Agilent1200型高效液相色譜儀操作手冊

Agilent1200LC現(xiàn)場培訓(xùn)教材安捷倫科技有限公司生命科學(xué)與化學(xué)分析儀器部、培訓(xùn)目的：?基本了解1200LC硬件操作。?掌握化學(xué)工作站的開機(jī)，關(guān)機(jī)，參數(shù)設(shè)定會數(shù)據(jù)采集數(shù)據(jù)分析的基本操作。、培訓(xùn)準(zhǔn)備：1、儀器設(shè)備Agilent1200LCG1310A:單元泵）；G1312AU元泵）；G1311A四元泵）。G1313AC標(biāo)準(zhǔn)型自動進(jìn)樣器。）G1316AC柱溫箱）G1314A（VWD檢測器'G1362AC示差檢測器〉?色譜柱：EclipseXDB-C18150x4.6mm,5umcolumnP/N993967-9022、溶劑準(zhǔn)備：色譜級純或優(yōu)級純乙月青或甲醇。二次蒸餾水基本操作步驟（一）、開機(jī):1、么打開計算機(jī)進(jìn)入中文WindowsXP畫面并運(yùn)行CAGBootp1、么打開1200LC各模塊電源。待各模塊自檢完成后，雙擊“strument1Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動與200LC通訊，進(jìn)入的工作站畫面如下所示。■■?-氐行控甲，?玉，|"以，，，■■?-氐行控甲，?玉，|"以，，，mI俱-1:.I；.WIf.lO￡，，4.1，：俗＞At111..1In*~|pfrT：才話”|星]旅小呼和s序如||°^*^||°^||2SC6||uaBBlir^lMlF^IIM]I些fFFU'旬尋口以5immiEI么從'視圖”菜單中選擇方法和運(yùn)行控制畫面點(diǎn)擊'視圖”菜單中的顯示頂部工具欄，”“顯示狀態(tài)工具欄，“系統(tǒng)視圖'，“樣品視圖，使其命令前有“"”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。5、把流動相放入溶劑瓶中。&打開沖洗閥。7、點(diǎn)擊'泵”圖標(biāo)，點(diǎn)擊設(shè)置泵…”選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。8、設(shè)流速:5ml/min點(diǎn)擊'確定”。9、點(diǎn)擊束”圖標(biāo)，點(diǎn)擊控制…”選項(xiàng)，選中啟動”，點(diǎn)擊'確定”，則系統(tǒng)開始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。1（、點(diǎn)擊，泵”圖標(biāo)，點(diǎn)擊控制…”選項(xiàng)，選中關(guān)閉”，點(diǎn)擊'確定”關(guān)泵，關(guān)閉沖洗閥11、點(diǎn)擊'泵”圖標(biāo)，點(diǎn)擊設(shè)置泵??選項(xiàng)”設(shè)流速：1.0ml/min（以單元泵為儡入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積也可輸入停泵1么點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示霽際甘積：釜體枳：a：Joao升|i（以單元泵為儡入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積也可輸入停泵霽際甘積：釜體枳：a：Joao升|ioq升沽刑曲瑜充呈:MiJnUS和邑瑁就Q停止分析■如果潔削墾低于[aioo弁它當(dāng)宿劑用完時關(guān)閉基嗨定（UJ|

（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯:1、開始編輯完整方法：?從“方法”菜單中選擇編輯完整方法…項(xiàng)，如下圖所示選中除數(shù)據(jù)分析”外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊'確定”，進(jìn)入下一畫面。2、方法信息：在“方法注釋'中加入方法的信息（如：測試方法）點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。

3、泵參數(shù)設(shè)定：（以四元泵為例）?在“流速”處輸入流量如1ml/min在'溶劑B”處輸A80.0,（A=100-B-C-D）也可“插入”一行'時間表'，編輯梯度。在壓力隈'處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。?點(diǎn)擊'確定”，進(jìn)入下一畫面。4、自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定（以標(biāo)準(zhǔn)61313為例）?選擇合適的進(jìn)樣方式如圖所示，進(jìn)樣體稅.0ul,洗瓶位置為6號。，標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣，----只能輸入進(jìn)樣體積此方式無洗針功能。洗針進(jìn)樣'-—-可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置比方式針從樣品瓶抽完樣品后，會在洗瓶中洗針使用進(jìn)樣器程序---可以點(diǎn)擊編輯”按鈕進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。?點(diǎn)擊進(jìn)'確定”，進(jìn)入下一畫面。

