植物組織培養(yǎng)課件

生物技術(shù)實踐植物組織培養(yǎng)1A生物技術(shù)實踐植物組織培養(yǎng)1A取一部分植物組織,在無菌的條件下接種在培養(yǎng)基上,給予一定的溫度和光照,使之產(chǎn)生愈傷組織,或進而生根發(fā)芽,培養(yǎng)為成熟植株的技術(shù)。一般不需要光2A取一部分植物組織,在無菌的條件下接種在培養(yǎng)基上,給予一定的溫(2)細胞分化：在植物的個體發(fā)育過程中，細胞在________、________和生理功能上出現(xiàn)_____________的過程。全能性形態(tài)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性差異1．植物組織培養(yǎng)的基本過程(1)理論基礎(chǔ)：植物細胞的__________。3A(2)細胞分化：在植物的個體發(fā)育過程中，細胞在全能性形態(tài)(3)基本過程①愈傷組織：由離體的植物組織或細胞經(jīng)

形成的一種

的活的薄壁細胞團組成的新生組織。②脫分化：又叫去分化，是由__________的植物組織或細胞產(chǎn)生__________的過程。③再分化：愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)，重新分化成________等器官的過程。脫分化相對沒有分化高度分化愈傷組織根或芽4A(3)基本過程①愈傷組織：由離體的植物組織或細胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)的條件無菌環(huán)境一定的溫度一定的光照含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基防止外植體帶菌、保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌、嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)程適時MS培養(yǎng)基適量空氣適合的PH植物激素比例合適適宜的外植體5A植物組織培養(yǎng)的條件無菌環(huán)境一定的溫度一定的光照含有全部營養(yǎng)成MS培養(yǎng)基配方表：由

、

和

三大成分組成大量元素微量元素有機成分其特點是無機鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細胞的營養(yǎng)和生理需要6AMS培養(yǎng)基配方表：由、MS培養(yǎng)基中各成分的作用成分作用微量和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓甘氨酸、維生素、煙酸、肌醇等滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求7AMS培養(yǎng)基中各成分的作用成分作用微量和大量元素提供植物細胞生植物激素和人工合成的植物激素天然植物激素植物激素類似物生長素萘乙酸（NAA）細胞分裂素芐基腺嘌呤（BA）植物中存在的天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內(nèi)作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應(yīng)分解它的酶，所以作用和存在的時間長，作用效果明顯。8A植物激素和人工合成的植物激素天然植物激素植物激素類似物生長素生長素和細胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的相互作用比例結(jié)果細胞分裂素濃度>生長素濃度細胞分裂素濃度=生長素濃度細胞分裂素濃度<生長素濃度誘導(dǎo)芽生成愈傷組織繼續(xù)生長而不分化誘導(dǎo)根生成9A生長素和細胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的相互作用比例結(jié)果細胞分裂2.萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解，芐基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L鹽酸溶解。也可配成母液冰箱中保存。3.發(fā)芽培養(yǎng)基：3000mLMS培養(yǎng)基+含

1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g瓊脂，再加蒸餾水至4000mL，混合均勻，加熱至瓊脂融化后，通過三角漏斗分裝至100mL三角瓶中，每瓶40mL，共100瓶。三角瓶加上封口膜后1kg

壓力下在滅菌鍋中滅菌20min。10A2.萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/L氫氧化鈉溶4.生根培養(yǎng)基：1000mLMS培養(yǎng)基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g瓊脂，再加蒸餾水至2000mL，混合均勻，加熱至瓊脂融化后，分裝至100mL的三角瓶中，每瓶40mL，共50瓶。滅菌操作同步驟3。三角瓶加上封口膜后1kg

壓力下在滅菌鍋中滅菌20min11A4.生根培養(yǎng)基：1000mLMS培養(yǎng)基+含0.38菊花組織培養(yǎng)操作步驟:12A菊花組織培養(yǎng)操作步驟:12A1、配制MS培養(yǎng)基⑴配制各種母液→配制培養(yǎng)基→滅菌⑵培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和有機成分組成在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素，因為其莖段培養(yǎng)比較容易13A1、配制MS培養(yǎng)基⑴配制各種母液→配制培養(yǎng)基→滅菌⑵培養(yǎng)基由2、外植體消毒若使用自然生長的莖進行組織培養(yǎng)，則可取一段莖在70%的乙醇中浸泡10分鐘，在放入5%的次氯酸鈉溶液中浸泡5分鐘，然后用另一次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘，最后在超凈臺中用無菌水沖洗，將莖的切段培養(yǎng)在生芽培養(yǎng)基中。外植體上殘留的雜菌會和外植體爭奪培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)，并且產(chǎn)生大量對外植體有害的物質(zhì)，導(dǎo)致外植體死亡，所以要先消毒再接種。一般選擇未開花植株的莖上部新萌發(fā)的側(cè)枝14A2、外植體消毒若使用自然生長的莖進行組織培養(yǎng)，則可取一段莖在3、接種⑴將已消毒的外植體插入培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)上端朝上。⑵在酒精燈旁，每個錐形瓶接種2-3外植體。注意事項：①注意無菌操作②注意別燙傷植物材料③注意植物材料插入方向15A3、接種⑴將已消毒的外植體插入培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)上端朝上。⑵在酒4、培養(yǎng)⑴在日光燈下保持18-25℃培養(yǎng)，每天的光照不少于14.5h⑵先生芽培養(yǎng)，然后再生根培養(yǎng)2～3周后將生長健壯的叢狀苗在無菌條件下一個個轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。注意事項：①無菌箱中培養(yǎng)并定期消毒②如果培養(yǎng)順序顛倒，則不容易誘導(dǎo)芽的形成③一般情況下，愈傷組織形成不需要光，試管苗形成后需要見光培養(yǎng)16A4、培養(yǎng)⑴在日光燈下保持18-25℃培養(yǎng)，每天的光照不少于16、定植苗健壯后移至土中培養(yǎng)（定植），即可長成植株并開花。5、移栽鍛煉將生根的苗從錐形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上的濕度，2-3天后打開玻璃罩逐漸降低濕度進行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度為止。17A6、定植苗健壯后移至土中培養(yǎng)（定植），即可長成植株并開花。5例題：右圖是實驗室進行植物組織培養(yǎng)的一般過程。請回答下列問題：

