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干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第1頁(yè)河南省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目
研究任務(wù)起源干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第2頁(yè)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第3頁(yè)DM-PAD病理基礎(chǔ)外周血管動(dòng)脈粥樣硬化,伴隨糖尿病病程延長(zhǎng),形成慢性閉塞性病變,組織缺血缺氧而潰爛感染,嚴(yán)重患者不得不截肢而致殘。
概念干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第4頁(yè)→→
DM-PAD干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第5頁(yè)
背景15%5%-10%50%DM-PAD幾個(gè)值得關(guān)注數(shù)字1.5億干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第6頁(yè)→干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第7頁(yè)
DM-PAD危害干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第8頁(yè)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第9頁(yè)
三部曲:
潰瘍截肢死亡
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第10頁(yè)干細(xì)胞移植治療技術(shù)?DM-PAD治療內(nèi)科保守治療搭橋術(shù)介入治療盲區(qū)!干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第11頁(yè)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第12頁(yè)評(píng)價(jià)療效:自體外周血聯(lián)合骨髓干細(xì)胞移植治療DM-PAD臨床療效開(kāi)發(fā)技術(shù):內(nèi)皮祖細(xì)胞判定技術(shù)臨床療效客觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
研究目標(biāo)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第13頁(yè)靜息痛或/和麻木、冷感、間歇跛行、治不愈缺血性潰瘍患肢檢測(cè)Po2<50mmHg患肢檢測(cè)ABI(ankle-branchialpressureinder)<0.9,兩次檢測(cè)間隔時(shí)間不少于1周動(dòng)脈管腔狹窄不適于進(jìn)行血管搭橋、介入、手術(shù)治療本組全部對(duì)象或?qū)ο蠹揖炀鶎?duì)干細(xì)胞移植治療知情同意,自愿接收該治療,術(shù)前簽字。
研究對(duì)象干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第14頁(yè)
A:控制不良DM(Diabetesmellitus)B:增殖性視網(wǎng)膜病
C:過(guò)去5年中有惡性疾病史患者
D:心臟,腎臟等功效不能接收造影者
不適于自體干細(xì)胞移植干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第15頁(yè)干細(xì)胞移植治療組
99例DM2-PAD內(nèi)科綜合治療+干細(xì)胞移植對(duì)照組95例DM2-PAD
內(nèi)科綜合治療
分組干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第16頁(yè)本組例數(shù)99例,男56例,女43例。糖尿病病程1個(gè)月至26年。平均年紀(jì)(69±6)歲,年紀(jì)范圍56~81歲。本組99例患者中95例患者雙側(cè)肢體自體干細(xì)胞移植,
