高效液相色譜法測定咖啡因

高效液相色譜法測定咖啡因第1頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四主要內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)步驟四、注意事項(xiàng)五、數(shù)據(jù)處理第2頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)高效液相色譜法分離咖啡因的原理。2、練習(xí)高效液相色譜儀的基本操作。3、掌握高效液相色譜法進(jìn)行定性及定量分析的基本方法。第3頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四二、實(shí)驗(yàn)原理咖啡中含咖啡因約1.2～1.8%，茶葉中含2.0～4.7%，可樂飲料和APC藥片中均含有咖啡因。其分子式為C8H10O2N4，結(jié)構(gòu)式：定量測定咖啡因的傳統(tǒng)分析方法是采用萃取分光光度法。

第4頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四二、實(shí)驗(yàn)原理利用混合物不同組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)(或吸附系數(shù)、滲透性等)的差異，使不同組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中進(jìn)行反復(fù)分配，實(shí)現(xiàn)分離的分析方法。色譜法第5頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四色譜法分類色譜法氣體超臨界流體氣固色譜（GSC）氣液色譜（GLC）超臨界流體色譜(SFC)膠束電動(dòng)色譜（MEKC）液液色譜（LLC）吸附色譜（LSC）尺寸排阻色譜(SEC)鍵合相色譜(BPC)離子交換色譜(IEC)親和色譜(AC)毛細(xì)管電色譜(CEC)液固色譜（LSC）液體第6頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四高壓泵流動(dòng)相溶劑廢液色譜柱進(jìn)樣口檢測器高效液相色譜儀第7頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四保留值定性分析第8頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四校準(zhǔn)曲線法定量分析或第9頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四三、實(shí)驗(yàn)步驟1、溶液的配制：

分別取1、2、3、4、5mL100μgmL-1的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以超純水稀釋至50mL，即得到20、40、60、80、100μgmL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：待基線平穩(wěn)后，吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3、樣品測定：吸取待測樣品進(jìn)樣分析，根據(jù)其峰面積，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中咖啡因含量。第10頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四1、流動(dòng)相和樣品溶液需過濾后使用。2、流動(dòng)相還需脫氣。3、基線平穩(wěn)后才能進(jìn)樣分析。4、進(jìn)樣前要清洗微量進(jìn)樣器。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要沖洗系統(tǒng)和色譜柱。四、注意事項(xiàng)第11頁，共13頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)34分，星期四五、數(shù)據(jù)處理1、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖進(jìn)行咖啡因成分的定性；2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并打??；2、計(jì)算樣品中咖啡因含量。第