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文檔簡介
化學(xué)實驗報告之電泳
實驗?zāi)康模航Y(jié)識膠體粒子是帶電粒子
實驗原理:帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動
實驗器材及藥品:鐵架臺、U形管、石墨碳棒、粗銅絲、滴管、導(dǎo)線、直流電源、fe
(oh)3膠體、定量nacl溶液
實驗操作:1、將燒杯中的蒸儲水加熱至沸騰,向沸水中逐滴滴加入6滴fec13飽和溶
液。繼續(xù)煮沸至溶液呈紅褐色,停止加熱。觀測制得的fe(oh)3膠體
2、取一支u形管,注入fe(oh)3膠體到距離管口5.0cm處,固定在鐵架臺上,用滴管
給u形管的兩端沿壁慢慢注入一定濃度的nac1溶液,使u形管兩端明顯分層,形成清楚的
液面
3、給u形管兩端插入碳棒電極,并分別連接電源的正負極,觀測現(xiàn)象并記錄時間。
實驗現(xiàn)象:u形管和陰極連接的一端液面上升,出現(xiàn)明顯的液面差,陰極一端顏色加深,陽
極一端顏色變淺
實驗分析:在外加直流電源的作用下,fe(oh)3膠體微粒在分散介質(zhì)里向陰極作定向
移動,注意碳棒不要和膠體接觸,,否則膠體放電或電解水,nacl溶液的濃度不要太大最佳是
51毫摩每升。
篇二:電泳實驗報告
實驗十二電泳
一、目的規(guī)定
1)掌握電泳法測<電勢的原理和技術(shù);
2)從實驗現(xiàn)象中加深對膠體的電學(xué)性質(zhì)的理解,即在外電場作用下,膠粒和介質(zhì)分別向帶
相反電荷的電極移動,就產(chǎn)生了電泳和電滲的電動現(xiàn)象(因電而動)。
二、基本原理
1.電泳
由于膠粒帶電,而溶膠是電中性的,則介質(zhì)帶與膠粒相反的電荷。在外電場作用下,膠粒
和介質(zhì)分別向帶相反電荷的電極移動,就產(chǎn)生了電泳和電滲的電動現(xiàn)象。影響電泳的因素有:
帶電粒子的大小、形狀;粒子表面電荷的數(shù)目;介質(zhì)中電解質(zhì)的種類、離子強度,ph值和粘
度;電泳的溫度和外加電壓等。從電泳現(xiàn)象可以獲得膠?;虼蠓肿拥慕Y(jié)構(gòu)、大小和形狀等有關(guān)
信息。
2.三種電勢
,固體表面相對溶液的電勢,?0=f(固體表面電荷密?0:熱力學(xué)電勢(或平衡電勢)
度,電勢決定離子濃度)。
??:斯特恩電勢。
離子是有一定大小的,并且離子與質(zhì)點表面除了靜電作用外,尚有范德華吸引力。所以在
靠近表面1-2個分子厚的區(qū)域內(nèi),反離子由于受到強烈的吸引,會牢固的結(jié)合在表面,形成一
個緊密的吸附層,稱為固定吸附層或斯特恩層;在斯特恩層中,除反離子外,尚有一些溶劑分
子同時被吸附。反離子的電性中心所形成的假想面,稱為斯特恩面。在斯特恩面內(nèi),電勢呈直
線下降,由表面的?0直線下降到斯特恩面??。??稱為斯特恩電勢。
?:電動電勢。
當(dāng)固、液兩相發(fā)生相對移動時,緊密層中吸附在固體表面的反離子和溶劑分子與質(zhì)點作
為一個整體一起運動,其滑動面在斯特恩面稍靠外一些?;瑒用媾c溶液本體之間的電勢差,稱
為?電勢。?電勢與??電勢在數(shù)值上相差甚小,但卻具有不同的含義。應(yīng)當(dāng)指出,只有在固、
液兩相發(fā)生相對移動時,才干呈現(xiàn)出?電勢。
?電勢的大小,反映了膠粒帶電的限度。?電勢越高,表白膠粒帶電越多,其滑動面與溶
液本體之間的電勢差越大,擴散層也越厚。當(dāng)溶液中電解質(zhì)濃度增長時,介質(zhì)中反離子的濃度
加大,將壓縮擴散層使其變薄,把更多的反離子擠進滑動面以內(nèi),使?電勢在數(shù)值上變小當(dāng)電
解質(zhì)濃度足夠大時,可使?電勢為零。此時相應(yīng)的狀態(tài),稱為等電態(tài)。處在等電態(tài)的膠體質(zhì)點
不帶電,因此不會發(fā)生電動現(xiàn)象,電泳、電滲速度也必然為零,這時的
溶膠非常容易聚沉。
3.電泳公式
當(dāng)帶電膠粒在外電場作用下遷移時,膠粒受到的靜電力fl為:
fl?qe(1)
其中q為膠粒的電荷,e為電場強度(或稱為電位梯度)
本次實驗研究的fe(。h)3為棒形膠粒。棒形膠粒在介質(zhì)中運動受到的阻力f2按
stokes定律為:
f2?4??r?(2)
其中r為膠粒的半徑,?為電泳速度,?為介質(zhì)的粘度,當(dāng)膠粒運動速度即電泳速度達成
穩(wěn)定期,fl=f2,結(jié)合(1)、(2)式得到:
??qe(3)4??r
根據(jù)靜電學(xué)原理可知
??q(4)?r
其中r為膠粒的半徑,?為介質(zhì)的界電常數(shù),
所以有
????e(5)4??
