實(shí)體腫瘤細(xì)胞免疫治療1

腫瘤腫瘤（tumour）是指機(jī)體在各種致瘤因子作用下，局部組織細(xì)胞增生所形成的新生物，因?yàn)檫@種新生物多呈占位性塊狀突起，也稱贅生物。第一頁，共32頁。第一章腫瘤細(xì)胞免疫治療概況及發(fā)展史第二頁，共32頁。第三頁，共32頁。三大常規(guī)治療腫瘤治療理想方法——應(yīng)是在特異性清除腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，正常組織不受損。第四頁，共32頁。腫瘤的第四種治療模式

腫瘤生物治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。腫瘤生物治療是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法，來激發(fā)，增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。腫瘤生物治療是繼手術(shù)、放療和化療之后的第四大腫瘤治療技術(shù)。第五頁，共32頁。腫瘤的生物治療模式包括細(xì)胞性腫瘤疫苗治療過繼性細(xì)胞免疫治療細(xì)胞因子治療分子靶向治療放免靶向治療腫瘤基因治療生物化療第六頁，共32頁。

1902年Leyden和Blumen-thal就首先進(jìn)行了瘤苗主動(dòng)特異性免疫治療(ASI)的臨床試驗(yàn)。1959年，Graham使用自身瘤苗治療232婦科腫瘤患者的實(shí)驗(yàn)總結(jié)：自身腫瘤疫苗能夠用于治療患者，不良反應(yīng)少見；但這種治療方法并不能有效改變疾病的自然病程，因此不推薦使用這種方法。一、細(xì)胞性腫瘤疫苗治療第七頁，共32頁。經(jīng)歷挫敗，但人類沒有放棄對腫瘤疫苗的研究。

隨著人類腫瘤存在者特異性的抗原（TSA）被證實(shí)和人類腫瘤腫瘤相關(guān)抗原（TAA）基因克隆的成功，腫瘤的主動(dòng)免疫再次被重視。

腫瘤疫苗主要有：細(xì)胞性疫苗、可溶性抗原疫苗、基因疫苗三大類細(xì)胞性疫苗包括：腫瘤疫苗、樹突狀細(xì)胞（DC）疫苗。一、細(xì)胞性腫瘤疫苗治療第八頁，共32頁。（一）腫瘤細(xì)胞疫苗是將完整的腫瘤細(xì)胞經(jīng)物理或化學(xué)方法處理以及基因修飾后接種于患者，其相關(guān)特異性抗原誘導(dǎo)患者免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng)。1、自體腫瘤細(xì)胞：（帶有全部腫瘤抗原、具有正常組織相同的HLA，因此無需分離TSA且不會(huì)引發(fā)集體的免疫排斥反應(yīng)，是最理想的腫瘤抗原。但自身腫瘤難以獲取。）2、同種異體腫瘤細(xì)胞系：優(yōu)點(diǎn)-來源充足；缺點(diǎn)-1、HLA配型不同；2、腫瘤細(xì)胞抗原性存在差異。第九頁，共32頁。單獨(dú)使用腫瘤疫苗難以產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的免疫應(yīng)答，免疫佐劑的使用極大的改善這種情況（弗式完全佐劑、新城雞瘟病毒（NDV）、卡介苗（BCG）、明礬、短小棒狀桿菌等）（例如：1986年德國癌癥治療中心的Schriimacher應(yīng)用禽類新城雞瘟病毒（NDV）處理自身腫瘤細(xì)胞，然后回輸給患者，這種瘤苗沿用至今。逐步應(yīng)用于結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性和色素瘤等，取得一定療效。（一）腫瘤細(xì)胞疫苗第十頁，共32頁。瘤細(xì)胞缺乏MHCⅡ類分子和B7復(fù)合刺激分子，不能分泌增強(qiáng)機(jī)體免疫力的細(xì)胞因子；腫瘤疫苗刺激免疫反應(yīng)有限。人們對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行基因修飾（CD80、CD86的基因），為T細(xì)胞活化提供第二信號，有效的抑制了腫瘤細(xì)胞的外周免疫耐受。近年，白介素-Ⅱ、白介素-Ⅻ、GM-CSF等基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，通過細(xì)胞因子表達(dá)，改善腫瘤微局部微環(huán)境增強(qiáng)T細(xì)胞抗腫瘤的免疫效應(yīng)。（一）腫瘤細(xì)胞疫苗第十一頁，共32頁。GVAX腫瘤疫苗（GM-CSF）基因修飾的腫瘤疫苗。第十二頁，共32頁。（二）DC細(xì)胞疫苗

