天然藥物化學(xué)試驗(yàn)講義

天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講義目錄一、蘆薈粗多糖的提取及鑒定二、大黃中蔥釀昔元的提取、分離與鑒別三、槐米中蘆丁、榔皮素的提取、分離與鑒別四、八角茴香揮發(fā)油的提取及鑒別五、黃柏中生物堿的提取、分離和鑒別六、茶葉中咖啡因的提取、人—刖百《天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》是一門實(shí)踐性很強(qiáng)的課程，理論教學(xué)與實(shí)驗(yàn)教學(xué)是一個(gè)不可分割的完整體系。通過(guò)實(shí)驗(yàn)課的學(xué)習(xí)使學(xué)生能印證并加深理解課堂講授的理論知識(shí)，掌握由天然藥物中提取、分離、精制有效成分，并對(duì)其進(jìn)行鑒別的基本方法和技能，提高學(xué)生獨(dú)立動(dòng)手、觀察分析、解決問題的能力，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和良好的科研作風(fēng)。實(shí)驗(yàn)一蘆薈粗多糖的提取及鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、水提醇沉法提取多糖的原理和方法2、掌握高速冷凍離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等儀器的用法3、了解產(chǎn)薈多糖在醫(yī)藥中的應(yīng)用二、實(shí)驗(yàn)原理產(chǎn)薈的多糖類可增強(qiáng)人體對(duì)疾病的抵抗力，治愈皮膚炎、慢性腎炎、膀胱炎、支氣管炎等慢性病癥，抑制、破壞異常細(xì)胞的生長(zhǎng)的作用，從而達(dá)到抗癌目的。植物體內(nèi)的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖，所以本實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉法提取產(chǎn)薈中的粗多糖。三、試劑、材料及儀器1、試劑：鹽酸、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醴、葡萄糖對(duì)照品、苯酚、濃硫酸2、材料和儀器：產(chǎn)薈葉、燒杯、移液管、量筒、容量瓶、玻璃棒、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平、真空泵、電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見分光光度計(jì)、高速離心機(jī)、真空冷凍干燥機(jī)。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1、取產(chǎn)薈鮮葉50g,洗凈，去掉葉尖和葉底，在蒸儲(chǔ)水水中浸泡0.5h,已除去由表面滲出的黃色液體。然后切去表皮，將內(nèi)層凝膠（勻漿后）置于燒杯中，加入三倍蒸儲(chǔ)水，置于55c恒溫水浴鍋中加熱浸提4h02、浸提液離心分離（2500r/min,5min）并過(guò)濾（直接6層紗布過(guò)濾），將所得液汁減壓濃縮（至30ml）,用6mol/L的鹽酸調(diào)pH值3.2左右，向經(jīng)過(guò)調(diào)酸處理的產(chǎn)薈凝膠濃縮汁中緩慢加入6倍量的95%乙醇，邊加邊攪拌大約需要15?30min,室溫下靜置2h,離心分離（2500r/min,7min）得多糖沉淀。依次用乙醇、丙酮和乙醴洗滌，然后真空干燥（通風(fēng)櫥干燥），最終得到的沉淀即為產(chǎn)薈多糖粗品。3、產(chǎn)薈多糖的鑒定對(duì)產(chǎn)薈多糖的鑒定利用改進(jìn)的苯酚一硫酸法。苯嘲一硫酸試劑能與產(chǎn)薈多糖中的己糖起顯色反應(yīng)，在一定波長(zhǎng)下其吸光度的變化與多糖含量呈線性關(guān)系。采用苯酚一硫酸顯色法鑒定產(chǎn)薈多糖，產(chǎn)薈中的多糖在硫酸的作用下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物共腕酚在490nm處有最大波長(zhǎng)，由此可以鑒定出產(chǎn)薈中的多糖（圖1）。