4???(6)?e??
由該式可知,若已知?、?,可通過測定?和e算出?電勢。該式只適合于c-g-s單位
制,且得出?電勢的單位為靜電伏特。若各物理量都采用si單位,r的單位為m;?的單位為
m-s-1;?的單位為pa-s;e的單位為v此時公式為:
??
三、儀器與試劑4????9?109伏特(7)?e
界面移動電泳儀;213型伯電極兩個;高壓數(shù)顯穩(wěn)壓電源;滴管2根;燒杯(250m
1);
-1玻璃棒一根;fee13溶液(10之);kc1溶液(0.02mo1-1);
四、實驗環(huán)節(jié)
1.儀器裝置圖如下。
圖1.實驗裝置圖
2.溶膠的制備:
在不斷攪拌的條件下、將fecl3稀溶液滴入沸騰的水中水解,即可生成棕紅色、透明f
e(oh)3溶膠:
fecl3+3h2
ofe(oh)3i+3hcl
部分氫氧化鐵跟鹽酸作用
fe(oh)3+hcl=feocl+2h2o
feocl=feo++c1-
氫氧化鐵吸附溶液中帶正電荷的離子(feo+),膠團結(jié)構(gòu)為:
{[fe(oh)3]m?yfeo+,(y-z)cl-}z+?zc1-
分子團選擇吸附離子緊密層擴散層
膠粒帶正電荷,因此在電場作用下向陰極移動,出現(xiàn)電泳現(xiàn)象。
3.測定電泳速度和電位梯度
打開活塞,在電泳儀中裝上待測fe(。h)3溶膠至一定高度(便于觀測界面的移動)。
用滴管將kcl溶液從電泳儀兩臂的玻璃管壁等量緩慢加入,出現(xiàn)清楚界面才可以,否則重新灌
裝,繼續(xù)加入kcl溶液至接近支管,注意不能擾動界面,保持界面清楚并使兩臂界面等高。輕
輕地將Pt電極垂直插入kcl溶液,記下兩邊界面的高度位置。接通電源,調(diào)節(jié)電壓至1
80v左右,開始記時,觀測液面的變化。
根據(jù)通電時間和界面下降的刻度計算電泳速度。
注意事項:
a:氫氧化鐵膠體的電泳速度跟氫氧化鐵膠粒的帶電量有關(guān),膠粒帶電量越大,電泳速度
越大。滲析可以減少膠粒中的氯離子,增大膠粒的帶電量。
b:實驗時,一旦通電,手就不能再觸及電極,拆卸裝置時也一定要先切斷電源。
c:耍使氯化鉀溶液浮在膠體的液面上,并跟膠體之間保持清楚的界而,實驗時應(yīng)注意使
膠體的密度比使氯化鉀溶液的密度大。這樣,使氯化鉀溶液加入后不會下沉而跟膠體混在一
起。為此,氯化鉀溶液的濃度不能太大。
五、數(shù)據(jù)記錄與解決
從直流電源讀得電壓u=v,用直尺測得兩電極間的距離1=m,計算e=u
/1=-1-lv,m;記錄界面下降高度m,通電時間s,計算?=
m?s
將e、?數(shù)據(jù)代入??
