常用動物實驗技術簡介

動物實驗安全與常用技術

西部實驗動物聯(lián)席會議秘書長四川省科技廳動管辦專委會委員成都達碩實驗動物有限公司總經(jīng)理

鐘浩fh17956@163.com引言實驗動物：指經(jīng)人工飼養(yǎng)、繁育，對其攜帶的微生物及寄生蟲實行控制，具有明確遺傳背景，應用于科學研究、教學、生產和檢驗等方面的動物。實驗用動物包括：實驗動物，野生動物，經(jīng)濟動物。如大白鼠、小白鼠、裸鼠、豚鼠、家兔、比格犬、恒河猴、小型豬、沙鼠等。實驗動物是一切生命科學的支撐條件，廣泛應用于醫(yī)藥研發(fā)、教學實驗、藥品生產、生物檢驗等方面。實驗動物為人類健康和社會進步作出了巨大貢獻。引言引言目前我國實驗動物生產量已達2300萬只(2013)，使用量高達2100萬只，高于歐盟25國1210萬只的總和。我國實驗動物環(huán)境設施規(guī)模和質量不斷提升，實驗動物進出口越來越頻繁，新品系不斷引進，使得我國實驗動物資源日趨豐富。實驗動物在生產、使用過程中，存在感染、繁殖病原體的可能以及向環(huán)境擴散病原微生物的危險，對人和環(huán)境造成生物安全危害。

實驗動物工作中的危害源

實驗動物人獸共患病實驗性病原體克隆機轉基因動物的潛在生物危害動物實驗設施設備操作運輸管理措施1、環(huán)保管理廢氣管理污水管理墊料管理尸體處置試劑管理實驗材料管理

常見人獸共患病源及防護

隔離、檢疫、免疫、消毒漢坦病毒弓形體沙門氏菌狂犬病毒布氏桿菌鉤端螺旋體志貨氏菌猴B病毒結核桿菌引言2006年長春市某高校中藥系實驗室發(fā)生學生感染流行性出血熱事件，76名學生中有10名學生受感染。整個事件起因也是因實驗操中被動物抓咬傷而造成的。廣州市2007年一起流行性出血熱實驗室感染事件2010年12月19日，東北農業(yè)大學應用技術學院畜禽生產教育0801班30名學生在動物醫(yī)學學院實驗室進行“羊活體解剖學實驗”，2011年1月開始，連續(xù)高燒很多天，四肢乏力，關節(jié)疼痛，后確診為感染布魯氏菌病，2011年3月14日至5月25日，東北農業(yè)大學共有27名學生和一名教師被確診感染布魯氏菌病。引言

實驗動物生物安全問題已引起國、內外高度重視。2001年我國實施新版《實驗動物國家標準》，其中規(guī)定：實驗用大小鼠的等級提高到SPF級。2004年《北京市實驗動物管理條例》，修改和增加了實驗動物生物安全方面內容，2006年第二屆北京實驗動物科學國際論壇上，日本國立大學生物安全委員會委員長佐藤浩教授提出，生物安全已成為實驗動物研究中不容忽視的重要因素。實驗動物生物安全:是對實驗動物可能產生的潛在風險或現(xiàn)實危害的防范和控制。由實驗動物造成的各種風險和危害包括：

生產和使用實驗動物中的各個環(huán)節(jié)，如實驗動物的引種、保種、繁育、運輸、進出口，使用實驗動物(包括感染和非感染實驗動物)進行動物實驗、從事科研活動等過程中實驗動物都有可能造成各種危害。

引言實驗動物生物安全的條件與保障國家、地方法律、法規(guī)合格的實驗動物與設施嚴格、標準化的操作廢棄物的正確處理實驗動物生物安全應急預案

引言國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準1、《實驗動物管理條例》（1988）2、《實驗動物質量管理辦法》（修訂版）（2001）3、《實驗動物許可證管理辦法（試行）》（2001）4、《實驗動物種子中心管理辦法》5、《省級實驗動物質量檢測機構技術審查準則》6.《四川省實驗動物管理條例》2013年5月28日國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準1《實驗動物微生物等級及監(jiān)測》2《實驗動物寄生蟲等級及監(jiān)測》3《實驗動物環(huán)境及設施》4《哺乳類實驗動物的遺傳質量控制》5《實驗動物配合飼料通用質量標準》6《實驗動物配合飼料衛(wèi)生標準》國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準實驗動物生產許可證

實驗動物使用許可證

國家或地方實驗動物主要法規(guī)、標準實驗動物的生產和使用許可證必須經(jīng)監(jiān)測機構檢測合格后發(fā)給單位和個人，嚴禁轉借、轉讓和出租或者超許可證范圍使用，如果出現(xiàn)上述情況，科技廳主管部門將暫扣許可證，責令限期整改；，對無證使用實驗動物的機構與個人將實施行政處罰，情節(jié)嚴重的將依法追究民事或刑事責任。實驗動物分為四級：一級為普通級（cv）；二級為清潔級（cl）；三級為無特定病原體（SPF）級；四級為無菌級（包括悉生動物）。目前比格犬、恒河猴、小型豬等大動物多為普通級，大、小鼠均為清潔級以上，豚鼠、家兔等有普通級、清潔級、SPF級。國際上將實驗動物分為三個級別；SPF級以上動物種群來源于剖腹產動物，微生物、寄生蟲按國標嚴格控制。實驗動物設施分為三級：一級為開放系統(tǒng)；二級為屏障系統(tǒng)；三級為隔離系統(tǒng)。實驗動物及其設施的等級隔離系統(tǒng)(Insulationsystem)

是以隔離器(Isolator)為主體及其附屬裝置組成的飼養(yǎng)系統(tǒng)。用作飼養(yǎng)無菌動物和已知菌動物。分正、負壓隔離器。

屏障系統(tǒng)(Barriersystem)

