正交實驗優(yōu)選復(fù)方紅景天口含片中黃精的水提工藝

正交實驗優(yōu)選復(fù)方紅景天口含片中黃精的水提工藝【摘要】目的討論黃精水提的最正確工藝。方法以浸膏得率和多糖含量為考察指標(biāo)，采用正交實驗優(yōu)選黃精的提取工藝條件。結(jié)果影響黃精提取的因素的程度依次為固液比、提取次數(shù)、提取時間、浸泡時間。最適工藝條件為：加14倍量的水，浸泡30in，煎煮3次,30in/次。結(jié)論該工藝簡便、可行?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方紅景天口含片;黃精;提取工藝;正交實驗Abstrat：bjetiveTinvestigatetheptiuextratintehniquefPlygnatusibiriuinpundHngjingtianbualtablets.ethdsTheextratinratifhleslidsandntentfPlygnatusibiriuplysaharideereusedasindexes,theptiunditinsftheextratinfPlygnatusibiriuerestudiedbyrthgnaldesignfL9(34).ResultsTherderffatrsasADB.Theptialextratinnditinsereasflls:14tiesfater,saking30in,aterdetin30inutesfrthreeties.nlusinThebestextratintehniqueisreasnable，pratiableandnvenient.Keyrds：pundHngjingtianbualtablets;PlygnatusibiriuRed;Extratintehnique;rthgnaltest復(fù)方紅景天口含片主要是用于預(yù)防治療老年癡呆癥，處方源自甘肅民間驗方，由紅景天、何首烏、黃精、甘草等藥組成。其佐藥黃精[1]為百合科植物滇黃精Plygnatukingianull.etHesl.，黃精PlygnatusibiriuRed.或多花黃精PlygnatuyrtneaHua的枯燥根莖，按形狀不同，習(xí)稱“大黃精〞“雞頭黃精〞“姜形黃精〞。始載于?名醫(yī)別錄?，具補腎益精、滋陰潤燥之功。現(xiàn)代藥理實驗證明黃精具有調(diào)節(jié)免疫功能、抗衰老、抗菌抗病毒、抗腫瘤、降血糖、降血脂的作用，其主要化學(xué)成分為皂苷、糖類、菸酸、醌類、氨基酸及微量元素[2]。黃精多糖由葡萄糖、甘露醇、半乳糖醛酸縮合而成，其糖鏈以2～6線形連接為主鏈[3]，因其具有抗缺血/缺氧誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用[4]，為重要的生物活性成分之一，因此，本文應(yīng)用正交實驗法重點對黃精多糖的水提工藝進(jìn)展了系統(tǒng)研究，希冀為復(fù)方紅景天口含片的制劑工藝研究提供參考。1儀器與試藥1.1儀器UV-240型紫外-可見分光光度計(日本島津公司);800型離心沉淀器(上海手術(shù)器械廠);AE260型萬分之一電子天平(瑞士ettle公司);P225D十萬分之一電子分析天平(德國賽多利斯公司);R-200型旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀(瑞士BüHI公司);SHZ-D型循環(huán)水式真空泵(河南鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司);SK3310LH型KUDS超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器)。D-無水葡萄糖(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110833-202203)，蒽酮、硫酸、乙醇等均為分析純，水為重蒸餾水。2方法與結(jié)果2.1多糖含量測定2.1.1對照品溶液的制備精細(xì)稱取P25減壓枯燥器中枯燥至恒重的D-無水葡萄糖對照品4.06g，置25l棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，配成濃度為0.1624g·l-1的對照品溶液。2.1.2樣品的制備稱取粉碎過篩(10目)的黃精粉末5g,分別按實驗設(shè)計安排進(jìn)展實驗，合并提取液，濾過，濾液濃縮定容至100l,作為貯備液，備用。再精細(xì)汲取儲藏液2l，參加無水乙醇15l，靜置使其沉淀，離心10in，抽濾，多糖沉淀用無水乙醇洗滌3次，連同濾紙一起置燒杯中，加水適量，超聲提取20in，轉(zhuǎn)移至100l容量瓶中，加水稀釋至刻度，作為供試品溶液，備用。2.1.3蒽酮試劑的配制稱取蒽酮0.2g，濃硫酸溶解定容于100l容量瓶，用時新穎配制。2.1.4波長的選擇精細(xì)量取對照品溶液和供試品溶液各1l于具塞試管中，蒸餾水補至2l，置冰浴中，緩慢參加新穎配制的0.2%蒽酮試劑8l，搖勻，于沸水浴上加熱10in，迅速置冰浴中冷卻，在波長400～700n掃描，另取1l蒸餾水同法操作作參比。結(jié)果說明對照品和樣品均在585n波長處有最大紫外吸收。