ftVEItHCQir圖1蘆花多薰與季冊(cè)一硫酸的反應(yīng)HHftVEItHCQir圖1蘆花多薰與季冊(cè)一硫酸的反應(yīng)HH甲粽■■井蛹附?大渡住49O|U13五、注意事項(xiàng)加入乙醇沉淀多糖時(shí)要邊加邊攪拌，時(shí)間要長(zhǎng)一些;六、作業(yè)與思考題1、記錄實(shí)驗(yàn)條件，過(guò)程和實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。2、為什么要在醇沉之前調(diào)pH值？實(shí)驗(yàn)二大黃中慈釀昔元的提取、分離與鑒別【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握從大黃中提取和分離游離意釀的方法。.掌握用pH梯度萃取法分離不同酸性的羥基蔥釀?lì)惢衔铩?掌握慈釀?lì)惢衔锏闹饕獧z識(shí)方法。.熟悉慈釀?lì)惢衔锏纳V檢識(shí)方法。.了解用柱色譜法分離慈釀?lì)惓煞??！緦?shí)驗(yàn)原理】.大黃為蓼科植物掌葉大黃RheumpalmatumL.、唐古特大黃R.tanguticumMaxim.exReg.和藥用大黃R.officinaleBaill.的干燥根及根莖。大黃中含有大黃蔥釀及其昔。(1)大黃酸(rhein)分子式CsHO,分子量284.21。黃色針狀結(jié)晶(升華法)，mp.321?322C,330c分解。能溶于堿水、叱噬，溶于乙醇、氯仿、乙醴和石油醴，幾不溶于水。(2)大黃素(emodin)分子式C5H0Q,分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(乙醇)，mp.256?257C,能升華。易溶于乙醇、堿水，微溶于乙醴、氯仿，幾不溶于水。(3)產(chǎn)薈大黃素(aloe-emodin)分子式CeHwQ,分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(甲苯)，mp.223?224Co易溶于熱乙醇，可溶于乙醴和苯，并呈黃色；溶于堿液呈紅色；氨水及硫酸中呈緋紅色。(4)大黃酚(chrysophanol)分子式C5H10Q,分子量254.23。橙黃色六方形或單斜結(jié)晶(乙醇或苯)，mp.196?197C,能升華。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙

醴和冰醋酸，極微溶于石油醴、冷乙醇，幾不溶于水（5）大黃素甲醴（physcion）分子式C6H12Q,分子量284.26。磚紅色單斜針狀結(jié)晶，mp.203?207C,溶于苯、氯仿、叱噬及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醴和丙酮。大黃酚Ri=CH3R2=H大黃素Ri=CH3R2=OH大黃酸Ri=COOHR2=H大黃素甲醛Ri=CH3R2=OCH3蘆薈大黃素Ri=CH2OHR2=H.本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)大黃中的羥基蔥釀甘經(jīng)酸水解成游離羥基慈釀，而游離羥基慈釀不溶于水，可溶于氯仿、乙醴等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用氯仿從水解液中將游離羥基慈釀提取出來(lái)，再利用各游離羥基蔥釀的酸性不同，采用pH梯度萃取法將其分離。其中大黃酚和大黃素甲醴的酸性十分近似，用pH梯度萃取法難以分離，可利用兩者的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離?！緦?shí)驗(yàn)儀器與試劑】.