疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用課件

1、免疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用1免疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用1 免疫組織（或細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)是免疫學(xué)與組織化學(xué)兩種技術(shù)的結(jié)合，它的基本原理是應(yīng)用抗原與抗體的特異性結(jié)合，再用顯色劑顯色達(dá)到標(biāo)記細(xì)胞的某種抗原物質(zhì)的定性與定位檢測技術(shù)，是一種方法簡單，且有效的腫瘤標(biāo)記技術(shù)。 當(dāng)前在免疫組化技術(shù)圍繞著提高敏感性與特異性不斷改進(jìn)和發(fā)展，但它仍有其局限性應(yīng)用于蛋白水平，敏感性與特異性不足，故應(yīng)與其他組織化學(xué)、電鏡及分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用2 免疫組織（或細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)是免疫學(xué)與組織化學(xué)兩種技術(shù)一、免疫組化在診斷中的應(yīng)用原則

2、1防止假陽性與假陰性，防止操作中的污染，規(guī)范操作，設(shè)陽性與陰性對照。2選用2種以上同類抗體：目前腫瘤均為相關(guān)抗原，特異性不足，多種同類抗體可提高陽性率。 3正確評價(jià)免疫組化的結(jié)果：其結(jié)果受抗體、特異性與質(zhì)量、操作、標(biāo)本固定等多種因素影響。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用3一、免疫組化在診斷中的應(yīng)用原則疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用34合理的選擇抗體：既要符合設(shè)計(jì)的要求，價(jià)廉物美，分1、2、3線抗體。5待檢標(biāo)本抗原保存要好：要求快速、新鮮、充份的固定，合適固定劑，福爾馬林液固定標(biāo)本要修復(fù)抗原。疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用44合理的選擇抗體：既要符合設(shè)計(jì)的要求，價(jià)廉物美，分1、2、二、免疫組化在腫瘤診

3、斷中的應(yīng)用（一）上皮性腫瘤標(biāo)記1角蛋白（Keratin）：一種中間絲蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermal keratin，EK）鱗狀上皮或高分化鱗癌標(biāo)記；（2）細(xì)胞角蛋白（cytokeratin，CK）低分子角蛋白，對腺癌、移行細(xì)胞部及低分化鱗癌標(biāo)記。一般用廣譜型角蛋白抗體為好，常用。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用5二、免疫組化在腫瘤診斷中的應(yīng)用疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用52上皮膜抗原（Epithelial membrane antigen，EMA）：這亦是常用的上皮細(xì)胞標(biāo)記抗體，細(xì)胞膜陽性，用Zankers、Bouin或B5固定液中固定為好。其在低分化和未分化上皮中表達(dá)好，但亦可在

4、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、惡性橫紋肌樣瘤中表達(dá)。 3橋粒蛋白（Desmoplakin）：主要標(biāo)記上皮橋粒，Desmo僅表達(dá)于復(fù)層上皮。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用62上皮膜抗原（Epithelial membrane an4癌胚抗原（Carcinoembrgonic antigen，CEA）：是從結(jié)腸癌中分離而得一種球蛋白，定位于細(xì)胞膜上，對腸、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌標(biāo)記陽性，但個(gè)別非上皮腫瘤也可陽性。 5甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）：由胎肝細(xì)胞提取的一種酸性糖蛋白，細(xì)胞漿和膜上表達(dá)，它對肝細(xì)胞癌、卵黃囊癌的特異性標(biāo)記。睪丸 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用74癌胚抗原（

5、Carcinoembrgonic antige（二）間葉源性腫瘤免疫組化標(biāo)記間葉組織包括纖維結(jié)締組織、脂肪、肌肉、血管、骨、軟骨及外周神經(jīng)等，間葉組織腫瘤往往由多向分化的原始間葉細(xì)胞產(chǎn)生，存在共性，標(biāo)記抗體特異性不足，有交叉反應(yīng)。 1波紋蛋白（Vimentin，Vim）：是一種細(xì)胞中間絲蛋白抗體，在多數(shù)軟組織腫瘤均可表達(dá)，但纖維細(xì)胞較明顯，在一些上皮性腫瘤也有陽性反應(yīng)。常用作間葉源與上皮源腫瘤的第一線鑒別抗體 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用8（二）間葉源性腫瘤免疫組化標(biāo)記疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用82結(jié)蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽性。3肌動(dòng)蛋白（Actin）：平滑肌、血管

6、內(nèi)皮、肌上皮細(xì)胞標(biāo)記，HHF35特異。4肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對橫紋肌標(biāo)記較好。 5第因子，CD34：對血管內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤標(biāo)記較特異。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用92結(jié)蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽性。6S-100蛋白：是一種周圍神經(jīng)雪旺氏細(xì)胞特異標(biāo)記抗體，后發(fā)現(xiàn)對脂細(xì)胞、朗格罕氏細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞及其腫瘤均可陽性。 7酸性或堿性磷酸酶：對骨與軟骨腫瘤標(biāo)記好。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用106S-100蛋白：是一種周圍神經(jīng)雪旺氏細(xì)胞特異標(biāo)記抗體，后（三）雙向分化腫瘤標(biāo)記 即有上皮與間葉兩種細(xì)胞分化的腫瘤的標(biāo)記，如滑膜肉瘤、間皮