據(jù)代入求出?。
m-1?(20℃水)=80.37f-4???,?為介質(zhì)的界電常數(shù),?為介質(zhì)的粘度,初略地以
水的數(shù)?e
?(20。。水)=0.00]「2三篇三:氫氧化鐵膠體電動電位的測定(電泳法)實驗報告
深圳大學(xué)實驗報告
課程名稱:
實驗項目名稱:氫氧化鐵膠體電動電位的測定(電泳法)
學(xué)院:化學(xué)與化工學(xué)院
專業(yè):指導(dǎo)教師:
報告人:學(xué)號:班級:同組人:
實驗時間:
實驗報告提交時間:
教務(wù)處制
氫氧化鐵膠體電動電位的測定(電泳法)
一、目的規(guī)定
(1)掌握電泳法測定fe(oh)3溶膠電動電勢的原理和方法。(2)通過實驗觀測并熟
悉膠體的電泳現(xiàn)象。
二、基本原理
在膠體溶液中,分散在介質(zhì)中的微粒由于自身的電離或表面吸附其他粒子而形成帶一定
電荷的膠粒,同時在膠粒附近的介質(zhì)中必然分布有與膠粒表面電性相反而電荷數(shù)量相同的反離
子,形成一個擴散雙電層。
在外電場作用下,荷點的膠粒攜帶起周邊一定厚度的吸附層向帶相反電荷的電極運動,在
荷電膠粒吸附層的外界面與介質(zhì)之間相對運動的邊界處相對于均勻介質(zhì)內(nèi)部產(chǎn)生一電勢,為
C電勢。
它隨吸附層內(nèi)離子濃度,電荷性質(zhì)的變化而變化。它與膠體的穩(wěn)定性有關(guān),〈絕對值越
大,表白膠粒電荷越多,膠粒間斥力越大,膠體越穩(wěn)定。
本實驗用界面移動法測該膠體的電勢。在膠體管中,以kcl為介質(zhì),用fe(oh)3溶
膠通電后移動,借助測高儀測量膠粒運動的距離,用秒表記錄時間,可算出運動速度。
當(dāng)帶電膠粒在外電場作用下遷移時,膠粒電荷為q,兩極間的的電位梯度為e,則膠粒受到
靜電力為f1=eq膠粒在介質(zhì)中受到的阻力為f2=knr|ru
若膠粒運動速率u恒定,則fl=f2qe=knr]ru
(1)根據(jù)靜電學(xué)原理<=q/er
(2)將(2)代入(1)得u=Cee/knri
(3)利用界面移動法測量時,測出時間t時膠體運動的距離s,兩伯極間的電位差<p和電極
間的距離1,則有
e=<p/1,u=s/t(4)
代入(3)得s=(C<pe/4nri1)?t作s-t圖,由斜率和已知
得£和山可求C電勢。三、儀器及試劑
fe(oh)3膠體,kcl輔助溶液,高位瓶,電泳管,直尺,電泳儀。
1.電極2kcl溶液3fe(oh)3溶膠
三、實驗環(huán)節(jié)
1.洗凈電泳管和高位瓶,然后在電泳管中加入kcl輔助溶液,使其高度至電泳管的一
半,將電泳管固定在鐵架臺上。插入電極。(注意兩電極口必須水平)2.在高位瓶中加入
40ml的fe(oh)3膠體溶液,趕走導(dǎo)管中的氣泡,將其固定在鐵架臺上。
3.將高位瓶的毛細管由電泳管中間插入底部。緩慢打開活塞入fe(oh)3膠體。一直
沒過電極。將導(dǎo)管從電泳管中慢慢取出。
4.打開電泳儀,將電壓設(shè)立60v,將電泳管比較清楚的一極插入陰極中,另一端插陽
極。
5.調(diào)好測高儀的水平儀,并記錄電泳管陰極溶液界面的初始位置。6.將電泳儀置于工
作位置,同時記時,每4分鐘記一次界面高度。
7.測量7個點后停止實驗,關(guān)閉電泳儀開關(guān),用細繩測量電極兩端的距離,測三次,記
錄數(shù)據(jù)。
8.拋棄電泳管中的試液,并沖洗干凈。、
四、數(shù)據(jù)記錄與解決
實驗前溫度:28.3℃大氣壓:101.87kpa
實驗后溫度:27.7℃大氣壓:100.76kpa電壓:60.00
V
兩極間距離1(Cm):32.90cm
已知:?=0.000894pa.s?=78.36u=60v1=32.90cm
根據(jù)上表作圖得:
依據(jù)公式:s=(<(ps/4nr]1)?t和已知的n和£就可算出C電位:
由圖得斜率:k=C<p£/4nnl=0.0531cm-min-1查得:£=78.36f
/mr)=0.8904mpa.s測得電極間距為:1=32.90cm實驗電
壓:(p=60v將數(shù)值代入得:C=4.172xiO-6v
五.結(jié)果與討論
實驗測得fe(。h)3的電動勢<=4.172x10-6V。
通過本次實驗,掌握了電泳法測定fe(。h)3溶膠電動電勢的原理和方法,同時觀測和熟