⑴下列設(shè)備及用品中,該實驗無需使用的是

.A．酒精燈B．滅菌鍋C．封口膜D．玻璃刮刀⑵培養(yǎng)過程中涉及的培養(yǎng)基有:

培養(yǎng)基、

培養(yǎng)基、

培養(yǎng)基。與微生物培養(yǎng)基相比,植物組織培養(yǎng)一般要添加

、

作為生長調(diào)節(jié)劑。⑶離體組織接種后脫分化形成

,在不同配比激素的誘導(dǎo)下,依次經(jīng)歷

和生根苗兩個階段,形成試管苗。定植前還需要將試管苗移栽至草炭土或

中繼續(xù)培養(yǎng),其目的是

。⑷下表所列該實驗設(shè)備、用品及材料與其滅菌或消毒方法的對應(yīng)關(guān)系中,錯誤的是

。三角瓶高壓蒸汽滅菌B.培養(yǎng)基G6玻璃砂漏斗過濾C.超凈臺紫外燈照射D.外植體70%酒精和5%次氯酸鈉先后浸泡DMS發(fā)芽生根NAABA愈傷組織從狀苗蛭石濕度鍛煉/煉苗(適應(yīng)土壤種植)B18A例題：右圖是實驗室進行植物組織培養(yǎng)的一般過程。請回答下列問題[判一判]⑴實驗過程中先使莖段生根,再使生根苗長葉⑵脫分化和再分化過程中都需要植物激素發(fā)揮作用

⑶因植物細胞都具有全能性,故菊花組織培養(yǎng)實驗中選材不會影響實驗結(jié)果⑷野生菊花苗段在接種前要用酒精和次氯酸鈉溶液進行消毒,再用自然水清洗。19A[判一判]19A1、概念：取一部分植物組織，在

的條件下接種在培養(yǎng)基上，給予一定的

和

，使之產(chǎn)生

，或進而生根發(fā)芽，培養(yǎng)為成熟植株的技術(shù)。2、原理：

。植物組織培養(yǎng)技術(shù)無菌溫度光照愈傷組織植物細胞的全能性20A1、概念：植物組織培養(yǎng)技術(shù)無菌溫度光照愈傷組織植物細胞的全能3、培養(yǎng)基⑴MS培養(yǎng)基：由

、

和

組成。可將各成分分別配成濃度為配方的5～10倍的

，用時稀釋⑵發(fā)芽培養(yǎng)基：由MS培養(yǎng)基、

溶液、

溶液、蔗糖和瓊脂，再加水混合均勻。用

法滅菌后待用⑶生根培養(yǎng)基：由MS培養(yǎng)基、

溶液、蔗糖、瓊脂和水混合⑷培養(yǎng)基中植物激素的配比與細胞的分化：大量元素微量元素有機成分母液BANAA高壓蒸汽滅菌比例結(jié)果細胞分裂素濃度>生長素濃度細胞分裂素濃度=生長素濃度細胞分裂素濃度<生長素濃度誘導(dǎo)根的形成誘導(dǎo)芽的形成愈傷組織不分化NAA21A3、培養(yǎng)基大量元素微量元素有機成分母液BANAA高壓蒸汽滅菌菊花組織培養(yǎng)操作步驟:制備離體植物組織接種

培養(yǎng)

培養(yǎng)

移栽和定植取無菌培養(yǎng)的菊花幼苗用無菌鑷子和無菌解剖刀切成幾段,或取自然生長的莖充分

,用

清洗后,切成幾段,每段至少有

張葉片

在

旁,將切取的莖段接種到

培養(yǎng)基中,蓋上

。

在日光燈下保持18~25℃的溫度培養(yǎng),每天

不少于14.5h,培養(yǎng)(2~3周后)至長出

在

條件下,將叢狀苗轉(zhuǎn)入

培養(yǎng)基中,在適宜條件下繼續(xù)培養(yǎng)

待生根后,將苗移至

中,逐漸降低

進行

。最后轉(zhuǎn)移至土中培養(yǎng)(

)