索氏提取器，500、100、10ml燒杯，1000、500ml分液漏斗，10ml試管，試管架，托盤天平，量筒，三角漏斗，洗瓶,布氏漏斗，水浴鍋，10X20cm薄層板，10X20cm薄層色譜缸，點(diǎn)樣毛細(xì)管，紫外燈（儀），玻棒，牛骨匙，脫脂棉，顯色劑噴瓶，小型空壓機(jī)，層析柱（①1.5cm）.大黃粗粉，濾紙，pH試紙，乙酸乙酯，石油醴（60?90C）,氯仿，20%硫酸，pH8緩沖液，pH9.9緩沖液，濃鹽酸，5%碳酸鈉，5%氫氧化鈉，丙酮，0.5%昔酸鎂乙醇試劑，薄層用硅膠H,0.2%CMC-Na甲醇，大黃酸、大黃素、產(chǎn)薈大黃素對(duì)照品，展開劑：石油醴（30?60C）-乙酸乙酯-甲酸（15：5：1）上層溶液，濃氨水?！緦?shí)驗(yàn)步驟】【實(shí)驗(yàn)步驟】1.提取與分離大黃粗粉100g加20%硫酸200ml,加熱回流3小時(shí)，放冷，加乙酸乙酯300ml+石油酸100ml,振搖，濾過(guò)藥渣乙酸乙酯、石油酸提取液藥渣|水洗余酸至中性乙酸乙酯、石油酸提取液加pH8緩沖液150ml萃取堿水液乙酸乙酯、石油酸提取液堿水液|鹽酸調(diào)pH3,靜置，濾過(guò)|加pH9.9緩沖液300ml萃取沉淀堿水層I鹽酸調(diào)pH3,堿水層I鹽酸調(diào)pH3,濾過(guò)「沉淀丙酮精制大黃素大黃酸5%碳酸鈉-5%氫氧化鈉（9：1）540ml萃取乙酸乙酯、石油酸提取液堿水層|3%氫氧化鈉500ml萃取|鹽酸調(diào)pH3,濾過(guò)!\沉淀堿水層乙酸乙酯、石油酸提取液|醋酸乙酯精制|鹽酸調(diào)pH3,濾過(guò)蘆薈大黃素沉淀硅膠柱色譜大黃酚大黃素甲醴2.檢識(shí)（1）堿液試驗(yàn)分別取各意釀化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴10%氫氧化鈉試劑振搖，觀察顏色變化，羥基意釀應(yīng)顯紅色。（2）乙酸鎂試驗(yàn)分別取各意釀化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴0.5%乙酸鎂乙醇試劑，觀察顏色變化，羥基意釀應(yīng)顯橙、紅、紫等顏色。（3）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠H-CMC-Na試樣：自制大黃酸、大黃素、產(chǎn)薈大黃素的乙醇溶液。對(duì)照品：上述各成分對(duì)照品乙醇溶液（約1mg/ml）。展開劑：石油醴（30?60C）-乙酸乙酯-甲酸（15：5：1）上層溶液顯色：在可見光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)的位置。然后再用濃氨水熏蒸或噴霧5%乙酸鎂甲醇溶液，斑點(diǎn)應(yīng)顯紅色?！净静僮髯⒁馐马?xiàng)】.大黃中蔥釀?lì)惢衔锏姆N類、含量與大黃的品種、采集季節(jié)、炮制方法及貯存時(shí)間均有關(guān)系，實(shí)驗(yàn)用藥材應(yīng)注意。.萃取用pH8緩沖液為檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液；pH9.9緩沖液為碳酸氫鈉-碳酸鈉緩沖液。配制好的緩沖液要測(cè)pH值。一般萃取大黃酸用pH7?8范圍的，萃取大黃素用pH9.5?11范圍的。.用各緩沖液進(jìn)行萃取時(shí)，采用一次性加入的方法，實(shí)驗(yàn)證明，如將緩沖液分次萃取，分離效果不理想。.本實(shí)驗(yàn)也適應(yīng)于以虎杖為原料的提取，但虎杖中不含大黃酸，故直接由大黃素開始分離。.色譜分離大黃酚及大黃素甲醴時(shí)，先用氯仿洗脫至出現(xiàn)黃色色帶時(shí)，改用氯仿一醋酸乙酯(8：2)混合溶劑繼續(xù)洗脫，并更換收集器，每10ml為一份，按順序編號(hào)，直至色譜柱的第一色帶全部洗脫下來(lái)為止。各流分經(jīng)硅膠-CMC-Na板，氯仿—醋酸乙酯(8：2)展開，用大黃酚和大黃素甲醴作對(duì)照，合并斑點(diǎn)相同流分，分別濃縮、放置析晶，即可獲得大黃酚及大黃素甲醴?！