微絲的顯示考馬斯亮藍(lán)法

微絲的顯示考馬斯亮藍(lán)法第1頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六目的要求基本原理實驗用品方法與步驟實驗結(jié)果實驗報告第2頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六目的要求掌握考馬斯亮藍(lán)的染色方法；了解細(xì)胞內(nèi)微絲的分布。第3頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六實驗原理細(xì)胞質(zhì)中錯綜復(fù)雜的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)稱為細(xì)胞骨架，主要包括微管、微絲和中間纖維?？捡R斯亮藍(lán)R250是一種普通的蛋白染料，它可以使多種蛋白質(zhì)著色，由于有些細(xì)胞骨架纖維在該實驗條件下不夠穩(wěn)定，有些類型的纖維太細(xì)，在光學(xué)顯微鏡下無法分辨，因此我們看到的主要是微絲組成的張力纖維。張力纖維在體外培養(yǎng)細(xì)胞中普遍存在，與細(xì)胞的附著、維持扁平鋪展的形態(tài)有關(guān)。第4頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六實驗用品1．器材：烘箱、青霉素小瓶、培養(yǎng)細(xì)胞飛片、水浴鍋、載玻片、蓋玻片。2．試劑:0.01mol/LPBS；M-緩沖液；1%TritonX-100/M緩沖液；0.2%考馬斯亮藍(lán)染液；3%戊二醛-PBS溶液；3．實驗材料：洋蔥內(nèi)表皮，培養(yǎng)細(xì)胞飛片第5頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六方法與步驟利用培養(yǎng)細(xì)胞為材料進(jìn)行骨架顯示時,先從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)細(xì)胞飛片,棄去培養(yǎng)液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-緩沖液處理15分鐘;第6頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六M緩沖液輕輕洗3次,然后加入3%戊二醛-PBS液固定15分鐘，PBS沖洗數(shù)次，0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色30分鐘，水洗，鏡檢。第7頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六以洋蔥為材料進(jìn)行細(xì)胞骨架顯示時，先撕取一片洋蔥內(nèi)表皮，置于小平皿中進(jìn)行操作，其余步驟相同。第8頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六注意事項PBS沖洗應(yīng)適度，否則洋蔥表皮細(xì)胞吸收大量水分易使液泡過分漲大，影響實驗結(jié)果的觀察。實驗操作中，Triton的抽提是最關(guān)鍵的步驟，應(yīng)注意抽提適度。第9頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六實驗結(jié)果洋蔥內(nèi)表皮中的微絲第10頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六培養(yǎng)細(xì)胞中的微絲第11頁，共12頁，2023年，2月