校定方網(wǎng)系統(tǒng)中小方格的邊長(zhǎng)d及面積d2，以目鏡測(cè)微尺測(cè)參照系脾組織面積測(cè)點(diǎn)數(shù)PS，參照系被測(cè)構(gòu)造脾白髓交點(diǎn)數(shù)P，計(jì)數(shù)脾小體的個(gè)數(shù)n。分別按公式A=P/PS100%和NS=nPSd2計(jì)算脾白髓相對(duì)面積A及單位面積中脾小體的個(gè)數(shù)NS。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4.4外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類按常規(guī)在lypus顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)抗凝血做白細(xì)胞計(jì)數(shù)；每個(gè)樣本2張血涂片，每張血涂片觀察100個(gè)白細(xì)胞，根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)natinalitteefrliniallabratry

10、standards,NLS)推薦的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)分淋巴細(xì)胞、中性幼雉細(xì)胞和中性分葉細(xì)胞，并做記錄。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)滿足正態(tài)分布和方差齊同后作單因素方差分析，組間差異用SNK方法檢測(cè)。3結(jié)果3.1香菇多糖對(duì)各組小鼠生存天數(shù)的影響小鼠接種腫瘤細(xì)胞4天后開(kāi)場(chǎng)出現(xiàn)可觸及腫瘤。腫瘤模型組小鼠成瘤率100%。小鼠飲食減少，毛發(fā)雜亂無(wú)光澤，豎毛現(xiàn)象明顯，活動(dòng)也明顯減少。香菇多糖給藥組小鼠成瘤率90%，腫瘤生長(zhǎng)緩慢，且明顯比腫瘤模型組小鼠活潑，皮毛有光澤，豎毛現(xiàn)象不明顯，生存期明顯延長(zhǎng)。模型組小鼠50%死于20d以內(nèi)，而給藥組小

11、鼠只有20%死于20d以內(nèi)。到實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)接種腫瘤后120d，仍有二只小鼠存活，從外觀看安康活潑，似無(wú)異常。但其中一只在右腹下可觸及綠豆大腫塊已維持20多天未見(jiàn)增長(zhǎng)。各組小鼠生存情況見(jiàn)表1和圖1。表1各組小鼠平均生存時(shí)間和壽命延長(zhǎng)率(略)3.2香菇多糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響香菇多糖有顯著的抑瘤作用。結(jié)果見(jiàn)表2。表2各組小鼠腫瘤生長(zhǎng)情況(略)3.3香菇多糖對(duì)荷瘤鼠脾臟組織構(gòu)造的影響腫瘤模型組脾白髓相對(duì)面積與單位面積脾構(gòu)造中脾小體個(gè)數(shù)均比正常對(duì)照組下降，但在應(yīng)用香菇多糖后，有明顯上升。香菇多糖實(shí)驗(yàn)組小鼠的脾臟指數(shù)比正常鹽水對(duì)照組及腫瘤模型組均有明顯上升。以上情況隨用藥時(shí)間延長(zhǎng)，改善更為明顯。結(jié)果見(jiàn)圖2和表

12、3。表3各組小鼠脾臟組織構(gòu)造比擬(略)3.4香菇多糖對(duì)荷瘤鼠外周血免疫細(xì)胞的影響荷瘤鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)低于正常組，香菇多糖能逆轉(zhuǎn)這種狀況，并使末梢血中性幼稚細(xì)胞比例明顯增加，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果見(jiàn)表4。表4各組小鼠外周血細(xì)胞比擬(略)4討論香菇多糖雖無(wú)直接的抗瘤活性，但能通過(guò)激活不同的免疫反響而到達(dá)預(yù)防腫瘤生成和轉(zhuǎn)移的抗瘤效應(yīng)?？墒鼓[瘤縮小，顯著延長(zhǎng)荷瘤鼠的壽命24。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，香菇多糖在體內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)性S180實(shí)體瘤的生長(zhǎng)具有較明顯的抑制作用，用藥一周時(shí)腫瘤指數(shù)由38.810下降為24.032。抑瘤率到達(dá)35.21%。隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)，抑瘤效果更為明顯，用藥2周時(shí)腫瘤指