舅伎碱}】一、大黃游離慈釀的提取分離方法還有哪，同時(shí)注意實(shí)驗(yàn)成本、儀器、安全、環(huán)保等多因素思考。、(1)大黃中5種羥基蔥釀化合物的酸性和極性大小應(yīng)如何排列？為什么？(2)pH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些中藥成分的分離？(3)慈釀?lì)惢衔锛捌湮舻谋由V用什么作吸附劑、展開劑和顯色劑？(4)慈釀?lì)惻c乙酸鎂顯色反應(yīng)的必要條件是什么？具顏色反應(yīng)與羥基所在的位置有何關(guān)系？實(shí)驗(yàn)三槐米中蘆丁、柳皮素的提取、分離與鑒別【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握黃酮類化合物的提取原理和方法。

.掌握黃酮類成分的主要理化性質(zhì)及鑒別方法。3,熟悉和了解采收與炮制對(duì)產(chǎn)丁含量的影響?！緦?shí)驗(yàn)原理】1,槐花為豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥花及花莆。前者習(xí)稱槐花FlosSphorae；后者習(xí)稱槐米FlosSophoraeImmaturus。主產(chǎn)于河北、山東、河南、陜西、江蘇、廣東、廣西、遼寧等地。以河北、山東、河南產(chǎn)量大。性能：苦，性微寒。功效：涼血止血、消肝瀉火。應(yīng)用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、觸血、肝熱目赤、頭痛眩暈等。蕓香甘R—葡嚼槽一鼠例.主要含有產(chǎn)?。ㄊ|香甘）、柳皮素，還含少量皂甘類及多糖、粘液質(zhì)等。近代研究表明槐米含產(chǎn)丁可高達(dá)蕓香甘R—葡嚼槽一鼠例制皮素R=H槐花開放后降至13.0%制皮素R=H.產(chǎn)丁為淺黃色粉末或極細(xì)彳漆淡黃色針狀結(jié)晶，含3分子結(jié)晶水（Q7H30O6?3隆0）,加熱至185c以上熔融并開始分解。產(chǎn)丁的溶解度，在冷水中1:10000,沸水中1:200,沸乙醇中1:60,沸甲醇中1:7,可溶于乙醇、叱噬、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醴、氯仿、石油醴。產(chǎn)丁分子中具有較多酚羥基，顯弱酸性，易溶于堿液中，酸化后又可析出，因此可以用堿溶酸沉的方法提取產(chǎn)丁?！緦?shí)驗(yàn)儀器與試劑】1.1000、500、100、10ml燒杯，10ml試管，試管架，托盤天平，量筒，三角漏斗，洗瓶,布氏漏斗，電爐，10X20cm薄層板，10X20cm薄層色譜缸，色譜專用濾紙，聚酰胺色譜膜，點(diǎn)樣毛細(xì)管，紫外燈（儀），玻棒，牛骨匙，紗布，脫脂棉，顯色劑噴瓶，小型空壓機(jī)。2,槐花米粗粉，濾紙，pH試紙，生石灰，硼砂，2蜥酸，濃硫酸，稀鹽酸，濃鹽酸，10%K氧化鈉，乙醇，10%x-蔡酚乙醇溶液，鎂粉，1%昔酸鎂甲酉!溶液，1%三氯化鋁乙醇溶液，2%T氯氧培甲醇溶液，2%鉗緣酸甲酉!溶液，Ba（OH?,滑石粉，甲醇，氨水，蕓香甘、柳皮素、葡萄糖、鼠李糖對(duì)照品，展開劑：正丁醇-乙酸-水（4:1:5）上層溶液（紙色譜），90叱醇或乙醇-水（7:3）（聚酰胺色譜），顯色：苯胺-鄰苯二甲酸鹽試劑。【實(shí)驗(yàn)步驟】.蕓香甘的提取稱取50g槐花米粗粉，于500mL燒杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液300mL在攪拌下小心加入石灰乳調(diào)至pHA9,加熱微沸30min,注意添加水，隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分保持原體積并維持pHA9,趁熱用脫脂棉過(guò)濾；藥渣同樣操作再提取一次,合并濾液，稍冷，用濃鹽酸調(diào)至pH4?5,靜置過(guò)夜使沉淀完全，抽濾，用蒸儲(chǔ)水洗3?4次，抽干置空氣中自然干燥得淡黃色粗制蕓香甘。.