?在“溫度”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫魘：40度。并選中它點(diǎn)擊“更多””鍵，如圖所示選中“與左側(cè)相同，使柱溫箱的溫度左右一致。?點(diǎn)擊'確定”，進(jìn)入下一畫面。c*|40J：iP虧止時間舊〕:innr31文件的運(yùn)行控制面度器□：）方諉序如CSJ視圖CVJ中穌U0裕助（HJ[*]■|EF_T話行方法c*|40J：iP虧止時間舊〕:innr31文件的運(yùn)行控制面度器□：）方諉序如CSJ視圖CVJ中穌U0裕助（HJ[*]■|EF_T話行方法工r港就云行控制溫度危）時間沮皮廬1也1序列?DEf_LC.EDEFAULTL丁扣刨JTIs|n*-LL后運(yùn)行時ni■.■七鹽司riin巴諾柱切踐閭M）插入山i監(jiān)加互i傳TT^-nlHJ廣⑶JI：-俱存舊〕叱溫度■〕r溫度田]可進(jìn)行分析co仁■&何喝度汗考溫度在設(shè)定I宜以內(nèi)4/-[oi-PLJ=陣止田■間后運(yùn)行時間A.最大壓力最小壓力iUJLUooJUJu-2.?口q5■o-uoo1二Jm溫度:nl/miiLnjXiVWD信號;Fljfl械bu'burniInrn*iiiIUIw?h^friiIIniInIl-L-L-'16、VWD檢測器參數(shù)設(shè)定?在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波如254nm,在“峰寬（響應(yīng)時間”下方點(diǎn)擊下拉式箭頭選擇合適的響應(yīng)時間如＞0.1min（2s）?在“時間表'中可以“插入”一行，輸入隨時間切換的波長如1min，波長=300nm點(diǎn)擊“確定”，進(jìn)入下一畫面?；鹌琁7J運(yùn)行控制㈤仗器CLJ方1^01）序列撰）勰的，J中斷心制助QD方窗口仃主跚URTFLC.NBErXVLT.DDEFIT.5a詁仃方:i去序列：進(jìn)樣皇停ikflt間后運(yùn)IWi.司M方窗口仃主跚URTFLC.NBErXVLT.DDEFIT.5a詁仃方:i去序列：進(jìn)樣皇停ikflt間后運(yùn)IWi.司M大壓方最小JEST5.00□.2DD□.□□0.00100.0400□嘰遍.度-mL/nlnrunVYB佰懸runbullVC...WE、C：>10GBfrttmln7、RID檢測器參數(shù)設(shè)定?色譜條件進(jìn)樣體積20ul。光學(xué)單元溫度“關(guān)閉”。極性：“正極性'。峰寬（響應(yīng)時間：4s。?如圖所示“光學(xué)部件溫度-―若環(huán)境溫度控制在2C,設(shè)定為“關(guān)閉”，若環(huán)境溫度不穩(wěn)定則設(shè)定光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度度,以防樣品在池中沉淀。峰寬（響應(yīng)時間”---大多數(shù)分析設(shè)為“4s”，只有在高速分析下設(shè)為更短。分析后自動循環(huán)---在不進(jìn)行分析時可以讓流動相循環(huán)，節(jié)省流動相，檢測器連續(xù)運(yùn)行，可隨時投入使用。?*****點(diǎn)擊RID圖標(biāo)，選擇RIDControlHeater設(shè)為On，若要循環(huán)流動相必須將’RecyclingValve"設(shè)為ON。手動purge參比池，將其設(shè)為n，并輸入Purge時間。8、在“運(yùn)行時選項(xiàng)表”中選中“數(shù)據(jù)采集'，點(diǎn)擊“確定”。9、點(diǎn)擊“方法'菜單，選中方法另存為“”，輸入一方法名，如測試”，點(diǎn)擊“確定”。10、從菜單“視圖”中選中在線信號，選中“信號窗口1”，然后點(diǎn)擊改變…”鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中點(diǎn)擊“確定”。(如同時檢測二個信號則重復(fù)10,選中“信號窗口2”。祖囹麒中斷堡〕幫助但)/1方茂和孟行控制

