GMP質(zhì)量體系氯霉素滴耳液中間產(chǎn)品檢驗(yàn)操作規(guī)程

目的：為檢驗(yàn)氯霉素滴耳液中間產(chǎn)品規(guī)定一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的程序，以便獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。范圍：適用于氯霉素滴耳液中間產(chǎn)品的檢驗(yàn)。職責(zé)：檢驗(yàn)員，檢驗(yàn)室主任對(duì)本規(guī)程實(shí)施負(fù)責(zé)。規(guī)程：1、性狀：本品為微黃色的粘稠澄清液體，味極苦，能與水任意混合。2、鑒別：2.1試劑與儀器2.1.11%氯化鈣溶液 2.1.2鋅粉2.1.3苯甲酰氯2.1.4三氯化鐵2.1.5氯仿2.1.6乙醇2.1.7氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品2.1.8電子天平(萬(wàn)分之一克)2.1.9氯仿一甲醇(85:15)2.1.10氯霉素二醇物對(duì)照品2.1.11硅膠GF254薄層板2.1.12紫外光燈2.1.13層析缸2.1.14量筒2.1.15燒杯2.1.16容量瓶2.1.17單、雙標(biāo)移液管2.2項(xiàng)目與步驟2.2.1顯色鑒別：取本品4ml，加1%氯化鈣溶液3ml與鋅粉50mg，置水浴上加熱10分鐘，傾取上清液，加苯甲酰氯約0.1ml，立即強(qiáng)烈振搖1分鐘，加三氯化鐵試液0.5ml與氯仿2ml，振搖，水層顯紫紅色。2.2.2薄層色譜法鑒別取本品20ml，用氯仿提取4次，每次25ml，合并提取液，置水浴上蒸干，取殘?jiān)c氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品各20mg分別置10ml容量瓶中，分別加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，按薄層色譜法按(SOP-QC-304-00)，分別吸取上述兩種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿一甲醇(85:15)為展開(kāi)劑，展開(kāi)約10cm后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的主斑點(diǎn)應(yīng)相同。3檢查3.1試劑與儀器3.1.1乙醇3.1.2氯霉素二醇物對(duì)照品.3.1.3硅膠GF254薄層板3.1.4氯仿一甲醇(85:15)3.1.5層析缸3.1.6電子天平(萬(wàn)分之一克)3.1.7紫外光燈3.1.8微量注射器(50ul)3.1.9注射器(10ml已標(biāo)化)3.2項(xiàng)目與步驟3.2.1二醇物：取本品，加乙醇制成每1ml中含1.25mg的溶液，作為供試品溶液；另精密稱取氯霉素二醇物對(duì)照品20mg置10ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(SOP-QC-304-00)檢驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各20ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿一甲醇(85:15)為展開(kāi)劑，展開(kāi)約10cm后，晾干，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品溶液如顯與對(duì)照品溶液相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其熒光強(qiáng)度與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更強(qiáng)(5%)為符合規(guī)定。4其他項(xiàng)目與實(shí)驗(yàn)步驟4.1試劑與儀器4.1.1注射器(標(biāo)化)4.1.2量筒(50ml)4.2.1裝量：取供試品5支，按最低裝量檢查法(SOP-QC-332-00)，檢查每個(gè)容器內(nèi)容物裝量，并求出平均裝量，應(yīng)符合規(guī)定。如有1個(gè)容器裝量不符合規(guī)定，則另取5支復(fù)試，應(yīng)全部符合規(guī)定。5含量測(cè)定：精密量取本品約相當(dāng)于氯霉素25mg，置25ml容量瓶中，用滅菌水稀釋刻度，搖勻，照抗生素微生物檢定法（SOP-QC-339-00）操作。5.1試劑與儀器5.1.1培養(yǎng)基II(6.5-6.6)5.1..2磷酸鹽緩沖液(PH6.0)5.1.3藤黃微球菌懸液5.1.4刻度移液管5.1.5容量瓶(50ml,100ml)5.1.6滅菌刻度吸管.5.1.7雙碟5.1.8陶瓦蓋5.1.9鋼管5.1.10電熱隔水培養(yǎng)箱5.1.11稱量瓶5.1.12滅菌滴管5.1.13電子天平(萬(wàn)分之一克)5.1.14CHB-1抗生素效價(jià)測(cè)量?jī)x5.1.15超凈工作臺(tái)5.1.16鋼管放置器5.1.17酒精燈5.1.18三角燒瓶(100ml，150ml)5.1.19量筒(50ml)5.1.20接種棒5.1.21鑷子5.1.22氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品6.2檢驗(yàn)步驟6.2.1培養(yǎng)基的制備：稱取抗生素檢定培養(yǎng)基II(PH6.5-6.6)28.5g，加1L蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌30分鐘。6.2.2磷酸鹽緩沖液(PH6.0)制備：稱取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使成1000ml，濾過(guò)，經(jīng)121℃蒸氣滅菌30分鐘，備用。6.2.3滕黃微球菌懸液制備:取藤黃微球菌工作菌種的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用1ml培養(yǎng)基Ⅲ將菌苔洗下，用吸管移至盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶中，將菌液布滿培養(yǎng)基表面，將培養(yǎng)瓶反放于培養(yǎng)箱中在26～27℃培養(yǎng)24小時(shí)后，取出，用吸管吸取培養(yǎng)基Ⅲ5ml至培養(yǎng)瓶中，將菌苔洗下，合并菌液至滅菌大管中備用，菌液在冰箱中保存，可使用1～2日。6.2.4標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：6..2.4.1將標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱取出，使與室溫平衡，準(zhǔn)確稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品約25mg，置25ml容量瓶中，加乙醇2.5ml溶解，用滅菌水稀釋至刻度，備用。6.2.4.2高劑量標(biāo)準(zhǔn)品的制備：精密吸出6.2.4.1制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液3ml置50ml容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液PH（6.0）稀釋至刻度，備用。6.2.4.3低劑量標(biāo)準(zhǔn)品的制備：精密吸出6.2.4.1制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液3ml，置100ml容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(PH6.0)稀釋至刻度，備用。6.2.5樣品溶液的制備：6.2.5.1取樣品10支混合，精密吸取樣品10ml置25ml容量瓶中，加滅菌水稀釋至刻度，備用。6.2.5.2高劑量樣品溶液的制備：精密吸取6.2.5.1制備的樣品溶液3ml，置50ml容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(PH6.0)稀釋至刻度，備用。6.2.5.3低劑量樣品溶液的制備：精密吸取6.2.5.1制備的樣品溶液3ml，置100ml容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(PH6.0)稀釋至刻度，備用。6.2.6雙碟的制備：按抗生素微生物檢定法(SOP-QC-339-00)操作。6.2.7小鋼管的放置：按抗生素微生物檢定法(SOP-QC-339-00)操作。6.2.8滴碟、培養(yǎng)與測(cè)量：按抗生素微生物檢定法(SOP-QC-339-00)操作。7記錄與計(jì)算：用電腦測(cè)試，計(jì)算、統(tǒng)計(jì)分析的打印紙附于記錄后。本品含氯霉素(C11H12L2N2O5)不得少于標(biāo)示量的85.0%為符合規(guī)定。PT=P×按下式計(jì)算氯霉素的最終效價(jià):PT為樣品