蕓香甘的精制將蕓香甘粗品置500mL燒杯中，加適量（約100mL蒸儲(chǔ)水，再用石灰水調(diào)至pH&加熱煮沸數(shù)分鐘，使充分溶解。趁熱抽濾，濾液滴加3mol/LHCl調(diào)至pH7,放置18h以上，即析出沉淀。減壓過(guò)濾，用少量蒸儲(chǔ)水洗滌沉淀2?3次。抽干，于70?80c干燥1h,即得精制產(chǎn)丁。稱重，計(jì)算產(chǎn)率。.蕓香甘的水解取精制產(chǎn)丁2g,研細(xì)，置于500mL圓底燒瓶中，力口2蜥酸溶液150mL于直火回流30min,放置至室溫，析出黃色柳皮素結(jié)晶，抽濾，濾液保留作糖部分的鑒定。沉淀水洗后再用95%L醇重結(jié)晶一次，得黃色針狀結(jié)晶，于70?80c以下干燥，即得精制柳皮素。.檢識(shí)（1）取蕓香甘、柳皮素少許，分別用10mL乙醇溶解，制成試樣溶液，照以下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①M(fèi)olish反應(yīng)：取試樣溶液各2mL分置于兩支試管中，加10%x-茶酚乙醇溶液1mL振搖后傾斜試管45°,沿管壁滴加2mL濃硫酸，靜置，觀察兩液面交界處顏色變化（棕色環(huán)）。②鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取試樣溶液各2mL分別置于兩支試管中，各加入鎂粉少許，再加入濃鹽酸數(shù)滴，觀察并記錄顏色變化。③醋酸鎂反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1%昔酸鎂甲醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄。④三氯化鋁反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1%E氯化鋁乙醇溶液2滴,于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄。⑤皓-枸檬酸反應(yīng)：取試樣溶液各2mL分別置于兩支13c管中，各加2%C氯氧培甲醇溶液3?4滴，觀察顏色，然后加入2%鉗緣酸甲醇溶液3?4滴，觀察并記錄顏色變化。（2）糖的紙色譜鑒定取水解母液20mL用Ba（OH＞的細(xì)粉（約2.6g）中和至pH7,濾去生成的BaSO沉淀（可用滑石粉助濾），濾液濃縮至約1mL供紙色譜點(diǎn)樣用樣品：水解濃縮液色譜濾紙：新華濾紙對(duì)照品：葡萄糖、鼠李糖水溶液展開劑：正丁醇-乙酸-水（4:1:5）上層溶液。顯色：苯胺-鄰苯二甲酸鹽試劑，噴后105c烘10min,顯棕紅色斑點(diǎn)。苯胺-鄰苯二甲酸的配制：將1.66g苯二甲酸和0.93g的苯胺溶于100mLzK飽和的正丁醇中。（3）產(chǎn)丁、柳皮素的紙色譜和聚酰胺薄層色譜鑒定樣品：自制產(chǎn)丁、柳皮素的乙醇液色譜材料：新華濾紙，聚酰胺薄膜對(duì)照品：產(chǎn)丁、柳皮素的乙醇溶液展開劑：正丁醇-乙酸-水（4:1:5）上層溶液（紙色譜）。90猿醇或乙醇-水（7:3）（聚酰胺色譜）。顯色：①可見光下觀察及紫外燈下觀察。②噴三氯化鋁試劑后再觀察?！净静僮髯⒁馐马?xiàng)】.加入石灰乳即可達(dá)到堿溶解提取蕓香甘目的，又能使槐米中含存的大量粘液質(zhì)生成鈣鹽沉淀除去，但應(yīng)嚴(yán)格控制在pHA9,不得超過(guò)10。pH過(guò)高，在加熱提取過(guò)程中可促使蕓香甘水解破壞，造成產(chǎn)率明顯下降。酸沉?xí)r加濃硫酸調(diào)pH”4,不宜過(guò)低，否則會(huì)使蕓香甘生成鹽溶于水，也會(huì)降低收率。.加入硼砂的目的是使其與蕓香甘鄰二酚羥基結(jié)合，這樣既保護(hù)鄰二酚羥基不被氧化破壞，亦保護(hù)鄰二酚羥基不與鈣離子絡(luò)合，使蕓香甘不受損失。同時(shí)還有調(diào)節(jié)堿性水溶液PH值的作用。.