有效的腫瘤細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）應(yīng)答需要專職抗原呈遞細(xì)胞（APC）來激活。DC細(xì)胞是高效的專職性APCDC疫苗有：1、直接應(yīng)用的DC疫苗；2、基因修飾的DC疫苗第十三頁，共32頁。1、直接應(yīng)用的DC疫苗體外DC細(xì)胞培養(yǎng)同時(shí)用腫瘤抗原致敏DC。使其分化成熟，將攜帶腫瘤抗原信息的DC回輸給腫瘤患者體內(nèi)。常用的致敏DC的腫瘤抗原包括：滅活的瘤細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞裂解產(chǎn)物、洗脫肽、腫瘤mRNA、腫瘤DNA、人工合成的腫瘤抗原肽等這種DC腫瘤疫苗既可以作為單一的腫瘤抗原載體，也可作為多種乃至整個(gè)腫瘤細(xì)胞的抗原載體。第十四頁，共32頁。1996年Hsu等用與腫瘤特異性蛋白結(jié)合的DC疫苗對4名濾泡性非霍奇金B(yǎng)淋巴瘤進(jìn)行試驗(yàn)。1999年Tjoa等用前列腺特異性膜抗原（PSMA）致敏的DC疫苗治療對激素耐受的前列腺癌患者。由于這類疫苗只能激活單克隆的CTL應(yīng)答，由于腫瘤異質(zhì)性和遺傳不穩(wěn)定性等因素存在，腫瘤特異抗原尚不清楚，決定了這類疫苗局限性。1、直接應(yīng)用的DC疫苗第十五頁，共32頁。隨后，人們使用含多種抗原的腫瘤細(xì)胞裂解物、腫瘤細(xì)胞的酸洗脫物來致敏DC細(xì)胞，或使DC細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞直接融合的方法產(chǎn)生多種抗腫瘤細(xì)胞抗體，提高DC疫苗的有效性和使用廣泛性。Liau利用酸提取法從神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中提取腫瘤洗脫肽，體外沖擊DC后回輸神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型老鼠體內(nèi)，可延長其壽命。1、直接應(yīng)用的DC疫苗第十六頁，共32頁。Wen等使用自體骨髓瘤細(xì)胞裂解物脈沖DC后自體回輸治療多發(fā)性骨髓瘤；Kugler等用融合疫苗治療進(jìn)展期腎癌均取得較好療效。1、直接應(yīng)用的DC疫苗第十七頁，共32頁。2、基因修飾的DC疫苗通過基因重組技術(shù)，用逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等載體，將外源性目的基因轉(zhuǎn)染到DC中，改變DC的性能，然后回輸至患者體內(nèi)。Yang等用脂質(zhì)體介導(dǎo)編碼人黑色素相關(guān)抗原gp100的基因?qū)隓C中，可激發(fā)CD4+和CD8+細(xì)胞反應(yīng)，其誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)優(yōu)于多肽致敏的DC和為致敏的DC瘤苗。Zitvogel通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進(jìn)行小鼠IL-12轉(zhuǎn)染同源DC的試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其誘導(dǎo)的抗腫瘤特異性CTL反應(yīng)顯著增強(qiáng)。第十八頁，共32頁。過繼性細(xì)胞免疫治療是經(jīng)體外刺激培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞后過繼回輸給腫瘤病人，進(jìn)行腫瘤治療的方法，建立于T細(xì)胞活化因子IL-2的發(fā)現(xiàn)之后。20世紀(jì)80十年代，Rosenberg等觀察到，患非免疫系統(tǒng)腫瘤的動(dòng)物，給予重組IL-2治療之后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的淋巴細(xì)胞可以調(diào)節(jié)腫瘤的消退和轉(zhuǎn)移。此后人們先后培養(yǎng)出：淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）性細(xì)胞腫瘤侵潤淋巴細(xì)胞（TIL）細(xì)胞CD3單抗激活的殺傷性（CD3AK）細(xì)胞細(xì)胞因子激活的殺傷（CIK）性細(xì)胞