消毒無菌水1酒精燈火焰生芽封口膜生芽光照叢狀苗生根無菌生根草炭土或蛭石濕度鍛煉定植22A菊花組織培養(yǎng)操作步驟:制備離體取無菌培養(yǎng)的菊花幼苗用無菌鑷子菊花組織培養(yǎng)理論依據(jù)基本過程培養(yǎng)基影響因素選材（細胞類型）幼苗處理自然生長莖段消毒植物細胞全能性MS培養(yǎng)基、生根、生芽培養(yǎng)基材料種類、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照體細胞降低濕度鍛煉70%乙醇、5%次氯酸鈉浸泡，無菌水沖洗23A菊花組織培養(yǎng)理論依據(jù)基本過程培養(yǎng)基影響因素選材（細胞類型）幼此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環(huán)境為液體有機物營養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個植物體的光能自養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細胞到一個個體的演變過程1、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過程中還需要提供有機物培養(yǎng)基？2、培養(yǎng)過程中為什么需要進行光照思考:24A此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環(huán)境為液體有機物營養(yǎng)⑴培養(yǎng)基的滅菌；（

）⑵外植體的消毒；（

）⑶接種的無菌操作；（

）⑷無菌箱中的培養(yǎng)；（

）⑸移栽到草炭土或蛭石中進行濕度鍛煉。（

）1、在整個植物組培的操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？高壓蒸汽滅菌酒精、次氯酸鈉超凈臺酒精燈火焰旁無菌箱定期消毒生存環(huán)境消毒思考:25A⑴培養(yǎng)基的滅菌；（1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑26A1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶

植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，含有植物生長發(fā)育所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，這些營養(yǎng)物質(zhì)同樣為細菌等微小的生物提供了適合的營養(yǎng)。在這種培養(yǎng)基上，細菌等微小的生物比植物細胞具有更強的新陳代謝能力，它們比植物細胞生長、繁殖得更快，而且它們會產(chǎn)生毒素，使培養(yǎng)的植物細胞很快中毒死亡。因此，植物組織培養(yǎng)要想取得成功，必須有效地防止細菌等的污染，保證培養(yǎng)材料、培養(yǎng)基、培養(yǎng)用具完全無菌。為了達到這一要求，就要在植物組織培養(yǎng)過程中進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。27A植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，含有植物生長發(fā)育所需要生長素／細胞分裂素比值結(jié)果比值高時 比值低時含量少且比值適中2、激素的用量比例對細胞分裂和分化的影響促根分化，抑芽形成促芽分化，抑根形成促進愈傷組織生長植物組織培養(yǎng)時，使用人工合成的激素，還是植物中存在的天然激素？為什么？人工合成的激素，原因：植物中存在的天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內(nèi)作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應(yīng)分解它的酶，所以作用和存在的時間長，作用效果明顯。28A生長素／細胞分裂素比值結(jié)果比值高時 比值低時含量少且比值適【典例】辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領(lǐng)域。辣椒素的獲得途徑如圖。⑴圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細胞的

和

過程。⑵圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是

。培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素用量的比值

(選填“高”或“低”)時,有利于芽的分化。對培養(yǎng)基徹底滅菌時,應(yīng)采取的滅菌方法是

。⑶圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是

，除此以外，還需用到

。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時,常用的酶是纖維素酶和

。脫分化再分化瓊脂低高壓蒸汽滅菌70%果膠酶5%次氯酸鈉溶液29A【典例】辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領(lǐng)域2、下面是寧夏農(nóng)林科學(xué)院進行蘋果試管苗培養(yǎng)的一般過程:⑴請?zhí)顚慳～c所表示的內(nèi)容。a.

；b.

；c.