1例在入院時(shí)前1年(年)行左下肢截肢術(shù),3例僅缺血較重一側(cè)肢體自體干細(xì)胞移植,1例一側(cè)肢體截肢患者另一側(cè)肢體干細(xì)胞移植,干細(xì)胞移植肢體為194條。3例曾行下肢血管搭橋手術(shù),4例血管內(nèi)支架置入術(shù),術(shù)后1個(gè)月~1.5年再次閉塞。合并高血壓者59例。合并陳舊性腦梗死者34例。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第17頁(yè)194個(gè)接收干細(xì)胞移植肢體中:疼痛:106個(gè)(55%),止疼劑57例(58%);冷感:181個(gè)(93%);麻木感:123個(gè)(63%);間歇跛行:64例(65%)皮膚暗紅:156個(gè)(63%);皮膚潰瘍:89個(gè)(46%);壞死:37個(gè)(19%);感染:19個(gè)(10%)。干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第18頁(yè)足背動(dòng)脈搏動(dòng):178個(gè)肢體未能觸及足背動(dòng)脈搏動(dòng),19個(gè)肢體足背動(dòng)脈微弱。彩超檢驗(yàn):本組均發(fā)覺(jué)下肢各段動(dòng)脈不一樣程度狹窄或閉塞,足背動(dòng)脈全部閉塞。DSA造影:23例行DSA造影,1例全髂外動(dòng)脈閉塞經(jīng)動(dòng)脈內(nèi)留置導(dǎo)管溶栓后置入支架。股動(dòng)脈狹窄或閉塞11例,全部患者腘動(dòng)脈以下流出道狹窄和(或)閉塞而且罕見(jiàn)側(cè)支建立。雙向多普勒(美國(guó)VersalabSE):全部患者血流波幅減低,ABI0.23~0.76,平均0.46。經(jīng)皮PO2測(cè)定(日本9100型):足背部PO20~5.3kPa,PCO25.6~7.9kPa。日本多功效紅外線(xiàn)檢測(cè)儀:足背部溫度23~33℃,平均27.4℃,與體表溫度相差3~4℃。美國(guó)感覺(jué)檢測(cè)儀:足部深感覺(jué)全部患者減退或消失。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第19頁(yè)自體干細(xì)胞移植組和對(duì)照組患者普通資料含有可比性,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組治療采取內(nèi)科綜合治療:控制血糖、血壓,給予活血化瘀及改進(jìn)微循環(huán)藥品治療,足部潰瘍定時(shí)局部換藥及清創(chuàng)治療。自體干細(xì)胞移植組與對(duì)照組患者普通資料表項(xiàng)目自體干細(xì)胞移植組對(duì)照組人數(shù)(肢體數(shù))99(194)95(180)性別男/女56/3853/42年紀(jì)(歲)69±668±7病程(年)10±0.79.9±0.6合并高血壓者5954合并陳舊性腦梗死者3429合并冠心病者2623疼痛下肢數(shù)106(55%)101(56%)冷感下肢數(shù)181(93%)165(92%)麻木感下肢數(shù)123(63%)113(63%)足部皮膚暗紅下肢數(shù)156(63%)146(77%)足部皮膚潰瘍下肢數(shù)89(46%)82(43%)足部壞死下肢數(shù)37(19%)35(19%)足部感染下肢數(shù)19(10%)19(10%)間歇性跛行下肢數(shù)60例(62%)61(62%)檢驗(yàn),☆P﹤0.01認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。χ2檢驗(yàn),﹡P﹤0.01認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第20頁(yè)5.結(jié)果5.199例194個(gè)肢體干細(xì)胞移植前后效果評(píng)價(jià):99例194個(gè)肢體移植后2周后,疼痛癥狀顯著緩解、好轉(zhuǎn)、無(wú)效肢體分別為94個(gè)(48.95%)、96個(gè)(49.95%)、無(wú)效4個(gè)(2.1%)。對(duì)照組分別7個(gè)(3.7%)、156個(gè)(81%)、27個(gè)(15.3%),經(jīng)χ2檢驗(yàn)2組間顯效率及無(wú)效率差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為χ2=99.26,P﹤0.01;χ2=19.09,P﹤0.01)。5.2冷感顯著緩解、好轉(zhuǎn)、無(wú)效肢體分別為126個(gè)(64.9%)、63個(gè)(32.5%)、無(wú)效5個(gè)(2.6%)。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第21頁(yè)對(duì)照組分別為6個(gè)(2.6%)、158個(gè)(83.7%)、26個(gè)(13.7%),經(jīng)χ2檢驗(yàn)2組間顯效率及無(wú)效率差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為χ2=199.91,P﹤0.01;χ2=8.62,P﹤0.01)。5.3間歇性跛行顯著緩解、好轉(zhuǎn)、無(wú)效肢體分別為138個(gè)(71.2%)、47個(gè)(24.2%)、無(wú)效9個(gè)(4.6%)。對(duì)照組分別為13個(gè)(7.6%)、152個(gè)(79.2%)、25個(gè)(13.2%),經(jīng)χ2檢驗(yàn)兩組間顯效率及無(wú)效率差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為χ2=162.4,P﹤0.01;χ2=15.95,P﹤0.01)。