………..二、過繼性細(xì)胞免疫治療第十九頁，共32頁。（一）LAK細(xì)胞20世紀(jì)80年代，美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）癌癥研究所Rosenberg等研究發(fā)現(xiàn)小鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)T細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)后,抗瘤活性明顯增強(qiáng)。第二十頁，共32頁。Grimm和Rosenberg等將這種由IL-2激活的具有殺瘤活性的NK和T細(xì)胞命名為淋巴因子激活的殺傷（LAK）性細(xì)胞。1984年，LAK細(xì)胞用于黑色素瘤細(xì)胞系B16小鼠腫瘤轉(zhuǎn)移模型的治療，結(jié)果是肺轉(zhuǎn)移灶明顯縮小且存活率升高。同年11月研究組經(jīng)FDA批準(zhǔn)，首次將LAK用于臨床治療。25例常規(guī)治療無效且已發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的腫瘤病人回輸rIL-2處理的自體LAK細(xì)胞，11人治療有效，腫瘤縮小達(dá)50%以上，其中一例轉(zhuǎn)移性和色素瘤的病人完全緩解達(dá)10個(gè)月之久。1988年該研究小組總結(jié)了IL-2與LAK細(xì)胞聯(lián)合治療214例腫瘤患者，16例腫瘤患者轉(zhuǎn)移灶完全消退，26例患者腫瘤縮小50%以上；適用于轉(zhuǎn)移性腎癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌和非霍奇金淋巴瘤患者的療效顯著。（一）LAK細(xì)胞第二十一頁，共32頁。早期國內(nèi)在應(yīng)用LAK/IL-2進(jìn)行全身治療的同時(shí)又開展了多途徑的應(yīng)用方式：1、漿膜腔癌性轉(zhuǎn)移后腔內(nèi)注射治療2、淺表腫瘤內(nèi)或腫瘤周圍局部組織注射治療3、用于肝癌、肺癌等介入治療，總有效率達(dá)35%左右4、全身與局部聯(lián)合應(yīng)用。（一）LAK細(xì)胞第二十二頁，共32頁。局限：1、殺傷力不強(qiáng)，需大量輸注；2、擴(kuò)增能力有限，同時(shí)需要輸注大劑量IL-2，大劑量IL-2治療可出現(xiàn)多種副反應(yīng)，最常見的毒副作用是毛細(xì)血管滲透綜合征（CLS），主要表現(xiàn)全身水腫及多器官功能失調(diào)，胸腹腔積液、肺間質(zhì)水腫、充血性心衰。（一）LAK細(xì)胞第二十三頁，共32頁。（二）TIL細(xì)胞Rosenberg研究小組開創(chuàng)了TIL細(xì)胞過繼免疫治療，殺瘤較LAK顯著提高，且無需大劑量IL-21986年他們發(fā)表在Science一篇文章指出：TIL對腫瘤的殺傷能力是LAK細(xì)胞的50-100倍。他們用TIL細(xì)胞，聯(lián)合環(huán)磷酰胺、IL-2治療MC-38小鼠結(jié)腸癌12例，其中肝轉(zhuǎn)移灶全部消失，50%肺轉(zhuǎn)移灶消失。2002年Rosenberg研究組又進(jìn)行了臨床試驗(yàn)，惡性黑色素瘤黑患者自體TILs（IL-2、CD3單抗）細(xì)胞數(shù)10*11以上，13名患者6例CR4、4例PR。這10例病人腫瘤體積均明顯縮小或消失。第二十四頁，共32頁。（三）CD3AK細(xì)胞1989年YunYS等將DBA/2脾細(xì)胞與CD3α共培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生了CD3AK細(xì)胞。體外檢測細(xì)胞毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)，對P815的殺傷力是LAK細(xì)胞的20倍。Curti等人1993年首次用自身CD3AK細(xì)胞聯(lián)合IL-2治療24例腫瘤患者。2008年ASCO（美國臨床腫瘤學(xué)會(huì)）大會(huì)報(bào)道應(yīng)用該方法治療腎癌取得的陽性結(jié)果，再次向人們證明了過繼免疫細(xì)胞治療任然大有希望。第二十五頁，共32頁。（四）CIK細(xì)胞CIK細(xì)胞是國內(nèi)外繼LAK細(xì)胞治療后有一個(gè)在臨床上廣泛開展的細(xì)胞治療方法。1986年Schmidt等就發(fā)現(xiàn)在正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞中有2.5%左右的細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD3和CD56兩種抗原，且這種細(xì)胞對K562（紅白血病細(xì)胞，HLA-I類分子陰性，是NK細(xì)胞的敏感靶細(xì)胞。檢測NK細(xì)胞的殺傷活性經(jīng)常用它做靶細(xì)胞。）有天然殺傷作用。這就是CIK細(xì)胞的雛形。第二十六頁，共32頁。（四）CIK細(xì)胞1991年，美國Stanford大學(xué)骨髓移植研究中心報(bào)道用IFN-γ、IL-2、抗CD3單克隆抗體和IL-1刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生CIK細(xì)胞，這種CIK對淋巴瘤細(xì)胞有強(qiáng)大的殺傷作用而對正常的造血干細(xì)胞影響甚微。1994年，美國Stanford大學(xué)血液病學(xué)者Robert等再次證實(shí)了CIK細(xì)胞對淋巴瘤細(xì)胞的強(qiáng)烈殺傷作用。2000年，Takayanma等報(bào)道了用CIK細(xì)胞治療肝癌術(shù)后降低復(fù)發(fā)的臨床試驗(yàn)，復(fù)發(fā)危險(xiǎn)降低41%。第二十七頁，共32頁。