。⑵實驗室一般使用保存的培養(yǎng)基母液來制備MS固體培養(yǎng)基,配制母液時,

、

和有機物要濃縮5～10倍。⑶該過程中a、c的啟動關(guān)鍵在于培養(yǎng)基中所加

和

的濃度配比。⑷離體的植物細胞能發(fā)育成完整植株的原因是

。⑸醋桿菌是生產(chǎn)蘋果醋必用的菌種,可以從食醋中分離得到純化的醋桿菌。擴大培養(yǎng)醋桿菌時,一般采用平板倒置培養(yǎng),原因是

。脫分化愈傷組織再分化大量元素微量元素生長素細胞分裂素植物細胞具有全能性防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染30A2、下面是寧夏農(nóng)林科學(xué)院進行蘋果試管苗培養(yǎng)的一般過程:⑴請?zhí)?、為了探究6--BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某研究小組在MS培養(yǎng)基中加入6--BA和IAA，配制成四種培養(yǎng)基(見下表)，滅菌后分別接種數(shù)量相同、生長狀態(tài)一致、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計再生叢芽外植體的比率(m)，以及再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)，結(jié)果如下表。培養(yǎng)基編號濃度/mg·L－1m/%n/個6-BAIAA10.5076.73.120.177.46.130.266.75.340.560.05.0回答下列問題：⑴按照植物的需求量，培養(yǎng)基中無機鹽的元素可分為________和__________兩類。上述培養(yǎng)基中，6-B-A屬于___________類生長調(diào)節(jié)劑。⑵在該實驗中，自變量是___________，因變量是________________________，⑶從實驗結(jié)果可知，誘導(dǎo)叢芽總數(shù)最少的培養(yǎng)基是________號培養(yǎng)基。⑷為了誘導(dǎo)該菊花試管苗生根，培養(yǎng)基中一般不加入________(填“6--BA”或“IAA”)。大量元素微量元素細胞分裂素IAA的濃度菊花再生叢芽外植體的比率和外植體上的叢芽平均數(shù)16--BA31A3、為了探究6--BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽⑴制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用無菌蒸餾水稀釋后，再用____________蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。下圖所示的劃線分離操作，正確的是________。接種環(huán)B2017/4回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關(guān)的問題：⑵泡菜腌制過程中，會產(chǎn)生有機酸、醇類和亞硝酸鹽，其中醇類是由_____________進行厭氧呼吸產(chǎn)生。亞硝酸鹽對人體有害，為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取要硝酸鹽，與___________________發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。然后用光程為1cm的____________，在550nm光波下測定光密度值，與由一定濃度梯度亞硝酸鈉制作的_________________比對，計算樣品中亞硝酸鹽的含量。⑶已知乳酸菌中的亞硝酸還原酶能降解亞硝酸鹽。在一定的腌制時間內(nèi)，隨著腌制時間的延長，泡菜中亞硝酸鹽含量逐漸降低，是由于在厭氧和_____________環(huán)境下亞硝酸鹽被亞硝酸還原酶降解。假絲酵母對氨基苯磺酸比色杯標(biāo)準曲線酸性32A⑴制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶果膠酶細胞破裂，細胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速獲得營養(yǎng)物質(zhì)喜好氧的不耐酸涂布分離稀釋酸堿指示劑乙醇2020/133A果膠酶細胞破裂，細胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速獲得營養(yǎng)物質(zhì)喜腐爛的水果中含產(chǎn)果膠酶的微生物較多涂布分離（或劃線分離）水果組織軟化疏松及細胞受損95%乙醇提高果膠酶的穩(wěn)定性固定化的方法固定化所用的介質(zhì)2019/434A腐爛的水果中含產(chǎn)果膠酶的微生物較多涂布分離（或劃線分離）水果達到設(shè)定的溫度或壓力值抽濾將淀粉分解成糖?作為碳源C水解圈直徑與菌落直徑上清液2018/1135A達到設(shè)定的溫度或壓力值抽濾將淀粉分解成糖?作為碳源C水解圈直2018/4回答與果膠、淀粉等提取和利用有關(guān)的問題：某植物富含果膠、淀粉、蛋白質(zhì)和纖維素成分。某小組開展了該植物綜合利用的研究。⑴果膠提取工藝研究結(jié)果表明，原料先經(jīng)過一段時間沸水漂洗的果膠得率（提取得到的果膠占原料質(zhì)量的百分率）顯著高于常溫水漂洗的果膠得率，最主要原因是沸水漂洗_______（A．有助于清洗雜質(zhì)和去除可溶性糖

B．使植物組織變得松散

C．使有關(guān)酶失活

D．有利細胞破裂和原料粉碎制漿）。⑵在淀粉分離生產(chǎn)工藝研究中，為促進淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝劑（乳酸菌菌液），其菌株起重要作用。為了消除絮凝劑中的雜菌，通常將生產(chǎn)上使用的菌液，采用_____________________________，進行單菌落分離，然后將其_____________，并進行特性鑒定，篩選得到純的菌株。⑶在用以上提取過果膠和淀粉后的剩渣加工飲料工藝研究中，將剩渣制成的汁液經(jīng)蛋白酶和纖維素酶徹底酶解處理后，發(fā)現(xiàn)仍存在渾濁和沉淀問題．可添加__________________使果膠徹底分解成半乳糖醛酸，再添加_______________，以解決汁液渾濁和沉淀問題。⑷在建立和優(yōu)化固定化酶反應(yīng)器連續(xù)生產(chǎn)工藝研究中，通常要分析汁液中各種成分的濃度和所用酶的活性，然后主要優(yōu)化各固定化酶反應(yīng)器中的_____________________（答出2點即可）、反應(yīng)液pH和酶反應(yīng)時間等因素。其中，酶反應(yīng)時間可通過_______來調(diào)節(jié)。C劃線分離法（或涂布分離法）擴大培養(yǎng)果膠酶和果膠甲酯酶淀粉酶使淀粉水解固定化酶的量、反應(yīng)液溫度控制反應(yīng)器液體流速36A2018/4回答與果膠、淀粉等提取和利用有關(guān)的問題：某植物富2017\11浙江生物選考：回答與釀酒和制醋有關(guān)的問題:⑴為了獲得優(yōu)良的釀酒紅曲霉菌株，將原菌株的孢子誘變處理后制成較稀濃度的單孢子懸液，這樣做的目的是在培養(yǎng)時有利于獲得_________。⑵大米經(jīng)蒸煮、紅曲霉菌糖化后，用某念舊酵母進行酒精發(fā)酵，發(fā)酵完畢后得到新鮮紅曲酒，酒中乙醇濃度不超過15%。其主要原因是當(dāng)發(fā)酵液中的乙醇濃度接近15%時，__________(A.乙醇氧化逐漸增強直至平衡