2.1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)汲取D-無水葡萄糖對照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4l置試管中，蒸餾水補至2l，緩慢參加新穎配制的0.2%蒽酮試劑8l，搖勻，于沸水浴上加熱10in，迅速置冰浴中冷卻，以首管作空白，于585n波長處測定吸收度，分別為0，0.176，0.331，0.479，0.655，0.797，0.938，1.088。以吸收度(A)為縱坐標(biāo)、D-無水葡萄糖濃度()為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=0.774+0.0158(R2=0.9991)，說明在32.48～327.36μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。2.1.6精細(xì)度實驗精細(xì)汲取對照品溶液1.0l，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法“2.1.4〞依法操作，在585n波長處連續(xù)測定6次，吸光度分別為0.797，0.798，0.797，0.797，0.797，0.797，吸光度的RSD為0.05%。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.1.7穩(wěn)定性實驗精細(xì)汲取同一供試品溶液1.0l，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法“蒸餾水補至2l起……〞依法操作，在585n波長處，每間隔10in測定一次吸收度，發(fā)如今2h后吸光度有變化，2h內(nèi)吸光度的RSD為0.16%，結(jié)果說明在120in內(nèi)穩(wěn)定性良好。樣品從冰浴中取出30～120in內(nèi)測定最正確。2.1.8重復(fù)性實驗精細(xì)汲取供試品溶液1.0l6份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法“2.1.4〞依法操作，在585n波長處，測定吸收度，結(jié)果吸收度的RSD為1.00%，說明方法的重現(xiàn)性良好。2.1.9加樣回收率實驗精細(xì)汲取含量為148.18g·g-1的供試品溶液0.50l，分別置具塞管中，并分別精細(xì)參加對照品溶液0.2，0.4，0.6l，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法“2.1.4〞依法操作，在585n波長處測定吸收度，計算得到平均回收率為100.40%，RSD為1.22%。結(jié)果見表1。表1加樣回收率實驗2.2浸膏得率的測定精細(xì)汲取儲藏液20.0l，水浴蒸干，105℃烘3h，取出置枯燥器內(nèi)冷卻30in，迅速稱重，計算。計算公式如下：浸膏得率(%)=干浸膏重量/藥材質(zhì)量×5×100%。2.3正交實驗根據(jù)預(yù)試驗的結(jié)果，將影響水提工藝的主要因素固液比、提取時間、浸泡時間、提取次數(shù)為考察因素，以多糖得率和干浸膏得率的綜和評分為考察指標(biāo)，每個因素選擇3個程度，按正交實驗設(shè)計表，進(jìn)展L9(34)優(yōu)化實驗，因素程度見表2，正交實驗結(jié)果見表3，方差分析見表4。表2因素程度表3正交實驗結(jié)果表4方差分析根據(jù)綜合評分的極差R值可以看出，影響因素的排序為ADB，綜合各因素的K值和直觀比擬，得出理論最正確工藝條件為A3D3B11;綜合評分的方差分析說明A、D影響非常顯著，P0.01，B因素影響顯著，P0.05，故最終確定的最適佳提取工藝為：加14倍量的水，浸泡30in，煎煮3次，30in/次。2.4最正確提取工藝驗證稱取粉碎過篩(10目)的黃精粉末5g3份，按正交實驗確定的最優(yōu)條件提取黃精，依“樣品的制備〞項下方法，制得貯備液和供試品溶液，分別測定浸膏得率和多糖含量，結(jié)果浸膏的平均得率為53.52%，多糖的平均含量為15.27%，多糖的含量優(yōu)于正交實驗中的任何一組，浸膏的得率較高，說明最正確提取工藝可行。3討論黃精的提取工藝有水提[5]、超聲提取[6]，我們在研究復(fù)方紅景天口含片的制備工藝時，對黃精的水提工藝進(jìn)展了系統(tǒng)研究，得到的最正確工藝經(jīng)過驗證其浸膏得率和黃精多糖含量都比擬高。通過比照試驗，我們選擇了蒽醌試劑作為顯色劑，其穩(wěn)定性相對較好，但是需新穎配制，時間過長，將影響顯色;在沸水浴中反響時間應(yīng)嚴(yán)格控制在10in，過短或過長也將影響多糖的含量測定。多糖沉淀時乙醇濃度和沉淀次數(shù)是影響多糖提取率的重要因素，在今后的實驗中應(yīng)重點加以考慮?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2022:215.[2]龐玉新,趙致,袁瑗,等.黃精的化學(xué)成分及藥理作用[J].山東農(nóng)業(yè)生物學(xué)報,2022,22(6):547.[3]張瑞林.中藥黃精的研究和開發(fā)利用處徑[J].渝州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2