悉了膠體的電泳現(xiàn)象。
導(dǎo)致誤差的也許因素:
(1)儀器的干凈限度規(guī)定很高,否則也許發(fā)生膠體凝聚,導(dǎo)致毛細管堵塞。故一定要將
儀器清洗干凈。
(2)觀測界面移動時,應(yīng)由同一個人觀測,從而減小誤差。
(3)實驗中輔助液的選擇十分重要,規(guī)定輔助液的電導(dǎo)率與溶膠的一致,避免因界面處電
場強度的突變導(dǎo)致兩臂界面移動速度不等產(chǎn)生界面模糊。(4)fe(oh)3膠體帶正電。
六、思考題:
1、要準確測定膠體的電泳速度必須注意哪些問題?答:①U壓要足夠,穩(wěn)定;
碘路暢通;
函液保證暢通無氣泡;篇四:瓊脂糖凝膠電泳實驗
瓊脂糖凝膠電泳實驗
2023-11-0309:43:56來源:生物秀評論:0我要評論
實驗二瓊脂糖凝膠電泳實驗【實驗?zāi)康摹?1)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的基本原理;(2)
掌握使用水平式電泳儀的方法;(3)學(xué)習(xí)在具有甲醛的凝膠上進行rna電泳的方法。【實驗
原理】瓊脂糖凝膠電泳是基因工程實驗室中分離鑒定核酸的常規(guī)方法。核酸是兩性電解質(zhì),其
等電點為ph2-2.5,在常規(guī)的…
實驗二瓊脂糖凝膠電泳實驗
【實驗?zāi)康摹?/p>
(1)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的基本原理;
(2)掌握使用水平式電泳儀的方法;
(3)學(xué)習(xí)在具有甲醛的凝膠上進行rna電泳的方法。
【實驗原理】
瓊脂糖凝膠電泳是基因工程實驗室中分離鑒定核酸的常規(guī)方法。核酸是兩性電解質(zhì),其等
電點為ph2-2.5,在常規(guī)的電泳緩沖液中(ph約8.5),核酸分子帶負電荷,在電場中向正
極移動。核酸分子在瓊脂糖凝膠中泳動時,具有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng),但重要為分子篩效
應(yīng)。因此,核酸分子的遷移率由下列幾種因素決定:
(1)dna的分子大小。線狀雙鏈dna分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與dn
a分子量對數(shù)成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難于在凝膠孔隙中移動,因而遷移得越
慢。
(2)dna分子的構(gòu)象。當(dāng)dna分子處在不同構(gòu)象時,它在電場中移動距離不僅和分子量
有關(guān),還和它自身構(gòu)象有關(guān)。相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋質(zhì)粒dna在瓊脂糖凝膠中移動
的速度是不同樣的,超螺旋dna移動得最快,而開環(huán)狀dna移動最慢。如在電泳鑒定質(zhì)粒純
度時發(fā)現(xiàn)凝膠上有數(shù)條dna帶難以擬定是質(zhì)粒dna不同構(gòu)象引起還是由于具有其他dna引
起時,可從瓊脂糖凝膠上將dna帶逐個回收,用同一種限制性內(nèi)切酶分別水解,然后電泳,如
在凝膠上出現(xiàn)相同的dna圖譜,貝I為同一種dna。
(3)電源電壓。在低電壓時,線狀dna片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電
場強度的增長,不同分子量的dna片段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強升高
引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增長,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使大于
2kb的dna片段的分辨率達成最大,所加電壓不得超過5v/cm。
(4)離子強度影響。電泳緩沖液的組成及其離子強度影響dna的電泳遷移率。在沒有
離子存在時(如誤用蒸儲水配制凝膠),電導(dǎo)率最小,dna幾乎不移動;在高離子強度的緩沖
液中(如誤加10、電泳緩沖液),則電導(dǎo)很高并明顯產(chǎn)熱,嚴重時會引起凝膠熔化或dna變