蕓香甘的提取還可以利用蕓香甘在冷、熱水中的溶解度不同，采用沸水提取法。【思考題】.甘類水解有幾種催化方法？.試解釋蕓香甘水解過(guò)程中出現(xiàn)的混濁-澄清-混濁現(xiàn)象。.怎樣正確鑒定蕓香甘？.本實(shí)驗(yàn)提取過(guò)程中應(yīng)注意哪些問題？實(shí)驗(yàn)四八角茴香揮發(fā)油的提取及鑒別【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握揮發(fā)油的水蒸氣蒸儲(chǔ)提取法。.掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點(diǎn)滴定性檢識(shí)。.熟悉揮發(fā)油的一般檢識(shí)。.了解揮發(fā)油單向二次薄層色譜檢識(shí)。【實(shí)驗(yàn)原理】.為木蘭科植物八角茴香IlliciumverumHook..f.的干燥成熟果實(shí)。分布于廣西、貴州、云南等省區(qū)。含揮發(fā)油4%?9%,脂肪油約22%(主要存在于種子中)及蛋白質(zhì)、樹膠、樹脂等。揮發(fā)油中主要成分是茴香醴，約為總揮發(fā)油的80%?90%,冷時(shí)常自油中析出，故稱茴香腦。止匕外，尚含莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。OCH3COOHOCH3CHOCOOH茴香酸(腦)甲基胡椒酚茴香醛莽草酸茴香酸(1)茴香腦(anethole)又稱大茴香醴、茴香烯、茴香醴。分子式C0H2O,分子量148.21。為白色結(jié)晶，mp.21.4C,bp.235C。與乙醴、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及石油醴，幾不溶于水。(2)莽草酸(shikimicacid)又稱毒八角酸。分子式GHwQ,分子量174.15。無(wú)色針狀結(jié)晶(甲醇一醋酸乙酯),mp.190?191C。在100ml水中可溶解18g,100ml無(wú)水乙醇中可溶解2.5g,幾乎不溶于氯仿、苯、石油醴。(3)甲基胡椒酚(methylchavicol)分子式C0Hl2。，為無(wú)色液體，bp.215?216C。(4)茴香醛(anisaldehyde)分子式GHO,有兩種狀態(tài)：棱晶，mp.36.3C,bp.236C;液體，mp.0C,bp.248C。(5)茴香酸(anisicacid)分子式GHO,針狀結(jié)晶，mp.184C,bp.275?280C。2.本實(shí)驗(yàn)是水蒸氣蒸儲(chǔ)法提取揮發(fā)油的通法。揮發(fā)油的組成成分較復(fù)雜，常含有烷姓、烯姓、醇、酚、醛、酮、酸、醴等官能團(tuán)。因此可以用一些檢出試劑在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)，從而了解組成揮發(fā)油的成分類型。揮發(fā)油中各類成分的極性互不相同，一般不含氧的姓類和菇類化合物極性較小，在薄層色譜板上可被石油醴較好的展開；而含氧的姓類和

菇類化合物極性較大，不易被石油醴展開，但可被石油醴與醋酸乙酯的混合溶劑較好的展開。為了使揮發(fā)油中各成分能在一塊薄層色譜板上進(jìn)行分離，常采用單向二次色譜法展開。【實(shí)驗(yàn)儀器與試劑】1.100、10ml燒杯，250ml三角燒瓶，10ml試管，試管架，托盤天平，量筒，洗瓶，蒸儲(chǔ)裝置，電熱套，10X20cm薄層板，10X20cm薄層色譜缸，點(diǎn)樣毛細(xì)管，紫外燈（儀）,玻棒，牛骨匙，顯色劑噴瓶，小型空壓機(jī)。2.八角茴香粗粉，濾紙，三氯化鐵試劑，2,4-二硝基苯肌試劑，堿性高鈕酸鉀試劑，香草醛-濃硫酸試劑（臨時(shí)配用），0.05%溟酚藍(lán)試劑，硝酸鈾俊試劑，檸檬油，丁香油，薄荷油，樟腦油，枝葉油，松節(jié)油，丙酮，石油醴（30?60C）,醋酸乙酯?！緦?shí)驗(yàn)步驟】.