這是清潔級、SPF級動物生產或實驗的設施。人、實驗動物、飼料、飲水、墊料、空氣及其它物品均需進行嚴格的微生物控制。人流、物流及動物流要分開。開放系統(tǒng)(Opensystem)

只能進行普通級實驗動物的生產與實驗。實驗動物及其設施的等級實驗動物及其設施的等級不同等級動物：必須由省級實驗動物監(jiān)測機構監(jiān)測合格，發(fā)放“實驗動物質量監(jiān)測保合格證”。動物實驗中所用動物必須為質量合格動物。實驗動物及其設施的等級隔離環(huán)境以隔離器(Isolator)為主體及其附屬裝置組成的飼養(yǎng)系統(tǒng)。用作飼養(yǎng)無菌動物和已知菌動物。潔凈度達到一百級。屏障環(huán)境

主要用于進行SPF級、清潔級的大鼠、小鼠等小動物實驗（配備飼養(yǎng)室及操作室）。潔凈走廊SPF動物實驗室實驗動物及其設施的等級實驗動物及其設施的等級

屏障環(huán)境動物實驗設施設備

實驗動物及其設施的等級

屏障環(huán)境動物實驗設施設備

實驗動物及其設施的等級

屏障環(huán)境動物實驗設施設備普通環(huán)境

主要用于進行兔、貓、狗、猴等大動物實驗飼養(yǎng)（配備飼養(yǎng)室及操作室）。實驗動物及其設施的等級實驗動物及其設施的等級

屏障環(huán)境動物實驗設施設備實驗動物及其設施的等級

屏障環(huán)境動物實驗設施設備

涉及傳染性、中毒性、放射性、致癌性、致突致畸及致死性實驗等應在有特殊要求的生物安全實驗室中進行，應根據(jù)生物安全防護的要求進行建筑或改造，按照有關規(guī)定執(zhí)行。WHO將動物生物安全實驗室分為四級：動物生物安全實驗室一級(ABSL-1)

動物生物安全實驗室二級(ABSL-2)

動物生物安全實驗室三級(ABSL-3)

動物生物安全實驗室四級(ABSL-4)

實驗動物及其設施的等級實驗動物及其動物實驗的操作實驗動物生產的生物安全：實驗動物生產過程中，對實驗動物可能造成的各種風險和危害的防范和控制。實驗動物生產，包括實驗動物的引種、保種、繁育、運輸、進出口等過程。定期進行嚴格的微生物指標監(jiān)測。實驗動物引種：實驗動物種子來源于國家實驗動物保種中心，遺傳背景清楚，質量符合國家標準。

實驗動物保種和繁育：必須由國家或行業(yè)主管部門認可的單位進行。實驗動物及其動物實驗的操作適用于SPF/無菌動物飼養(yǎng)或運輸小鼠飼養(yǎng)籠大鼠飼養(yǎng)籠實驗動物運輸：運輸實驗動物時，所使用的轉運工具和籠器具，應當符合所運實驗動物的微生物和環(huán)境質量控制標準。不同品種、品系、性別和等級的實驗動物，不得在同一籠盒內混合裝運。實驗動物及其動物實驗的操作實驗動物及其動物實驗的操作實驗動物使用的生物安全：動物及飼養(yǎng)要求:1、引進動物進行實驗必須具備實驗動物質量合格證,隔離檢疫一周。2、堅持衛(wèi)生消毒制度：定期對動物房舍和飼養(yǎng)用具進行消毒。3、飼養(yǎng)管理人員要定期做健康檢查。實驗操作要求：動物實驗人員實驗操作過程中做好防護，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套;嚴格按標準操作規(guī)程進行。實驗動物及其動物實驗的操作動物實驗的常用操作方法一、大鼠的抓取與固定二、小鼠的抓取與固定三、大、小鼠的灌胃四、大、小鼠尾靜脈注射五、小鼠腹腔注射

小鼠的抓取與固定先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或實驗臺向后拉。

在鼠向前爬行時，左手拇指和食指抓住小鼠兩耳和頸部皮膚。

將鼠體置于左手心中，把后肢拉直。以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。

大鼠的抓取與固定先用右手抓取大鼠尾提起，置于鼠籠或實驗臺向后拉。鼠向前爬行時，左手拇指和食指抓住大鼠的兩耳和頸部皮膚。

在鼠向前爬行時，用左手拇指和食指抓住大鼠的兩耳和頸部皮膚。以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。如果

大鼠體積太大,可由第二個人協(xié)助固定后肢。

大、小鼠的灌胃

小鼠灌胃針灌胃時將灌胃針連接在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動物固定。體位為頭高尾低。右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿口腔頂壁和咽后壁徐徐插入食道。斜體位也可以。但一定要頭高尾低。大鼠和小鼠一樣的操作手法。大鼠和小鼠一樣的操作手法。注意：針插入時應無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應立即停止進針或將針拔出，以免損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當灌胃針插入小鼠3－4cm，大鼠或豚鼠4-6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2-1ml，大鼠1-4ml，豚鼠為1-5ml。大、小鼠尾靜脈注射小鼠固定器。將小鼠放進固定器里。露出尾巴。用45～50℃的溫水浸潤尾部半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張和使表皮角質軟化。用食指和中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，大拇指再輕輕按住尾部。

右手持注射器，使針頭與靜脈平行（小于30度角），從尾下四分之一處（約距尾尖2-3厘米）處進針。大鼠和小鼠一樣的操作手法。大鼠和小鼠一樣的操作手法。大鼠和小鼠一樣的操作手法。針頭進到血管后，會見到血回流到針頭。先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭確實已進入靜脈，可繼續(xù)注入。注射