環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠睪丸發(fā)育及精子質(zhì)量的影響,藥理學(xué)論文

環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠睪丸發(fā)育及精子質(zhì)量的影響,藥理學(xué)論文摘要：本文探究了環(huán)磷酰胺對(duì)雄性小鼠睪丸標(biāo)志酶、精子質(zhì)量等關(guān)于生殖毒性的影響。結(jié)果顯示,環(huán)磷酰胺組小鼠體重顯著降低,但是睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)不變;精子的畸形率顯著上升而精子密度和活力不變;睪丸標(biāo)志酶:實(shí)驗(yàn)組乳酸脫氫酶與對(duì)照組比顯著降低,但是-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶卻顯著升高了?？偟貋碇v,環(huán)磷酰胺對(duì)精子的質(zhì)量有明顯的毒副作用,對(duì)生殖系統(tǒng)有不利影響。本文關(guān)鍵詞語：環(huán)磷酰胺;精子質(zhì)量;睪丸標(biāo)志酶;Abstract：Thisstudyinvestigatedtheeffectsofcyclophosphamide(CP)ontesticularenzymeandspermqualityinmalemice.Resultsshowedthatascomparedwiththecontrol,theweightofmiceintheCPgroupwassignificantlyreducedbutthetestisindexandepididymisindexwereunchanged;thespermabnormalityratesignificantlyincreasedwhilethespermdensityandviabilitykeptstable;Testismarkerenzyme:lactatedehydrogenaseinCPgroupdecreasedbut-glutamyltransferase(-GT)increasedwhencomparedwiththecontrol.Inconclusion,CPhassignificanttoxicologicaleffectsonthequalityofspermandhasadverseeffectsonthereproductivesystem.Keyword：cyclophosphamide;spermquality;testismarkerenzyme;環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CP)是一種常用抗腫瘤藥,用于肺癌、結(jié)腸癌等疾病的治療。一般來講CP會(huì)特異性靶向癌細(xì)胞,但對(duì)正常細(xì)胞也有毒害作用,如白細(xì)胞減少,脫發(fā)等,而且對(duì)生殖系統(tǒng)的影響十分大。睪丸生精上皮細(xì)胞分裂頻率高,對(duì)化學(xué)治療藥物高度敏感[1]。臨床觀察發(fā)現(xiàn),CP的使用可致男性性腺功能減退,睪丸萎縮精子數(shù)量變少[2]。動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)也表示清楚,連續(xù)注射CP可導(dǎo)致體重、睪丸和附睪重量顯著減輕,精子畸形率顯著升高[3-4]。盡管已有很多文獻(xiàn)報(bào)道CP對(duì)于哺乳動(dòng)物精子質(zhì)量的影響,但沒有專門對(duì)睪丸標(biāo)志酶影響的報(bào)道。將精子質(zhì)量與睪丸標(biāo)志酶活性進(jìn)行結(jié)合分析,對(duì)于確定CP的生殖系統(tǒng)毒性及可能的作用機(jī)制具有重要意義。本文以昆明小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究腹腔注射CP對(duì)小鼠睪丸發(fā)育、睪丸標(biāo)志酶活性以及精子質(zhì)量的影響。1、材料與方式方法1.1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明雄性小鼠均重25.291.14g,CL級(jí)別購自金華防疫中心。1.2、分組及實(shí)驗(yàn)方式方法小鼠在動(dòng)物房中適應(yīng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。20只小鼠隨機(jī)分為兩組,每組10只,記錄初始體重。實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射CP(40mg-1kg-1d-1),對(duì)照組小鼠腹腔注射等量滅菌生理鹽水。連續(xù)7天染毒后停止注射并進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)。35天后禁食不禁水24小時(shí),記錄體重。隨后處死小鼠取出睪丸和附睪,睪丸指數(shù)=(睪丸質(zhì)量/體重)*100%、附睪指數(shù)=(附睪質(zhì)量/體重)*100%。將取出的睪丸裝在1.5mL離心管中,置于-20℃冰箱保存,待用。1.2.1、精子收集將附睪迅速置于2ml生理鹽水的干凈血清瓶中,用探針將附睪剝離置于37.0℃恒溫箱中孵育10min,使精子游出,過200目不銹鋼濾網(wǎng)后所得的精液分為三份,分別用于測(cè)精子活力、密度和精子的畸形率。1.2.2、精子檢測(cè)畸形率檢測(cè)將精子懸液進(jìn)行涂片,用2%伊紅染色30min,晾干用甲醇固定2min,用蒸餾水沖洗晾干后置于顯微鏡下,記錄畸形數(shù)目比方胖頭、雙尾雙頭、缺尾有卷尾、香蕉頭、無鉤狀等,并計(jì)算畸形率,畸形率=畸形數(shù)/1000*100%。