B.葡萄糖分解逐漸增強直至平衡

C.乙醇氧化逐漸減弱直至停止

D.葡萄糖分解逐漸減弱直至停止)。⑶已知葡萄糖與蒽酮試劑反應(yīng)能產(chǎn)生顏色，采用光電比色法測定紅曲酒中的葡萄糖含量的步驟如下：第一步，標(biāo)準曲線的制作。用蒸餾水配置_______________________________，與蒽酮試劑反應(yīng)后，用比色計測定，并制作以____________________________的標(biāo)準曲線。第二步，樣品處理。將待測酒樣品通過活性炭脫色，其目的是_________________________。第三步，樣品測定與計算。⑷影響紅曲酒風(fēng)味的主要因素,除了溫度、pH、氧氣等環(huán)境因素外,還有__________(答出2點即可)。⑸在紅曲醋生產(chǎn)工藝中,將適量的紅曲酒、水、醋化醋桿菌等混合。再添加一定量谷殼糠等制成松散的發(fā)酵料，其目的是________________，以利于醋酸發(fā)酵。單菌落C一系列濃度的葡萄糖標(biāo)準溶液葡萄糖濃度與光密度值關(guān)系排除原有顏色的干擾不同的菌株、不同的原料增加通氣性37A2017\11浙江生物選考：回答與釀酒和制醋有關(guān)的問題:單菌4、下面是果酒和果醋制作的實驗流程和某同學(xué)設(shè)計的果酒和果醋的發(fā)酵裝置。根據(jù)圖示回答下列問題：⑴完成圖1中的實驗流程。⑵沖洗的主要目的是____________，沖洗應(yīng)特別注意不能____________，以防止菌種的流失。⑶圖2裝置中的充氣口在___________時關(guān)閉，在_____________時連接充氣泵，并連續(xù)不斷地向內(nèi)_____________________。⑷排氣口在果酒發(fā)酵時排出的氣體是由__________產(chǎn)生的____________。⑸若在果汁中就含有醋桿菌，在果酒發(fā)酵旺盛時，醋桿菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸？說明原因。醋酸發(fā)酵洗去浮塵反復(fù)沖洗果酒發(fā)酵果醋發(fā)酵泵入無菌空氣(氧)酵母菌CO2

不能。因為醋桿菌發(fā)酵的條件是氧氣充足，果酒發(fā)酵時的缺氧環(huán)境能抑制醋桿菌生長。38A4、下面是果酒和果醋制作的實驗流程和某同學(xué)設(shè)計的果酒和果醋的生物技術(shù)實踐植物組織培養(yǎng)39A生物技術(shù)實踐植物組織培養(yǎng)1A取一部分植物組織,在無菌的條件下接種在培養(yǎng)基上,給予一定的溫度和光照,使之產(chǎn)生愈傷組織,或進而生根發(fā)芽,培養(yǎng)為成熟植株的技術(shù)。一般不需要光40A取一部分植物組織,在無菌的條件下接種在培養(yǎng)基上,給予一定的溫(2)細胞分化：在植物的個體發(fā)育過程中，細胞在________、________和生理功能上出現(xiàn)_____________的過程。全能性形態(tài)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性差異1．植物組織培養(yǎng)的基本過程(1)理論基礎(chǔ)：植物細胞的__________。41A(2)細胞分化：在植物的個體發(fā)育過程中，細胞在全能性形態(tài)(3)基本過程①愈傷組織：由離體的植物組織或細胞經(jīng)

形成的一種

的活的薄壁細胞團組成的新生組織。②脫分化：又叫去分化，是由__________的植物組織或細胞產(chǎn)生__________的過程。③再分化：愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)，重新分化成________等器官的過程。脫分化相對沒有分化高度分化愈傷組織根或芽42A(3)基本過程①愈傷組織：由離體的植物組織或細胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)的條件無菌環(huán)境一定的溫度一定的光照含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基防止外植體帶菌、保證培養(yǎng)基及接種器具徹底滅菌、嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)程適時MS培養(yǎng)基適量空氣適合的PH植物激素比例合適適宜的外植體43A植物組織培養(yǎng)的條件無菌環(huán)境一定的溫度一定的光照含有全部營養(yǎng)成MS培養(yǎng)基配方表：由

、

和

三大成分組成大量元素微量元素有機成分其特點是無機鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細胞的營養(yǎng)和生理需要44AMS培養(yǎng)基配方表：由、MS培養(yǎng)基中各成分的作用成分作用微量和大量元素提供植物細胞生活所必需的無機鹽蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓甘氨酸、維生素、煙酸、肌醇等滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求45AMS培養(yǎng)基中各成分的作用成分作用微量和大量元素提供植物細胞生植物激素和人工合成的植物激素天然植物激素植物激素類似物生長素萘乙酸（NAA）細胞分裂素芐基腺嘌呤（BA）植物中存在的天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內(nèi)作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應(yīng)分解它的酶，所以作用和存在的時間長，作用效果明顯。46A植物激素和人工合成的植物激素天然植物激素植物激素類似物生長素生長素和細胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的相互作用比例結(jié)果細胞分裂素濃度>生長素濃度細胞分裂素濃度=生長素濃度細胞分裂素濃度<生長素濃度誘導(dǎo)芽生成愈傷組織繼續(xù)生長而不分化誘導(dǎo)根生成47A生長素和細胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的相互作用比例結(jié)果細胞分裂2.萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解，芐基腺嘌呤(BA)需用少量0.1mol/L鹽酸溶解。也可配成母液冰箱中保存。3.發(fā)芽培養(yǎng)基：3000mLMS培養(yǎng)基+含