性。
澳化乙咤(ethidiumbromide,eb)(1)能插入dna分子中形成復(fù)合物,在波長
為254nm紫外光照射下eb能發(fā)射熒光,并且熒光的強度正比于核酸的含量,如將已知濃度
的標(biāo)準樣品作電泳對照,就可估算出待測樣品的濃度。由于澳化乙唬有致癌的嫌疑,所以現(xiàn)
在也開發(fā)出了安全的染料,如sybergreen。
常規(guī)的水平式瓊脂糖凝膠電泳適合于dna和rna的分離鑒定;但經(jīng)甲醛進行變性解決
的瓊脂糖電泳更合用于rna的分離鑒定和northern雜交,由于變性后的rna是單鏈,
其泳動速度與相同大小的dna分子量同樣,因而可以進行rna分子大小的測定,并且染色后
條帶更為銳利,
也更牢固結(jié)合于硝酸纖維素膜上,與放射性或非放射性標(biāo)記的探針發(fā)生高效雜交。
【試劑與器材】
(-)材料
電泳儀、水平電泳槽、樣品梳子、瓊脂糖等
(-)試劑
1、50?tae(1000ml):242gtris,
57.1ml冰醋酸,
18.6gedta。
2,eb溶液:100ml水中加入1g漠化乙咤,磁力攪拌數(shù)小時以保證其完全溶解,
分裝,室溫避光保存。
3、dna加樣緩沖液:0.25%漠酚藍,0.25%二甲苯青,50%甘油(w/v)。
4、rna甲醛變性膠上樣緩沖液:0.25%溟酚藍,0.25%二甲苯青,1mmedta
(ph8.0),50%甘油(w/v),用depc水配制,高壓滅菌備用。
5、5?甲醛變性膠電泳緩沖液:0.1mmops(ph7.0),40mm醋酸鈉,5mm
edta(ph8.0),用depc水配制,過濾除菌,室溫避光保存。淡黃色緩沖液可正常使用,深
黃色應(yīng)棄用。
【操作方法】
(-)常規(guī)的水平式瓊脂糖電泳
制備瓊脂糖凝膠:按照被分離dna分子的大小,決定凝膠中瓊脂糖的百分含量;一般情
況下,可參考下表:
瓊脂糖的含量(2)分離線狀dna分子的有效范圍(kb)
0.360-5
0.620-1
0.710-0.8
0.97-0.5
1.26-0.4
1.54-0.2
2.03-0.1
1.制備瓊脂糖凝膠:稱取瓊脂糖,加入1x電泳緩沖液,待水合數(shù)分鐘后,置微波爐中將
瓊脂糖融化均勻。在加熱過程中要不時搖動,使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進入溶液;加熱時應(yīng)
蓋上封口膜,以減少水份蒸發(fā)。
2.膠板的制備:將膠槽置于制膠板上,插上樣品梳子,注意觀測梳子齒下緣應(yīng)與膠槽底
面保持11nm左右的間隙,待膠溶液冷卻至50°讓右時,加入最終濃度為0.5微克/毫升的e
b(也可不把eb加入凝膠中,而是電泳后再用0.5pg/ml的eb溶液浸泡染色15分鐘),搖
勻,輕輕倒入電泳制膠板上,除掉氣泡;待凝膠冷卻凝固后,垂直輕拔梳子;將凝膠放入電泳槽
內(nèi),加入1x電泳緩沖液,使電泳緩沖液液面剛高出瓊脂糖凝膠面;
3.加樣:點樣板或薄膜上混合dna樣品和上樣緩沖液,上樣緩沖液的最終稀釋倍數(shù)應(yīng)不
小于lx。用101H微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品小槽內(nèi),每加完一個樣品,應(yīng)更換
一個加樣頭,以防污染,加樣時勿碰壞樣品孔周邊的凝膠面。(注意:加樣前要先記下加樣的
順序和點樣量)。
4.電泳:加樣后的凝膠板立即通電進行電泳,dna的遷移速度與電壓成正比,最高電壓
不超
過5v/cm。當(dāng)瓊脂糖濃度低于0.5%,電泳溫度不能太高。樣品由負極(黑色)向正極
(紅色)方向移動。電壓升高,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍減少。當(dāng)澳酚藍移動到距離膠板下
沿約1cm處時,停止電泳。
5.觀測和拍照:電泳完畢,取出凝膠。在波長為254nm的紫外燈下觀測染色后
之。
(二)在具有甲醛的凝膠上進行的rna電泳(選做)
配制23ml甲醛電泳膠:0.336g瓊脂糖溶于20mldepc水中,冷卻至60?c,加
入5ml的5x甲醛變性膠電泳緩沖液和5.5ml的甲醛,在通風(fēng)櫥內(nèi)倒膠,冷卻30分鐘后使
用。
甲醛變性膠rna樣品的制備:”1rna,5?甲醛變性膠電泳緩沖液0.5口1,甲醛0.