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第22頁(yè)5.4移植后2周癥狀體征改變情況:移植后足部冷感、疼痛、間歇跛行有顯著好轉(zhuǎn)或消失,其中以冷感緩解最快。37條患肢移植后1周足趾潰瘍處有滲出,4~13周潰瘍開(kāi)始好轉(zhuǎn)。13例足趾壞疽患者移植后3個(gè)月足部壞疽界限清楚自行脫落,創(chuàng)面愈合良好。5.5移植1個(gè)月檢測(cè)100%患肢皮溫不一樣程度改進(jìn)。5.6術(shù)后2和4周93%患足經(jīng)皮測(cè)定氧分壓增加和二氧化碳分壓下降。5.7移植后1個(gè)月檢測(cè)134例患者足部血流波幅較移植前增加,ABI改進(jìn)。5.82例患者移植后2個(gè)月復(fù)查血管造影,可見(jiàn)新生血管形成。5.9追蹤病歷自體干細(xì)胞移植后滿(mǎn)2年者26例,滿(mǎn)3年者12例,癥狀連續(xù)緩解,間歇跛行消失。移植后無(wú)效病例4例。指是移植疼痛、麻木、冷感及間歇跛行均無(wú)改進(jìn)者。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第23頁(yè)方法:1.依據(jù)糖尿病及糖尿病足診療標(biāo)準(zhǔn)選擇99例糖尿病足患者進(jìn)行研究,同時(shí)選95例對(duì)照。2.外周血干細(xì)胞動(dòng)員和分離:對(duì)移植組進(jìn)行外周血干細(xì)胞動(dòng)員,天天給予rhG-CSF450u-600u,皮下注射,第6天用COBE6.1血細(xì)胞分離機(jī)單采單個(gè)核細(xì)胞(MNC),總量60-120ml。3.骨髓干細(xì)胞抽取和分離:于外周血干細(xì)胞動(dòng)員第5天,局部麻醉下從骼骨處抽取自體骨髓血200mL,在試驗(yàn)室將骨髓沉淀、離心,分離等處理后制備40mL干細(xì)胞懸濁液備用。4.內(nèi)皮祖細(xì)胞判定5.干細(xì)胞懸液配制:將2種干細(xì)胞懸液混勻,配成(1~9)×108L-1濃度懸液。6.將懸液按3cmx3cm距離進(jìn)行缺血肢體移植術(shù),移植后觀察各項(xiàng)指標(biāo)改變,進(jìn)行綜合評(píng)定。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第24頁(yè)結(jié)果顯示:1.移植后大多數(shù)患足足部疼痛、冷感、間歇性跛行有顯著好轉(zhuǎn),其中以疼痛緩解最快。與對(duì)照組比,經(jīng)χ2檢驗(yàn)2組間顯效率及無(wú)效率差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.移植1個(gè)月檢測(cè)大多數(shù)患肢皮溫改進(jìn)。3.術(shù)后2和4周多數(shù)患足術(shù)后經(jīng)皮氧分壓增加和二氧化碳分壓下降。4.移植后1個(gè)月檢測(cè)患者足部血管搏動(dòng)圖波幅較移植前增加,ABI改進(jìn)。5.移植后1~2個(gè)月復(fù)查血管造影,可見(jiàn)新生血管形成。6.全部患者順利完成未出現(xiàn)并發(fā)癥和不良反應(yīng)。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第25頁(yè)結(jié)果表明:1.移植前“土壤”準(zhǔn)備:移植前期改進(jìn)普通情況、局部微循環(huán)很主要。2.種植干細(xì)胞數(shù)量要足夠,干細(xì)胞數(shù)量>1×109個(gè)。3.圍移植期及術(shù)后控制血糖、血壓,改進(jìn)微循環(huán),局部創(chuàng)面處理等很關(guān)鍵。
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第26頁(yè)
糖尿病足自然結(jié)局干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第27頁(yè)技術(shù)關(guān)鍵:1.外周血、骨髓干細(xì)胞干細(xì)胞分離和提??;2.內(nèi)皮祖細(xì)胞判定技術(shù)3.干細(xì)胞種植;4.種植前后下肢各項(xiàng)指標(biāo)改變觀察客觀方法。干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第28頁(yè)先進(jìn)性:1.內(nèi)皮祖細(xì)胞判定技術(shù)2.誘導(dǎo)后外周血分離出干細(xì)胞移植聯(lián)合骨髓干細(xì)胞3.移植例數(shù)多、安全、效果好4.評(píng)價(jià)方法客觀干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第29頁(yè)創(chuàng)新點(diǎn):1.