1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g瓊脂，再加蒸餾水至4000mL，混合均勻，加熱至瓊脂融化后，通過三角漏斗分裝至100mL三角瓶中，每瓶40mL，共100瓶。三角瓶加上封口膜后1kg

壓力下在滅菌鍋中滅菌20min。48A2.萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/L氫氧化鈉溶4.生根培養(yǎng)基：1000mLMS培養(yǎng)基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g瓊脂，再加蒸餾水至2000mL，混合均勻，加熱至瓊脂融化后，分裝至100mL的三角瓶中，每瓶40mL，共50瓶。滅菌操作同步驟3。三角瓶加上封口膜后1kg

壓力下在滅菌鍋中滅菌20min49A4.生根培養(yǎng)基：1000mLMS培養(yǎng)基+含0.38菊花組織培養(yǎng)操作步驟:50A菊花組織培養(yǎng)操作步驟:12A1、配制MS培養(yǎng)基⑴配制各種母液→配制培養(yǎng)基→滅菌⑵培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和有機成分組成在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素，因為其莖段培養(yǎng)比較容易51A1、配制MS培養(yǎng)基⑴配制各種母液→配制培養(yǎng)基→滅菌⑵培養(yǎng)基由2、外植體消毒若使用自然生長的莖進行組織培養(yǎng)，則可取一段莖在70%的乙醇中浸泡10分鐘，在放入5%的次氯酸鈉溶液中浸泡5分鐘，然后用另一次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘，最后在超凈臺中用無菌水沖洗，將莖的切段培養(yǎng)在生芽培養(yǎng)基中。外植體上殘留的雜菌會和外植體爭奪培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)，并且產(chǎn)生大量對外植體有害的物質(zhì)，導(dǎo)致外植體死亡，所以要先消毒再接種。一般選擇未開花植株的莖上部新萌發(fā)的側(cè)枝52A2、外植體消毒若使用自然生長的莖進行組織培養(yǎng)，則可取一段莖在3、接種⑴將已消毒的外植體插入培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)上端朝上。⑵在酒精燈旁，每個錐形瓶接種2-3外植體。注意事項：①注意無菌操作②注意別燙傷植物材料③注意植物材料插入方向53A3、接種⑴將已消毒的外植體插入培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)上端朝上。⑵在酒4、培養(yǎng)⑴在日光燈下保持18-25℃培養(yǎng)，每天的光照不少于14.5h⑵先生芽培養(yǎng)，然后再生根培養(yǎng)2～3周后將生長健壯的叢狀苗在無菌條件下一個個轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)。注意事項：①無菌箱中培養(yǎng)并定期消毒②如果培養(yǎng)順序顛倒，則不容易誘導(dǎo)芽的形成③一般情況下，愈傷組織形成不需要光，試管苗形成后需要見光培養(yǎng)54A4、培養(yǎng)⑴在日光燈下保持18-25℃培養(yǎng)，每天的光照不少于16、定植苗健壯后移至土中培養(yǎng)（定植），即可長成植株并開花。5、移栽鍛煉將生根的苗從錐形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持80%以上的濕度，2-3天后打開玻璃罩逐漸降低濕度進行鍛煉，直到將罩全部打開處于自然濕度為止。55A6、定植苗健壯后移至土中培養(yǎng)（定植），即可長成植株并開花。5例題：右圖是實驗室進行植物組織培養(yǎng)的一般過程。請回答下列問題：

⑴下列設(shè)備及用品中,該實驗無需使用的是

.A．酒精燈B．滅菌鍋C．封口膜D．玻璃刮刀⑵培養(yǎng)過程中涉及的培養(yǎng)基有:

培養(yǎng)基、

培養(yǎng)基、

培養(yǎng)基。與微生物培養(yǎng)基相比,植物組織培養(yǎng)一般要添加

、

作為生長調(diào)節(jié)劑。⑶離體組織接種后脫分化形成

,在不同配比激素的誘導(dǎo)下,依次經(jīng)歷

和生根苗兩個階段,形成試管苗。定植前還需要將試管苗移栽至草炭土或

中繼續(xù)培養(yǎng),其目的是

。⑷下表所列該實驗設(shè)備、用品及材料與其滅菌或消毒方法的對應(yīng)關(guān)系中,錯誤的是

。三角瓶高壓蒸汽滅菌B.培養(yǎng)基G6玻璃砂漏斗過濾C.超凈臺紫外燈照射D.外植體70%酒精和5%次氯酸鈉先后浸泡DMS發(fā)芽生根NAABA愈傷組織從狀苗蛭石濕度鍛煉/煉苗(適應(yīng)土壤種植)B56A例題：右圖是實驗室進行植物組織培養(yǎng)的一般過程。請回答下列問題[判一判]⑴實驗過程中先使莖段生根,再使生根苗長葉⑵脫分化和再分化過程中都需要植物激素發(fā)揮作用