7口1,甲酰胺21_11,65。0力口熱151^11,迅速冰浴,力口1]_11上樣緩沖液和0.2口1的eb。
環(huán)節(jié):
1.用3%過氧化氫浸泡電泳槽、膠板、梳子30分鐘以上。
2.膠板的制備:按常規(guī)瓊脂糖電泳法。
3.預(yù)電泳:1、甲醛變性膠電泳緩沖液,預(yù)電泳10min。電壓為5v/cm。
4.小心地進行點樣,記錄樣品順序與點樣量;然后開始電泳,電壓為3-4v/cm。
5.觀測和拍照:在波長為254nm的紫外燈下觀測電泳膠板并拍照保存圖片。
【注意事項與提醒】
(1)eb是強誘變劑并有中檔毒性,易揮發(fā),配制和使用時都應(yīng)戴手套,并且不要把eb
灑到桌面或地面上。凡是沾污了eb的容器或物品必須經(jīng)專門解決后才干清洗或丟棄。簡樸解
決方法為:加入大量的水進行稀釋(達成0.5mg/m1以下),然后加入0.2倍體積新鮮配
制的5%次磷酸(由50%次磷酸配制而成)和0.12倍體積新鮮配制的0.5mol/1的亞硝
酸鈉,混勻,放置1天后,加入過量的lmol/1碳酸氫鈉。如此解決后的eb的誘變活性可降
至本來的1/200左右。
(2)由于eb會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀dna,使dna遷移
率減少。因此,假如要準確地測定dna的分子量,應(yīng)當(dāng)采用跑完電泳后再用0.5pg/m1的e
b溶液浸泡染色的方法。
(3)總rna的分析:哺乳動物的rna由28srrna、18srrna和mrna以及其它
小分子rna組成,28s和18srrna處為明顯的亮帶(相稱于4.5kb和1.9k
b),28s/l8s應(yīng)為1.5-2.5/1;植物、昆蟲、酵母和兩棲動物的rna帶分布較小,約為
0.5-3.Okb左右;假如28s/18s小于1/I,或者出現(xiàn)拖帶,說明rna已有部分降解,
假如28s和18srrna大部分已降解,則需重新制備。
【實驗安排】
只需一天:上午配試劑倒膠,下午跑電泳并觀測拍照。
【實驗報告規(guī)定與思考題】
1、附上電泳結(jié)果的圖片并進行對的的標(biāo)注(如下圖)(2)的或已加有eb的電泳膠板。
dna存在處顯示出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶。于凝膠成像系統(tǒng)中拍照并保存
m:1kbdnaladder;1:質(zhì)粒dna
2、瓊脂糖凝膠電泳中dna分子遷移率受哪些因素的影響?
3、假如樣品電泳后很久都沒有跑出點樣孔,你認為有哪幾方面的因素?
電泳流程圖:
凝膠加樣緩沖液
使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三:增大樣品密度;以保證dna均勻進入樣品孔內(nèi);
使樣品呈現(xiàn)顏色,從而使加樣操作更為便利,具有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽極泳動的染
料。溟酚藍在瓊脂糖中移動的速率約為二甲苯青ff的2.2倍,而與瓊脂糖濃度無關(guān)。以
0.5xtbf作電泳液時,澳酚藍在瓊脂糖中的泳動速率約與長3OObp的雙鏈線狀dna相
同,而二甲苯青ff的泳動則與長4kb的雙鏈線狀dna相同。在瓊脂糖濃度為0.5%?1.43
的范圍內(nèi),這些相應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。
選用哪一種加樣染料純屬個人喜惡。但是,對于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用嗅甲酚綠作為示蹤染
料,由于在堿性ph條件下其顯色較澳酚更藍為鮮明。篇五:dna的提取和電泳實驗報告
基因組dna的提取和電泳(實驗五)實驗報告
一、實驗?zāi)康?/p>
了解dna提取的方法,以及瓊脂糖凝膠電泳分析dna技術(shù)。
二、器材和試劑
1.器材
水平瓊脂糖電泳儀,離心機,水浴鍋,研缽,離心管、移液槍、水稻幼苗等
2.試劑
1.1mo1/1tris.cl(Ph8.0)的配制:稱取12.11g的tris,置于
80ml的ddh20,
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