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2數(shù)據(jù)始折拓告版面景計該:斷可選信號?顯示頂部工具欄(I)w顯矛狀態(tài)工具欄(3)啟動脫機(jī)處型副本決)改玄訪I可枳限(HL..^WDC四4nm處懼費(fèi)比信號■kWDB:Z54nm長的未用藪比st糧正H區(qū)岳苗：互至，:有)柱溫箝:溫度,)單云藏■速在線信號〔口)W系稅視圖(I)值器實(shí)際值(A)WD掃描(K)信號窗口1(L)信號固口20q.王.—n?珀范圍(X)17畫咨皴(0)選足由信導(dǎo)15)海心曲2E4nm姓的吸光度斐型賣迎匝V珀范圍』eAUm瀏自tfi?s(o?Pnr便用方蒞設(shè)百應(yīng)用于方注志―r便用方蒞設(shè)百應(yīng)用于方注志―I康捎I帶助min14]化學(xué)工作站狀態(tài)W)W命令行(C)工作曰志?短菜單禪擊'改變”鍵，即可彈出右側(cè)的20，招“編輯信號圖譜窗口，進(jìn)而選擇口電崩需的譜圖信號。

11、從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“樣品信息'選項(xiàng)，如下圖所示，輸入操作者名稱，如“安裝工程師、在啜據(jù)文件”中選擇手動”或偷綴/計數(shù)器'。區(qū)別：手動■"每次做樣之前必須給出新名席則儀器會將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。Pl在前綴/計數(shù)器一一“前綴”框中輸入前綴，在“計數(shù)器'框中輸入計數(shù)器的起始位儀器會自動命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002。12、點(diǎn)擊“確定，，，從“儀器”菜單選擇“系統(tǒng)開啟。13、等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，從運(yùn)行控制'菜單中選擇運(yùn)行方法'，進(jìn)樣。（若無自動進(jìn)樣器，則基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣并搬動手動進(jìn)樣閥，啟動運(yùn)）行。（DAD,VWD色譜圖如下所示：

（三）.數(shù)據(jù)分析方法編輯1、從“視圖”菜單中，點(diǎn)擊數(shù)據(jù)分析'進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。2、從“文件'菜單選擇“調(diào)用信號'，選中您的數(shù)據(jù)文件名如下圖所示。點(diǎn)擊“確定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。3、做譜圖優(yōu)化：從“圖形'菜單中選擇“信號選項(xiàng)'；如下圖所示。從“范圍”中選擇“滿量程”或“自動量程'及合適的時間范圍或選擇自定義量程調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊"確定”。