13、數(shù)由75.934下降為27.872。抑瘤率到達(dá)61.45%。且小鼠生存狀況也較好。接種腫瘤后存活30d以上的，模型組只有30%，而給藥組有60%。到實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)接種腫瘤后120d，給藥組仍有兩只小鼠存活，壽命延長(zhǎng)率為72.76%。這說(shuō)明香菇多糖有很好的延長(zhǎng)S180荷瘤鼠壽命的作用，且與其明顯的抑瘤效應(yīng)有關(guān)。有研究說(shuō)明，雖然香菇多糖以宿主介導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞免疫為主，但在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)也有促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖和合成IgG的功能，并能減輕由于使用抗腫瘤藥物治療引致的細(xì)胞毒性反響5,6。本實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型組脾白髓面積及單位面積內(nèi)脾小體個(gè)數(shù)明顯降低。應(yīng)用香菇多糖后，脾指數(shù)增加，脾白髓的抑制情況得到改善，且隨時(shí)間的

14、延長(zhǎng)，效果愈為凸顯。當(dāng)用藥兩周后，較未用藥組比擬差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05，生發(fā)中心也更為明顯。這提示香菇多糖可能通過(guò)激活Th細(xì)胞，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的成熟、分化增殖，加強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)中，香菇多糖實(shí)驗(yàn)組脾白髓相對(duì)面積雖比正常組下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且其脾指數(shù)與正常組比擬有明顯上升P0.05，這說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組脾白髓絕對(duì)面積不一定小于正常組。最終結(jié)果還有待做進(jìn)一步的研究。熊繼安等人7的研究說(shuō)明，香菇多糖能增加血中淋巴細(xì)胞和大顆粒淋巴細(xì)胞的數(shù)量，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，增加NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞的活性。本實(shí)驗(yàn)中香菇多糖使中性幼稚細(xì)胞比例明顯增加，其結(jié)果與上述報(bào)道相符。這一事實(shí)說(shuō)明，香菇多糖可能使宿主

15、骨髓造血功能增強(qiáng)，這一方面改善了宿主的免疫抑制狀態(tài)，使荷瘤宿主充分調(diào)動(dòng)自身的抗瘤機(jī)制，另一方面，將可使荷瘤宿主生存質(zhì)量得到改善，有益于配合放化療藥物的應(yīng)用，幫助患者維持相對(duì)較好的免疫功能來(lái)承受藥物的治療，起到更好的抗瘤效應(yīng)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，香菇多糖具有調(diào)節(jié)免疫，協(xié)助抗腫瘤，延長(zhǎng)荷瘤小鼠生存期的作用：其一是能進(jìn)步脾指數(shù)，改善荷瘤機(jī)體脾白髓受抑制狀況，加強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤效應(yīng)；其二是能改善骨髓造血機(jī)能，使外周血白細(xì)胞總數(shù)及中性幼稚細(xì)胞百分比增加，恢復(fù)和進(jìn)步宿主免疫功能。【參考文獻(xiàn)】1劉棟,錢建亞,卜敏.香菇多糖抗腫瘤作用研究現(xiàn)狀J.中國(guó)食用菌,2002,222:6.2asserSP.ediinalu

16、shrsasasurefantiturandiundulatingplysaharidesJ.ApplirbilBitehnl.2002，60(3):258.3aruyaaS,SukekaaY,KanekY,etal.Antiturativitiesflentinanandiellapistintur-bearingiJ.GanTKagakuRyh，2022，33(12):1726.4金亨燮,崔仁花,李承憲.香菇多糖的化學(xué)構(gòu)造與藥理成效J.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2022,26(2):113.5angG,Lin,ZhaR,etal.Effetsfsixplysaharidesextratedfrplantsntheiunlgialellsfi