誘導(dǎo)后外周血分離出干細(xì)胞移植聯(lián)合骨髓干細(xì)胞,處理了“種子”問(wèn)題,我國(guó)外常見(jiàn)單行骨髓取干細(xì)胞不能到達(dá)足夠干細(xì)胞數(shù)量。此方法屬于我國(guó)首創(chuàng)。2.先進(jìn)客觀檢測(cè)方法,經(jīng)皮PO2測(cè)定,ABI及動(dòng)脈搏動(dòng)圖檢驗(yàn),DSA造影評(píng)價(jià)新生血管生成,較完善檢測(cè)技術(shù)。3.內(nèi)皮祖細(xì)胞判定技術(shù)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第30頁(yè)小結(jié)1.本研究我國(guó)首次采取糖尿病患者經(jīng)動(dòng)員后自體外周血干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞聯(lián)合移植治療糖尿病足,處理了“種子”問(wèn)題。干細(xì)胞在缺血下肢組織內(nèi)分化成內(nèi)皮細(xì)胞,繼而局部血管新生。2.例數(shù)多,療效好,安全性高。形成了完整技術(shù)體系,積累了一定臨床經(jīng)驗(yàn)。3.檢測(cè)技術(shù)完善,評(píng)價(jià)方法客觀。4.我國(guó)外相關(guān)研究尚屬初級(jí)階段,開(kāi)展極少,本研究在我國(guó)處于先進(jìn)水平。自體干細(xì)胞移植治療糖尿病足因?yàn)楹腥〔姆奖?,自體起源無(wú)免疫排斥,能在體外擴(kuò)增并進(jìn)行基因修飾等特點(diǎn),在糖尿病患者肢體缺血治療,再建糖尿病患者血管形成等方面有遼闊應(yīng)用前景。干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第31頁(yè)自體干細(xì)胞移植方法外周血干細(xì)胞采取
經(jīng)G-CSF動(dòng)員后,用血細(xì)胞分離機(jī)采取和分離單個(gè)核細(xì)胞,并將其中個(gè)別干細(xì)胞凍存于液氮備用骨髓干細(xì)胞采取
在全麻條件下分別從骼骨及胸骨處抽取骨髓約500ml,然后在血細(xì)胞分離機(jī)上分離單個(gè)核細(xì)胞備用。自體干細(xì)胞移植
在手術(shù)室嚴(yán)格無(wú)菌條件下操作,將制備好自體干細(xì)胞(108/ml)植入患肢肌肉,一個(gè)肢體約40個(gè)點(diǎn)。干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第32頁(yè)移植前一周檢測(cè)一次:臨床指標(biāo)、皮溫、
ABI、PO2、雙下肢動(dòng)脈血流速度、
DSA。移植后每七天檢測(cè)1次:臨床指標(biāo)、皮溫、
ABI、PO2、雙下肢動(dòng)脈血流速度。移植4周、3月分別DSA造影檢驗(yàn)。
評(píng)價(jià)項(xiàng)目干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第33頁(yè)1.疼痛0分:無(wú)疼痛1分:偶有疼痛,被問(wèn)時(shí)能回想起2分:疼痛經(jīng)常出現(xiàn),但能耐受,不需或偶用普通止痛劑3分:經(jīng)常見(jiàn)普通止痛劑4分:因疼痛影響睡眠,普通止痛劑難以緩解臨床療效評(píng)價(jià)指標(biāo)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第34頁(yè)2.患肢冷感0分:無(wú)冷感1分:偶述患肢有發(fā)涼怕冷感覺(jué)2分:受累肢體經(jīng)常有發(fā)涼怕冷感覺(jué)3分:患肢有顯著冷涼感覺(jué),需采取局部保溫辦法,癥狀得到一定程度緩解4分:受累肢體有顯著冷涼感覺(jué),采取局部保溫辦法,癥狀亦無(wú)顯著緩解臨床療效評(píng)價(jià)指標(biāo)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第35頁(yè)3.下肢間歇性跛行:速度60~70m/min行走,無(wú)坡度0分:行走≥500m無(wú)疼痛1分:行走400~499m有疼痛2分:行走300~399m有疼痛3分:行走100~299m有疼痛4分:靜息痛,無(wú)法行走或行走<100m有疼痛臨床療效評(píng)價(jià)指標(biāo)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第36頁(yè)SDW數(shù)字點(diǎn)溫儀測(cè)皮溫:測(cè)量時(shí)室溫應(yīng)前后一致0分:皮溫升高>1.5度1分:皮溫升高<1.5度2分:皮溫升高<1.0度3分:皮溫升高<0.5度4分:皮溫不變
輔助檢驗(yàn)療效評(píng)價(jià)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第37頁(yè)ABI:踝動(dòng)脈壓/臂動(dòng)脈壓??捎弥w血流儀檢測(cè)。正常人應(yīng)>1,ABI增加>0.1開(kāi)紿作為判斷有效指標(biāo).雙下肢血流灌注改變肢體血流檢測(cè)儀