、表1環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠體重、睪丸、附睪重量的影響(*與對(duì)照比:p0.05)、表2環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠精子畸形率、活力、密度的影響圖1CP對(duì)小鼠睪丸標(biāo)志酶LDH、-GT的影響、活力檢測(cè)取適量精液于載玻片上,在顯微鏡下觀察并記錄直線運(yùn)動(dòng)、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)、振擺運(yùn)動(dòng)的精子數(shù),精子活力=直線運(yùn)動(dòng)數(shù)/(直線運(yùn)動(dòng)數(shù)+旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)數(shù)+振擺運(yùn)動(dòng)數(shù))*100%。密度檢測(cè)取精液用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),計(jì)算精子密度。1.2.3、睪丸酶活性測(cè)定按南京建成生物有限公司提供的試劑盒講明書進(jìn)行乳酸脫氫酶(LDH)和-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(-GT)的測(cè)定。2、結(jié)果與分析2.1、小鼠一般情況與對(duì)照組相比,CP組的小鼠體重顯著降低(p0.05),睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)則沒有明顯變化(p0.05),詳細(xì)見表1。2.2、小鼠精子活力、密度以及畸形率與對(duì)照組相比(表2),實(shí)驗(yàn)組小鼠精子的畸形率顯著上升(p0.01),而精子活力和密度則顯示降低趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.3、小鼠睪丸標(biāo)志酶的活力由圖1可知,CP組-GT較對(duì)照組有顯著上升(p0.05),同時(shí)LDH較對(duì)照組顯著下降(p0.05)。3、討論睪丸是產(chǎn)生精子和分泌雄激素的器官,附睪則是精子發(fā)育、成熟的搖籃,具有吸收分泌和濃縮功能[5]。通過實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚩吹?CP處理組體重明顯降低,但睪丸指數(shù)與附睪指數(shù)未見顯著差異,講明在CP影響下,睪丸和附睪的重量減輕程度與體重減輕程度一樣,因而其臟器系數(shù)維持不變。LDH是介入糖酵解和糖異生中催化乳酸和丙酮酸之間氧化復(fù)原反響的酶,主要位于生精小管內(nèi)介入能量代謝及生精上皮成熟,是支持細(xì)胞、睪丸間質(zhì)細(xì)胞及生精細(xì)胞成熟的標(biāo)志酶之一。其活力的改變(增加或降低)會(huì)導(dǎo)致睪酮分泌減少,精細(xì)胞生長(zhǎng)因子減少使精子發(fā)生及發(fā)育受阻[6]。在本實(shí)驗(yàn)中LDH活性顯著下降,提示CP具有損害曲精管內(nèi)精子的產(chǎn)生、發(fā)育、成熟的潛在危害。-GT也是重要的睪丸標(biāo)志酶,具有為發(fā)育中的精子提供營養(yǎng)和保衛(wèi),調(diào)節(jié)生精細(xì)胞周期的作用[7]。在本研究中,CP處理組的-GT活性顯著升高,這與文獻(xiàn)報(bào)道的毒物刺激下睪丸-GT活性顯著下降不同,講明在本實(shí)驗(yàn)濃度下,小鼠可能能夠通過代償性增加-GT的活性來緩解CP對(duì)睪丸(包括精子)的毒害作用。結(jié)合小鼠精子密度、精子活力和LDH、-GT酶活性不難看出,CP固然降低了LDH酶活性,具有影響精子發(fā)生、發(fā)育、成熟的潛在危害,但同時(shí)CP也提高了-GT酶活性,這可能在一定程度上緩解了LDH酶降低帶來的損傷,因而,最終在綜合作用下,精子密度和精子活力維持不變。除了密度和活力,形態(tài)也是精子質(zhì)量的一個(gè)重要標(biāo)志。在本研究中,實(shí)驗(yàn)組的精子畸形率顯著高于對(duì)照組,華而不實(shí)的原因可能就與CP的基因毒性有關(guān)[8]。以下為參考文獻(xiàn)：[1]Torabi,F.,MalekzadehShafaroudi,M.andRezaei,N.Combinedprotectiveeffectofzincoxidenanoparticlesandmelatoninoncyclophosphamide-inducedtoxicityintesticularhistologyandspermparametersinadultWistarrats[J].Internationaljournalofreproductivebiomedicine(Yazd,Iran),202115(7):403-412.[2]Smart,E.,Lopes,F.,Rice,S.,Nagy,B.,Anderson,R.A.,Mitchell,R.T.andSpears,N.Chemotherapydrugscyclophosphamide,cisplatinanddoxorubicininducegermcelllossinaninvitromodeloftheprepubertaltestis[J].ScientificReports,2021(8).[3]賈慶軍,劉天鵬,郭魁亮,等.環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠遺傳和生殖毒性影響的研究(2)對(duì)雄性小鼠生殖細(xì)胞的影響[J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,4(2):70-71.[4]高學(xué)勇,王瑋,韓咪莎,等.環(huán)磷酰胺對(duì)大鼠睪丸和附睪的影響[J].解剖學(xué)研究,2018,31(1):25-43.[5]張海培,岳宗相,曲曉偉,等.金匱腎氣丸拮抗環(huán)磷酰胺對(duì)大鼠生殖毒性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國男科學(xué)雜志,2018,25(8):20-31.[6]劉丹薇,潘衛(wèi),徐國賓.1-磷酸鞘氨醇