⑶因植物細胞都具有全能性,故菊花組織培養(yǎng)實驗中選材不會影響實驗結(jié)果⑷野生菊花苗段在接種前要用酒精和次氯酸鈉溶液進行消毒,再用自然水清洗。57A[判一判]19A1、概念：取一部分植物組織，在

的條件下接種在培養(yǎng)基上，給予一定的

和

，使之產(chǎn)生

，或進而生根發(fā)芽，培養(yǎng)為成熟植株的技術(shù)。2、原理：

。植物組織培養(yǎng)技術(shù)無菌溫度光照愈傷組織植物細胞的全能性58A1、概念：植物組織培養(yǎng)技術(shù)無菌溫度光照愈傷組織植物細胞的全能3、培養(yǎng)基⑴MS培養(yǎng)基：由

、

和

組成?？蓪⒏鞒煞址謩e配成濃度為配方的5～10倍的

，用時稀釋⑵發(fā)芽培養(yǎng)基：由MS培養(yǎng)基、

溶液、

溶液、蔗糖和瓊脂，再加水混合均勻。用

法滅菌后待用⑶生根培養(yǎng)基：由MS培養(yǎng)基、

溶液、蔗糖、瓊脂和水混合⑷培養(yǎng)基中植物激素的配比與細胞的分化：大量元素微量元素有機成分母液BANAA高壓蒸汽滅菌比例結(jié)果細胞分裂素濃度>生長素濃度細胞分裂素濃度=生長素濃度細胞分裂素濃度<生長素濃度誘導(dǎo)根的形成誘導(dǎo)芽的形成愈傷組織不分化NAA59A3、培養(yǎng)基大量元素微量元素有機成分母液BANAA高壓蒸汽滅菌菊花組織培養(yǎng)操作步驟:制備離體植物組織接種

培養(yǎng)

培養(yǎng)

移栽和定植取無菌培養(yǎng)的菊花幼苗用無菌鑷子和無菌解剖刀切成幾段,或取自然生長的莖充分

,用

清洗后,切成幾段,每段至少有

張葉片

在

旁,將切取的莖段接種到

培養(yǎng)基中,蓋上

。

在日光燈下保持18~25℃的溫度培養(yǎng),每天

不少于14.5h,培養(yǎng)(2~3周后)至長出

在

條件下,將叢狀苗轉(zhuǎn)入

培養(yǎng)基中,在適宜條件下繼續(xù)培養(yǎng)

待生根后,將苗移至

中,逐漸降低

進行

。最后轉(zhuǎn)移至土中培養(yǎng)(

)

消毒無菌水1酒精燈火焰生芽封口膜生芽光照叢狀苗生根無菌生根草炭土或蛭石濕度鍛煉定植60A菊花組織培養(yǎng)操作步驟:制備離體取無菌培養(yǎng)的菊花幼苗用無菌鑷子菊花組織培養(yǎng)理論依據(jù)基本過程培養(yǎng)基影響因素選材（細胞類型）幼苗處理自然生長莖段消毒植物細胞全能性MS培養(yǎng)基、生根、生芽培養(yǎng)基材料種類、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照體細胞降低濕度鍛煉70%乙醇、5%次氯酸鈉浸泡，無菌水沖洗61A菊花組織培養(yǎng)理論依據(jù)基本過程培養(yǎng)基影響因素選材（細胞類型）幼此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環(huán)境為液體有機物營養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個植物體的光能自養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細胞到一個個體的演變過程1、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過程中還需要提供有機物培養(yǎng)基？2、培養(yǎng)過程中為什么需要進行光照思考:62A此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環(huán)境為液體有機物營養(yǎng)⑴培養(yǎng)基的滅菌；（

）⑵外植體的消毒；（

）⑶接種的無菌操作；（

）⑷無菌箱中的培養(yǎng)；（

）⑸移栽到草炭土或蛭石中進行濕度鍛煉。（

）1、在整個植物組培的操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？高壓蒸汽滅菌酒精、次氯酸鈉超凈臺酒精燈火焰旁無菌箱定期消毒生存環(huán)境消毒思考:63A⑴培養(yǎng)基的滅菌；（1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔污染途徑64A1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶

植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，含有植物生長發(fā)育所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，這些營養(yǎng)物質(zhì)同樣為細菌等微小的生物提供了適合的營養(yǎng)。在這種培養(yǎng)基上，細菌等微小的生物比植物細胞具有更強的新陳代謝能力，它們比植物細胞生長、繁殖得更快，而且它們會產(chǎn)生毒素，使培養(yǎng)的植物細胞很快中毒死亡。因此，植物組織培養(yǎng)要想取得成功，必須有效地防止細菌等的污染，保證培養(yǎng)材料、培養(yǎng)基、培養(yǎng)用具完全無菌。為了達到這一要求，就要在植物組織培養(yǎng)過程中進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。65A植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，含有植物生長發(fā)育所需要生長素／細胞分裂素比值結(jié)果比值高時 比值低時含量少且比值適中2、激素的用量比例對細胞分裂和分化的影響促根分化，抑芽形成促芽分化，抑根形成促進愈傷組織生長植物組織培養(yǎng)時，使用人工合成的激素，還是植物中存在的天然激素？為什么？人工合成的激素，原因：植物中存在的天然激素都有相應(yīng)的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內(nèi)作用和存在的時間就較短，而人工合成的激素在植物中沒有相應(yīng)分解它的酶，所以作用和存在的時間長，作用效果明顯。66A生長素／細胞分裂素比值結(jié)果比值高時 比值低時含量少且比值適【典例】辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領(lǐng)域。辣椒素的獲得途徑如圖。⑴圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細胞的

和

過程。⑵圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是

。培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素用量的比值

(選填“高”或“低”)時,有利于芽的分化。對培養(yǎng)基徹底滅菌時,應(yīng)采取的滅菌方法是

。⑶圖中外植體的消毒所需酒精的體積分數(shù)是

，除此以外，還需用到

。用酶解法將愈傷組織分離成單細胞時,常用的酶是纖維素酶和

。脫分化再分化瓊脂低高壓蒸汽滅菌70%果膠酶5%次氯酸鈉溶液67A【典例】辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領(lǐng)域2、下面是寧夏農(nóng)林科學(xué)院進行蘋果試管苗培養(yǎng)的一般過程:⑴請?zhí)顚慳～c所表示的內(nèi)容。a.

；b.

；c.

。⑵實驗室一般使用保存的培養(yǎng)基母液來制備MS固體培養(yǎng)基,配制母液時,

、

和有機物要濃縮5～10倍。⑶該過程中a、c的啟動關(guān)鍵在于培養(yǎng)基中所加

和

的濃度配比。⑷離體的植物細胞能發(fā)育成完整植株的原因是

。⑸醋桿菌是生產(chǎn)蘋果醋必用的菌種,可以從食醋中分離得到純化的醋桿菌。擴大培養(yǎng)醋桿菌時,一般采用平板倒置培養(yǎng),原因是

。脫分化愈傷組織再分化大量元素微量元素生長素細胞分裂素植物細胞具有全能性防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染68A2、下面是寧夏農(nóng)林科學(xué)院進行蘋果試管苗培養(yǎng)的一般過程:⑴請?zhí)?、為了探究6--BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某研究小組在MS培養(yǎng)基中加入6--BA和IAA，配制成四種培養(yǎng)基(見下表)，滅菌后分別接種數(shù)量相同、生長狀態(tài)一致、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，統(tǒng)計再生叢芽外植體的比率(m)，以及再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)，結(jié)果如下表。培養(yǎng)基編號濃度/mg·L－1m/%n/個6-BAIAA10.5076.73.120.177.46.130.266.75.340.560.05.0回答下列問題：⑴按照植物的需求量，培養(yǎng)基中無機鹽的元素可分為________和__________兩類。上述培養(yǎng)基中，6-B-A屬于___________類生長調(diào)節(jié)劑。⑵在該實驗中，自變量是___________，因變量是________________________，⑶從實驗結(jié)果可知，誘導(dǎo)叢芽總數(shù)最少的培養(yǎng)基是________號培養(yǎng)基。⑷為了誘導(dǎo)該菊花試管苗生根，培養(yǎng)基中一般不加入________(填“6--BA”或“IAA”)。大量元素微量元素細胞分裂素IAA的濃度菊花再生叢芽外植體的比率和外植體上的叢芽平均數(shù)16--BA69A3、為了探究6--BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽⑴制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用無菌蒸餾水稀釋后，再用____________蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。下圖所示的劃線分離操作，正確的是________。接種環(huán)B2017/4回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關(guān)的問題：⑵泡菜腌制過程中，會產(chǎn)生有機酸、醇類和亞硝酸鹽，其中醇類是由_____________進行厭氧呼吸產(chǎn)生。亞硝酸鹽對人體有害，為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取要硝酸鹽，與___________________發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。然后用光程為1cm的____________，在550nm光波下測定光密度值，與由一定濃度梯度亞硝酸鈉制作的_________________比對，計算樣品中亞硝酸鹽的含量。⑶已知乳酸菌中的亞硝酸還原酶能降解亞硝酸鹽。在一定的腌制時間內(nèi)，隨著腌制時間的延長，泡菜中亞硝酸鹽含量逐漸降低，是由于在厭氧和_____________環(huán)境下亞硝酸鹽被亞硝酸還原酶降解。假絲酵母對氨基苯磺酸比色杯標(biāo)準曲線酸性70A⑴制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶果膠酶細胞破裂，細胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速獲得營養(yǎng)物質(zhì)喜好氧的不耐酸涂布分離稀釋酸堿指示劑乙醇2020/171A果膠酶細胞破裂，細胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速獲得營養(yǎng)物質(zhì)喜腐爛的水果中含產(chǎn)果膠酶的微生物較多涂布分離（或劃線分離）水果組織軟化疏松及細胞受損