輔助檢驗(yàn)療效評(píng)價(jià)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第38頁(yè)肢體血流檢測(cè)儀測(cè)定ABI再現(xiàn)性干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第39頁(yè)經(jīng)皮PO2,Pco2檢測(cè):正常人PO2>50mmHg,Pco2<40mmHg。檢測(cè)時(shí),患者體位、室溫、檢測(cè)位點(diǎn)及檢測(cè)點(diǎn)皮溫均應(yīng)一致。干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第40頁(yè)
DSA觀察側(cè)枝血管形成
0分:無(wú)新生側(cè)枝血管1分:少許新生側(cè)枝血管(移植總長(zhǎng)度1/3范圍內(nèi)有新生血管)。
2分:中量新生側(cè)枝血管(移植總長(zhǎng)度2/3范圍內(nèi)有新生血管)。
3分:豐富新生側(cè)枝血管(移植范圍內(nèi)都有新生血管)。
輔助檢驗(yàn)療效評(píng)價(jià)干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第41頁(yè)胚胎干細(xì)胞發(fā)育-路徑干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第42頁(yè)1997,Asahra首次成功分離出內(nèi)皮祖細(xì)胞,并證實(shí)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC,endothelialprogenitocells)源于骨髓干細(xì)胞,在循環(huán)血中有這種起源于骨髓EPC。循環(huán)EPC擔(dān)負(fù)著出生后生理性(如子宮內(nèi)膜血管生成,組織炎癥部位新生血管形成)新生血管形成重?fù)?dān)及病理性(如腫瘤、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)新生血管形成。自體干細(xì)胞移植治療DM-PAOD可能性
干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第43頁(yè)治療性血管生成(therapeuticangiogenesis)是近2年提出一個(gè)新治療方法,能夠經(jīng)過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn):應(yīng)用促血管新生生長(zhǎng)因子bFGF(basicfibroblastgrowthfactor)、VEGF(vascularendothelialgrowthfactor)等,或編碼這類(lèi)蛋白質(zhì)基因;兩種方法因?yàn)榇嬖谥掳┬?,非靶向治療部位血管新生等缺點(diǎn),不適于臨床應(yīng)用。2.自體成體骨髓干細(xì)胞(autologousadultbone-marrowstemcells)移植。自體干細(xì)胞移植治療DM-PAOD可能性
干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第44頁(yè)多個(gè)研究小組動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí),將骨髓單個(gè)核細(xì)胞植入梗死心肌或缺血肢體可促進(jìn)局部血管形成建立新側(cè)枝循環(huán),并必定了植入EPC參加了新小血管和毛細(xì)血管生成。自體干細(xì)胞移植治療DM-PAOD可能性
干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第45頁(yè)
機(jī)制:可能為在移植局部提供EPC,CD34單個(gè)核細(xì)胞在局個(gè)別泌各種促血管新生生長(zhǎng)因子(如bFGF,VEGF等)及局部缺血缺氧微環(huán)境原因刺激,生成新小血管和毛細(xì)血管。
自體干細(xì)胞移植機(jī)制研究干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第46頁(yè)
Tateishi-yuyama等于11月在國(guó)際上首次報(bào)道了應(yīng)用成體骨髓干細(xì)胞移植成功治療周?chē)懿』颊吲R床報(bào)道。
自體干細(xì)胞移植治療DM-PAOD機(jī)制干細(xì)移植專(zhuān)題知識(shí)講座第47頁(yè)自體干細(xì)胞移植治療DM-PAOD可能性
多年來(lái)伴隨對(duì)各種成體干細(xì)胞生物學(xué)特征認(rèn)識(shí)不停深入以及分離純化這些干細(xì)胞伎倆不停改進(jìn),使采取干細(xì)胞移植等治療性血管生成方法在缺血,梗死部位重新建立有效
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