7、肉瘤、腦膜瘤、癌肉瘤、上皮樣肉瘤等，一般采用CK、EMA標(biāo)記上皮，Vim等標(biāo)記間葉細(xì)胞。另外有一種惡性纖維組織細(xì)胞瘤，由纖維細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞和組織細(xì)胞混合組成的惡性腫瘤，故應(yīng)用Vim和組織細(xì)胞標(biāo)記來診斷。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用11（三）雙向分化腫瘤標(biāo)記疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用11（四）神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記1神經(jīng)原特異性烯醇化酶（Neuron Specific Enolase，NSE）：神經(jīng)原腫瘤標(biāo)記。2膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial Fibrillaly Acidic protein，GFAP）：腦膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記抗體。CD34+F8血管疫組化在腫瘤病理診斷中的

8、應(yīng)用12（四）神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記疫組化在腫瘤病理3神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記：包括類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚Merkel細(xì)胞癌、原始神經(jīng)外胚層瘤（PNET）等，目前應(yīng)用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A（CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時(shí)或兩種一起用，因NSE不夠特異。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用133神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記：包括類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌（五）淋巴網(wǎng)狀組織腫瘤（淋巴瘤）標(biāo)記1B細(xì)胞標(biāo)記抗體：CD20（L26），Ig重鏈（IgG、M、A、E）、輕鏈（、）、CD79a。2T細(xì)胞標(biāo)記抗體：CD45RO（UCHL-1），CD3較好。CD56 3組織細(xì)胞標(biāo)記抗體：M

9、ac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（-1 Antichymotrypsin）等。疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用14（五）淋巴網(wǎng)狀組織腫瘤（淋巴瘤）標(biāo)記疫組化在腫瘤病理診斷中的4霍奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma，HL）R-S細(xì)胞（Reed-Sternberg cell）標(biāo)記抗體：CD15、CD305白細(xì)胞共同抗原（leucocyte common Antigen，LCA）：它對淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞均為膜陽性，作第一線抗體為好。注：（1）國際上將百余種標(biāo)記抗體統(tǒng)稱為CD（Cluster Designation）系列。 （2）淋巴細(xì)胞標(biāo)記與R-S細(xì)胞多數(shù)為膜陽性，而

10、Ig與組織細(xì)胞標(biāo)記為胞漿陽性。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用154霍奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma，HL（六）腫瘤細(xì)胞增殖活性與細(xì)胞凋亡標(biāo)記抗體 瘤細(xì)胞增殖指數(shù)反應(yīng)細(xì)胞增殖活性，是瘤細(xì)胞新生（惡性）狀況的客觀指標(biāo)，與凋亡指數(shù)呈反比關(guān)系。常用抗體有：1增殖細(xì)胞核抗原（proliferative neuclear Antigen，PCNA），核陽性。 2Ki-67，Brdu抗體：原要求新鮮組織，新近有Ki-67石蠟切片標(biāo)記抗體問世。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用16（六）腫瘤細(xì)胞增殖活性與細(xì)胞凋亡標(biāo)記抗體疫組化在腫瘤病理診斷3細(xì)胞凋亡（Apoptosis）標(biāo)記抗體：開始發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡

11、發(fā)生于正常細(xì)胞受基因調(diào)控性自然性死亡。后發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞亦可發(fā)生，而且某些藥物放、化療亦可誘發(fā)細(xì)胞凋亡，故成了研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療的熱點(diǎn)。其標(biāo)記抗體有：（1）凋亡抑制基因蛋白抗體：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。（2）促凋亡基因蛋白抗體：Fas/FasL系統(tǒng)，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。Tunel標(biāo)記。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用173細(xì)胞凋亡（Apoptosis）標(biāo)記抗體：開始發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡（七）癌基因與抗癌基因，促轉(zhuǎn)移與轉(zhuǎn)移抑制基因蛋白抗體標(biāo)記。 目前應(yīng)用很多，因方法比分子生物學(xué)技術(shù)簡單，但是這種結(jié)果不能直接反應(yīng)腫瘤基因的活性，只能間接反應(yīng)腫瘤基因代謝活性，要注意正確

12、評價(jià)它的價(jià)值。 疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用18（七）癌基因與抗癌基因，促轉(zhuǎn)移與轉(zhuǎn)移抑制基因蛋白抗體標(biāo)記。疫疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用19疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用19疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用20疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用20疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用21疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用21疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用22疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用22疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用23疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用23疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用24疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用24疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用25疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用25疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用26疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用26疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用27疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用27疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用28疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用28疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用29疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用29疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用30疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用30疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用31疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用31疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用32疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用32疫組化在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用33疫組化在腫瘤病