茴香腦的提取分離取八角茴香粗粉50g,置圓底燒瓶中，加適量水浸泡濕潤(rùn)，按一般水蒸氣蒸儲(chǔ)法進(jìn)行蒸儲(chǔ)提取。也可將搗碎的八角茴香置于揮發(fā)油測(cè)定器的燒瓶中，加蒸儲(chǔ)水500ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并使溢流入燒瓶時(shí)為止。緩緩加熱至沸，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放冷，分取油層。將所得的八角茴香油置冰箱中冷卻1小時(shí)，即有白色結(jié)晶析出，趁冷濾過(guò)，用濾紙壓干。結(jié)晶為茴香腦，濾液為析出茴香腦后的八角茴香油。.檢識(shí)（1）油斑試驗(yàn)取八角茴香油適量，滴于濾紙片上，常溫下（或加熱烘烤），觀察油斑是否消失。（2）薄層色譜板點(diǎn)滴反應(yīng)取硅膠G薄層色譜板1塊，用鉛筆按表畫線。將揮發(fā)油試樣用5?10倍量乙醇稀釋后，用毛細(xì)管分別滴加于每排小方格中，再將各種檢識(shí)試劑用滴管分別滴于各揮發(fā)油試樣斑點(diǎn)上，觀察顏色變化。初步推測(cè)每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)檸檬油丁香油薄荷油樟腦油校葉油松節(jié)油空白對(duì)照成分的類型檸檬油丁香油薄荷油樟腦油校葉油松節(jié)油空白對(duì)照試劑J.三氯化鐵試劑.2,4-二硝基苯脫試劑.堿性高鎰酸鉀試劑.香草醛-濃硫酸試劑.0.05%漠酚藍(lán)試劑.硝酸鈾鏤試劑（3）揮發(fā)油薄層色譜單向二次展開檢識(shí)取硅膠H-CMC-Na?層板（6cmX15cnj）一塊，在距底邊1.5cm及8cm處分別用鉛筆畫起始線和中線。將八角茴香油溶于丙酮，用毛細(xì)管點(diǎn)于起始線上呈一長(zhǎng)條形，先用石油醴（30?60C）-醋酸乙酯（85：15）為展開劑展開至薄層板中線處取出，揮去展開劑，再放入石油醴（30?60C）中展開至接近薄層板頂端時(shí)取出，揮去展開劑后，分別用下列幾種顯色劑噴霧顯色。①1%香草醛-硫酸試劑：可與揮發(fā)油產(chǎn)生紫色、紅色等。②熒光素-澳試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有不飽和化合物。③2,4-二硝基苯肌試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有醛或酮類化合物。④0.05%澳甲酚綠乙醇試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有酸性化合物。觀察斑點(diǎn)的數(shù)量、位置及顏色，推測(cè)每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的種類及數(shù)量。【基本操作注意事項(xiàng)】.通過(guò)觀察儲(chǔ)出液的混濁程度來(lái)判斷揮發(fā)油是否提取完全。最初的儲(chǔ)出液中含油量較多，明顯混濁，隨著儲(chǔ)出液中油量的減少，混濁度也隨著降低，至儲(chǔ)出液變?yōu)槌吻迳踔翢o(wú)揮發(fā)油氣味時(shí)，停止蒸儲(chǔ)。.提取完畢，須放冷，待油水完全分層后，再將油層放出，盡量不帶出水分。.進(jìn)行單向二次展開時(shí)，先用極性較大的展開劑展開至中線，然后再用極性較小的展開劑展開。在第一次展開后，應(yīng)將展開劑完全揮干，再進(jìn)行第二次展開，否則將影響第二次展開劑的極性，從而影響分離效果。.揮發(fā)油易揮發(fā)逸失，因此進(jìn)行色譜檢識(shí)時(shí)，操作應(yīng)迅速及時(shí)，不宜久放。.噴灑香草醛-濃硫酸顯色劑時(shí)，應(yīng)于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；用澳甲酚綠試劑顯色時(shí)，應(yīng)避免在酸性條件下進(jìn)行?！舅伎碱}】.