氯沙坦對阿霉素腎病大鼠腎臟保護(hù)作用的研究

1、氯沙坦對阿霉素腎病大鼠腎臟保護(hù)作用的研究血管緊張素型受體拮抗劑(Angitensintypereeptrantagnist，AT1RA)具有降壓效果，可以延緩腎臟疾病動物模型腎臟損傷進(jìn)展，應(yīng)用于臨床延緩腎功能不全進(jìn)展的治療中1,2。氯沙坦(Lsartan，ARB)是臨床用于延緩腎功能不全進(jìn)展的血管緊張素型受體拮抗劑，具有良好的療效，但其對腎臟保護(hù)作用的詳細(xì)機(jī)制尚不完全清楚。阿霉素腎病大鼠腎臟組織損傷的演變過程與人類腎臟病腎損害的慢性病理過程相似，本研究建立阿霉素腎病大鼠動物模型，觀察給予氯沙坦干預(yù)后大鼠腎組織氧化抗氧化成分變化及對RAS系統(tǒng)中AT1、AT2、AE及AGT基因表達(dá)變化，討論其對腎

2、臟的保護(hù)作用。1材料與方法1.1動物安康清潔級近交系雌性istar大鼠，48只，3月齡，體重(18020)g，(由吉林大學(xué)醫(yī)學(xué)動物繁育中心提供)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1。隨機(jī)分為對照組、腎衰組、氯沙坦組，每組16只。1.2方法1.2.1試劑與儀器Trizl(購自美國Invitrgen公司)，逆轉(zhuǎn)錄酶(購自大連寶生物工程公司)，2PRix(購自北京天根公司)，阿霉素(購自美國Siga公司)，氯沙坦(購自杭州默沙東制藥公司)，DA、SD檢測試劑盒(購自南京成生物工程研究所)，全自動生化分析儀(購自日本lypus公司)，引物由大連寶生物工程公司合成。1.2.2模型制備腎衰組和氯沙坦組腹腔注射阿霉素，每次4g/

3、kg，每周1次，持續(xù)5，出現(xiàn)大量蛋白尿提示腎病動物模型制備成功。對照組注射一樣體積生理鹽水，持續(xù)5。1.2.3給藥方法造模成功后，氯沙坦組大鼠給予氯沙坦1.2g/只灌胃，1次/d;腎衰組給予同等量生理鹽水灌胃，1次/d。所有動物均連續(xù)給藥2，于治療完畢后，在腹腔麻醉下取雙腎凍存于液氮。1.2.4檢測指標(biāo)處死動物，搜集血液，別離血清，3000r/in離心15in，保存于-20冰箱待測。血清尿素氮(BUN)、肌酐(r)含量(l/L)采用生化分析方法檢測，均用lypulsAU640型全自動生化分析儀測定。取腎組織液氮研磨勻漿，3000r/in離心10in，取上清，用黃嘌呤氧化酶法測定腎組織SD活性，

4、用硫代巴比妥酸法測定腎組織DA含量，并用蛋白含量校正。1.3統(tǒng)計學(xué)處理方法采用SPSS11.0軟件分析。計量資料實驗數(shù)據(jù)以xs表示，單變量配對資料之間的比擬采用配對樣本t檢驗。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1血清尿素氮(BUN)、肌酐(r)含量變化與對照組比擬，腎衰組血清BUN明顯增加(P0.05)，氯沙坦組那么明顯低于腎衰組(P0.05);腎衰組血清r明顯增加(P0.05)，氯沙坦組那么明顯低于腎衰組(P0.05)。見表1。表1血清BUN、r的含量與對照組比擬：1)P0.05，與腎衰組比擬：2)P0.05，下表同2.2腎皮質(zhì)DA、SD含量變化與對照組比擬，腎衰組大鼠腎皮質(zhì)DA含量明顯增加(

5、P0.05)，氯沙坦組那么明顯低于腎衰組(P0.05);腎衰組大鼠腎皮質(zhì)SD含量明顯增加(P0.05)，氯沙坦組那么明顯低于腎衰組(P0.05)。見表2。2.3腎組織中腎組織AT1、AT2、AE、AGTRNA的表達(dá)腎衰組腎臟AT1表達(dá)上調(diào)，AT2降低，氯沙坦組轉(zhuǎn)為AT1下調(diào)，AT2表達(dá)接近對照組程度;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(AE)在腎衰時表達(dá)上調(diào)，給予氯沙坦后降低，但仍高于對照組程度;與對照組比擬，腎衰模型血管緊張素原(AGT)程度增高，而給予氯沙坦后其程度降低。見圖1，表3。表2腎皮質(zhì)DA、SD的含量表3腎組織AT1、AT2、AE、AGTRNA表達(dá)比擬3討論AT1RA類藥物(angitensinr

6、eeptrblker)是臨床最常用、療效確切能延緩腎功能不全進(jìn)展的一類藥物，其作用機(jī)制是抑制Ang與其受體結(jié)合，降低循環(huán)血壓和腎小球內(nèi)壓3。血中BUN、r程度在一定程度上可反映腎小球的濾過功能。本研究顯示，腎衰大鼠腎小球濾過功能嚴(yán)重下降，而進(jìn)展氯沙坦干預(yù)治療可以改善腎小球濾過功能，延緩腎功能不全的進(jìn)展，具有腎臟保護(hù)作用。氯沙坦是一種非肽類口服藥，可以特異性阻斷Ang和AT1受體的結(jié)合，近年來氯沙坦在治療高血壓、心力衰竭、心肌缺血、糖尿病腎病和改善胰島素抵抗等方面應(yīng)用較多。在RAS系統(tǒng)中，血管緊張素原(AGT)通過腎素轉(zhuǎn)變成血管緊張素(Ang)，Ang通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(AE)的酶解作用生成血

7、管緊張素(Ang)，是RAS主要活性肽4。Ang可作用于血管緊張素受體AT1和AT2，是腎損傷中重要的調(diào)節(jié)因子。研究證實，Ang主要通過激活NADPH氧化酶和增加線粒體內(nèi)RS來刺激細(xì)胞內(nèi)RS的生成5,6。本研究顯示，脂質(zhì)過氧化反響參與了大鼠阿霉素腎病病理過程，且機(jī)體抗氧化才能減退，而氯沙坦可通過改善腎病機(jī)體氧化應(yīng)激狀況發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，腎衰組腎臟AGT、AE程度升高，AT1表達(dá)增高，AT2降低，氯沙坦組轉(zhuǎn)為AT1下調(diào)，AT2表達(dá)接近對照組程度。提示腎損傷時，由于AGT、AE程度增高，增高的AGT在AE作用下可大量生成Ang;同時，由于AT1程度升高，Ang與AT1結(jié)合通過其縮血管作用影響腎臟血流動力學(xué)，促進(jìn)腎臟病的進(jìn)展，也經(jīng)其誘導(dǎo)單核細(xì)胞活化、促進(jìn)巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)加重細(xì)胞損傷，腎臟一些炎癥表現(xiàn)主要與AT1程度升高或活性增強(qiáng)有關(guān)7,8。由于AT2主要抑制細(xì)胞生長、分化，并介導(dǎo)血管擴(kuò)張，因此腎衰時AT2下調(diào)使其功能減弱，可經(jīng)減少腎血流方式促進(jìn)了腎組織損傷，二者表達(dá)失衡可能在腎損傷的發(fā)病機(jī)制和靶器官的損害過程中發(fā)揮重要作用。氯沙坦可競爭性抑制Ang與其受體結(jié)合，且主要與AT1結(jié)合，阻斷Ang引起的血管收縮、交感興奮、醛固