4、積分從“積分”菜單中選擇積分事件'選項(xiàng)，如下圖所示。選擇合適懦率靈敏度,“峰寬”，“最小峰面積'，“最小峰高'。從“積分”菜單中選擇積分”選項(xiàng)，則數(shù)據(jù)被積分。如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。?點(diǎn)擊左邊""”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。立由心，碰叫mgwmip?邛骨?g攜EIKICV?=pbm立由心，碰叫mgwmip?邛骨?g攜EIKICV?=pbmIR-.UfUl111-.*1園pE'jj廠AJ職站威is■祐押告NF?妙辛肯二i廿.冊10.7(7_31_r1H13叫釧07212l.Ei沏B7￡.E0匹1&UHF3ZERSI7K.3叫％606JJ-17.3344~ST1-0油35、打印報告?從“報告”菜單中選擇設(shè)定報告'選項(xiàng)，進(jìn)入如下圖所示畫面。?點(diǎn)擊淀量結(jié)果'框中計算'右側(cè)的黑三角，選中“面積百分比其它選項(xiàng)不變。?點(diǎn)擊“確定”。娥機(jī)I娥機(jī)IZGrrt*fP3田整匚5院斜口】WECC)報白CE】于略上應(yīng)俱】迪田IV]中瑚g冊肪□￡]^>=S-DL□!.UEmWKiLSZM-E]目岱l町耳執(zhí)正.i|Aopcit?ai抿巖梧擊I商理痕宙gssusmwa言=1*項(xiàng)1蟲〕.件舞型P.TMTHIr~LSZM-E]目岱l町耳執(zhí)正.i|Aopcit?ai抿巖梧擊I商理痕宙gssusmwa言=1*項(xiàng)1蟲〕.件舞型P.TMTHIr~.EMFLEJr~.DiriDjr~.cswr~：：=i-skjr~.htmih.3■L=0-101.DJL樣品慎JB顯手在#—再也K?沛力時咐泰格為標(biāo)記=添m電臨Hl腕出。廠審加邊ul曝mg?丈檢正坦凈面.*相式l單此推任?-與收正I*—ffiJfS.tTl不fR曰色*函*出=_<_?相向E)廣棲百偵廠冬頁於可JIMI廠留下RTlfl:響座:|醐定|皿師|D.CI448□.□PIS0.CI9G60.2219口7ZSQ.7OZQ64406?2.眼3Z5.CZ517.9：34跖.皈?從“報告”菜單中選擇打印報告'，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊'報告”底部的竹印”鈕。（四）、關(guān)機(jī)：?關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計算機(jī)。關(guān)閉Agilent120咯模塊電源開關(guān)。（五）、Agilent1200L（維護(hù)保養(yǎng)：1、色譜柱長時間不用，存放時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（如乙腈適于反相色譜柱，正相色譜柱用相應(yīng)的有機(jī)相）2、手動進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時，要用水沖洗進(jìn)樣口。3、流動相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長菌）4、帶seal-wash^T1200要配制90%水+10%異丙醇，開啟feeal-wash清洗泵，溶劑不能干涸。5、注意事項(xiàng)見說明書，或由現(xiàn)場工程師介紹****注意：1、本教材僅適用于現(xiàn)場工程師培訓(xùn)講解參考之用，內(nèi)容為工作站現(xiàn)場培訓(xùn)的一般要求，請根據(jù)用戶的儀器配置及現(xiàn)場用戶的需求進(jìn)行相應(yīng)的培訓(xùn)內(nèi)容增刪。2、安捷倫公司對本教材可能存在的錯誤及其后果不承擔(dān)任何法律

責(zé)任，我們適時推出新版本的培訓(xùn)教材，恕不另行通知。維護(hù)知識問答1、為什么溶劑和樣品要過濾溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對分析結(jié)果的影響。色譜柱由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線eal-wash選項(xiàng)？HPLC用緩沖鹽時由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象出的細(xì)小鹽粒非常堅贓附著在藍(lán)寶石活塞桿上，隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動容易產(chǎn)生劃痕，并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)J緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0?1mol時,必須使用該在線沖洗選項(xiàng)清洗液配制90%水+10%異丙醇該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力，不能干涸。3、為什么Agilent1200L（的流動相管路非常細(xì)在使用HPLC時，應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣相慢個數(shù)量級。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會引起色譜峰E展寬，而使柱效降彳氐為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)梟ilent1200LC使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動相管路。毛細(xì)管線分類:0.17mm內(nèi)徑綠色；0.12mm內(nèi)彳紅色。PEEK管線：內(nèi)徑0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm毛細(xì)管線優(yōu)點(diǎn)柔韌性好***Agilent公司同時備有1/16in的粗外徑毛細(xì)管線適用于不同習(xí)慣的用戶優(yōu)點(diǎn)是剛性好但柔韌性差一些。4、流動相使用前為什么要脫氣？流動相使用前必須進(jìn)行脫氣處理以除去其中溶解的氣體（02），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無;分析。溶解的氧氣還會導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能用FLD,可能會造成熒光猝滅。常用的脫氣方法比較：氦氣脫氣法:利用液體中氮?dú)獾娜芙舛缺瓤諝獾?，連續(xù)吹氮脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法:效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法:易抽走有機(jī)相。超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩-15min此法效果最差。在線真空脫氣法:Agilent1200L（真空脫機(jī)利用膜滲透技術(shù)，在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。5、如何防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽侖沖液（PH=—7）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞。A：請嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過濾。B：請勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液C：如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入0001---0.001的疊氮化鈉D:在溶劑瓶內(nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣隔絕空氣。E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。6、Agilent1200L（泵如何維護(hù)？Agilent1200L泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量準(zhǔn)確的流動相，及時合理的維護(hù)非常重要。A：流動相使用前請必須脫氣、過濾。B：使用緩沖鹽時，要加在Seal-wash選項(xiàng)。C：關(guān)機(jī)前，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。D：及時更換PurgeValve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開PurgeValve寸，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵。）E：使用合適的密封圈。7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)