從八角茴香中提取分離茴香腦的原理是什么？.利用點(diǎn)滴反應(yīng)檢識(shí)揮發(fā)油的組成優(yōu)點(diǎn)是什么？.單向二次展開薄層色譜法檢識(shí)揮發(fā)油中各成分時(shí)，為什么第一次展開所用的展開劑極性最好大于第二次展開所用的展開劑的極性？單向二次展開薄層色譜法有什么優(yōu)點(diǎn)？實(shí)驗(yàn)五黃柏中小樊堿的提取、分離和鑒別【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握從黃柏中提取小集堿的原理和方法。.掌握小集堿的理化性質(zhì)和鑒別方法.熟TLC的基本操作以及在中藥有效成分提取分離中的應(yīng)用?！緦?shí)驗(yàn)原理】〈〕C〕C]+'o^^^x^.小集堿（berberine）,含量為1.4%-4%（P|黃柏含量較高）QJL^OMe性狀：黃色結(jié)晶，有5.5個(gè)結(jié)晶水，mp14t。（A0Me\OMie溶解性：能緩緩溶于冷水中（1:20）,微溶于冷乙醇（1:100）,易溶于熱水和熱乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸鹽極難溶于水，鹽酸鹽微溶于冷水（1:500）但較易溶于沸水，硫酸鹽和枸檬酸鹽在水中溶解度較大（1:30）,鹽酸小集堿為黃色結(jié)晶，含2分子結(jié)晶水，220c時(shí)分解并轉(zhuǎn)變?yōu)樽丶t色小集紅堿，285c時(shí)完全熔融。.小集堿為季俊堿，其游離型在水中溶解度較大，其鹽酸鹽在水中溶解度較小。利用小集堿的溶解性及黃柏中含黏液質(zhì)的特點(diǎn)，首先用石灰乳沉淀黏液質(zhì)，用堿水提出小集堿，再加鹽酸使其轉(zhuǎn)化為鹽酸小集堿沉淀析出。【實(shí)驗(yàn)儀器與試劑】1.1000、500、100、10ml燒杯，10ml試管，試管架，托盤天平，量筒，三角漏斗，洗瓶，布氏漏斗，電爐，10X20cm薄層板，10X20cm薄層色譜缸，點(diǎn)樣毛細(xì)管，紫外燈（儀），玻棒，牛骨匙，紗布，脫脂棉。2.川黃柏粗粉，濾紙，pH試紙，生石灰，1蜥酸，濃硫酸，濃鹽酸，濃硝酸，次氯酸鈉，10%K氧化鈉，丙酮，乙醇，稀硫酸，鋅粒，食鹽，薄層用硅膠H,0.2%CMC-Na展開劑：苯一乙酸乙酯一異丙醇一甲醇一水（6:3:1.5:1.5:0.3）,甲醇，氨水，鹽酸小集堿對(duì)照品?！緦?shí)驗(yàn)步驟】.提取稱取黃柏粗粉200g,加入1蜥酸600mL攪拌均勻，浸泡過(guò)夜，紗布過(guò)濾?；蚍Q取黃柏粗粉200g,加入1蜥酸200mL攪拌均勻，使?jié)駶?rùn)度合適，放置30min后，裝入滲漉筒內(nèi)，用1懈酸浸泡過(guò)夜，滲漉，速度以5?6mL/min為宜。收集滲漉液500?600mL即可停止?jié)B漉。.取上項(xiàng)提取液，加入石灰乳調(diào)pH11?12,靜置沉淀，脫脂棉濾過(guò)，濾液用濃鹽酸調(diào)pH2?3,再加入溶液量10娟鹽，攪拌使溶解，溶液靜置過(guò)夜，析晶，濾取結(jié)晶，得鹽酸小集堿粗品。.精制將鹽酸小集堿粗品放入25倍量沸水中，于水浴上加熱使溶解，趁熱濾過(guò)，濾液加濃HCI調(diào)pH2左右，靜置過(guò)夜，濾取結(jié)晶，80c以下干燥，得精制鹽酸小集堿。.鹽酸小集堿的鑒別(1)取鹽酸小集堿少許，加漂白粉(或次氯酸鈉)少許，即顯櫻紅色。(2)取鹽酸小集堿少許，加稀硫酸2mL使溶解，加濃硝酸1?2滴，即顯櫻紅色。(3)取鹽酸小集堿約0.05g,溶于5mL熱水中，加入10%NaOH液2mL顯橙色。溶液放冷，加入丙酮約0.5mL,放置，有黃色丙酮小集堿結(jié)晶析出。(4)取鹽酸小集堿少許，加水2mL溶解后，加鋅粉少許，再分?jǐn)?shù)次加入濃硫酸數(shù)滴，振搖，每隔10min加一次，觀察其黃色是否消退。(5)薄層色譜鑒別吸附劑：硅膠H-CMC-N?。展開劑：苯—乙酸乙酯—異丙醇—甲醇—水(631.5:1.5:0.3)，氨蒸氣預(yù)平衡10min后展