CIK細(xì)胞憑借其增值速度快、殺瘤活性高、非MHC限制、對正常的骨髓造血影響輕微等優(yōu)勢成為新一代腫瘤過繼性細(xì)胞免疫的主力軍。（四）CIK細(xì)胞第二十八頁，共32頁。（五）DC-CIK細(xì)胞

目前CIK細(xì)胞治療包括單獨(dú)使用CIK、CIK聯(lián)合DC治療。DC和CIK是腫瘤細(xì)胞免疫治療的兩個(gè)重要組成部分。DC是被抗原、激活獲得性免疫系統(tǒng)，CIK發(fā)揮細(xì)胞毒性和分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞，兩者聯(lián)合確保有一個(gè)高效和諧的免疫體系。Marten等發(fā)現(xiàn)，DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)可促進(jìn)DC與CIK細(xì)胞成熟，并可提高CIK細(xì)胞的增殖能力和腫瘤殺傷功能。王歡等人對10例晚期腎癌患者進(jìn)行DC聯(lián)合CIK治療，取得一定的臨床療效，并且患者有很好的臨床耐受性。第二十九頁，共32頁。手術(shù)、放療化療主要是通過外因的作用達(dá)到治療的目的，而免疫療法則充分調(diào)動(dòng)了內(nèi)因去實(shí)現(xiàn)治療的思想。醫(yī)療實(shí)踐已經(jīng)證明任何一種單一的治療模式均不能圓滿的解決腫瘤這一難題，因此，目前腫瘤的治療模式是綜合治療。