固相萃取高效液相色譜法測定黃芪中黃芪甲苷的含量

usHIzHENMEDIcINEANDMATERIAMEDIcAREsEARcH2007voL.18No.1時珍國醫(yī)國藥2007年第18卷第l期固相萃取一高效液相色譜法測定黃芪中黃芪甲苷的含量楊克迪,李宏,龍云飛,鄭智慧,萬順剛(廣西大學化學化工學院,廣西南寧530004摘要:目的采用固相萃取.高效液相色譜方法分析黃芪中黃芪甲苷的含量。方法采用c。。固相萃取小柱純化黃芪提取物中的黃芪甲苷，反相高效液相色譜一紫外檢測方法測定黃芪中黃芪甲苷含量。色譜柱為zorbaxsB-C。。柱(彬.6mmxl50mm,5汕m,以乙腈.水(32:68為流動相，流速1.0mL/min,柱溫30°C,檢測波長200nm。結(jié)果黃芪甲苷進樣量在1.408一7.04燦g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系,r=0.9999。平均回收率為101.5%。結(jié)論該方法操作簡便，重現(xiàn)性好，可作為黃芪藥材或其它含黃芪制劑中黃芪甲苷含量的分析方法。關(guān)鍵詞:固相萃取;高效液相色譜;黃芪甲苷中圖分類號:R284.2文獻標識碼:A文章編號:1008旬805(200701抑041mlDetemi勰tionofAstragalosideWinRadixAs加酗髓bySPEHPLCYANGKe—di,LIHong,LONGYun.fbi,ZHENGZhi—hui,WANShun—gang(JscAooZ礦吼em趣哪。凡d醌em渤Z西柳聘Peri噌,G“口，移i踟泐邙妙,Np肌i昭530004，劬i凡口Abstract:Ob.iectiveToestablishSPE.HPLCmethodforthedete徹inationofas￡嘴alosideIVinRadixAs￡m鼬執(zhí)MethodsTheastragalosideIVinsamplewaspurifiedwithClRsolidphasecolumnanditscontentwasdeterminedwi出HPLC.UVmetho(1.TheastragalosideIVwassep啪ted0nazorba【SB-C18column(‘p4.6mmx150mm,5斗mwithacetonitrile一water(32:6&v/vasmobilephase,andthedetectivewavelen#尊hwasYetat200nm.ltesultsThelinearrangewas1.408一-7.04"g(r=O.9999.llheavemgerecoveryofastmgalosideIVwas101,5%.Conclusi徹Themethodissimple。accurateandcanbeusedforthequaJ.itycontr01ofRadixAs￡nZgn屁anditspI°Cparation.1【eywOrds:SoIid.phaseextraction:HPLC:AstragalosideIV黃芪為常用中草藥,具有較高的藥用價值,其主要成分黃芪甲苷具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和降血壓等藥理活性“oJ。2005年版《中國藥典》規(guī)定采用HPLc—ELSE方法測定黃芪甲苷含量p‘,鑒于紫外檢測器的普及性,目前相當部分實驗室仍采用HPLc—UV法分析黃芪及相關(guān)制劑中黃芪甲苷含量M“1。由于黃芪甲苷的特征吸收波長在200nm左右，樣品中雜質(zhì)對黃芪甲苷定量分析干擾較大。目前一般采用D101大孔吸附樹脂處理樣品,樣品中仍含有較多的雜質(zhì),黃芪甲苷與其它雜質(zhì)難以達到基線分離,影響分析準確度,另一方面也不利于色譜柱的保護。本文采用固相萃取方法純化樣品中黃苠甲苷,可明顯去除樣品中雜質(zhì),并以此測定了黃芪藥材中黃芪甲苷含量。1儀器與材料1.1儀器A西1enll100高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器（美國Agilent公司;c。8固相萃取柱（美國Bestown公司;Labomta4000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（德國Heidolph公司;BSl24S電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;KQ.500DB超聲波清洗機（昆山超聲儀器廠。1.2藥材與試劑黃芪購于南寧市一心藥業(yè)公司,經(jīng)鑒定均為藥典正品;黃芪甲苷對照品購于中國藥品與生物制品檢定所（批號0781.200311;乙腈為色譜純,其它試劑為分析純,雙蒸水自制。2方法2.1對照品溶液的配制精密稱取17.6mg黃芪甲苷對照品置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,備用。2.2黃芪甲苷供試品溶液的制備取黃芪藥材，粉碎。精密稱取4g粉末，用20ml甲醇于索氏提取器中浸泡過夜，加甲醇至60ml,于水浴中80°C下回流提取4h。提取液揮干甲醇，殘渣用正丁醇飽和的水10ml超聲溶解,溶液用水飽和的正丁醇萃取4收稿日期：2006蜘-25;修訂日期:2006—11-20基金項目:廣西教育廳資助項目[項目批準號:桂教科研（200420].作者簡介:楊克迪（1966一，男（漢族，廣西興安人，現(xiàn)任廣西大學化學化工學院副教授，博士學位，主要從事天然產(chǎn)物有效成分分離與應(yīng)用研究.次,40mL/次。合并正丁醇液，用1%Na0H溶液洗滌3次,40mL/次，然后用正丁醇飽和水洗至中性，回收正丁醇，殘渣用5ml水溶解,備用。c。。固相萃取柱依次用5rnl甲醇和5ml水預處理，取黃芪甲苷水溶液過固相萃取柱，先用3ml雙蒸水洗滌,然后用20%甲醇溶液5ml洗滌，棄去洗滌液。用60%甲醇20ml洗脫，收集洗脫液。洗脫液揮干溶劑,用甲醇定容至5ml作為供試品溶液。2.3色譜條件zorbaxsB一c18色譜柱（4.6mmx150mm,5斗m,流動相為乙腈一水（32:68,〃口，流速1.0mL/min,柱溫為30C,檢測波長200nm。樣品譜圖見圖l,對照品譜圖見圖2。2.4樣品含量測定2.4.1線性范圉考察用微量進樣器分別取2,4,6,8,10一黃芪甲苷對照品溶液進樣。以黃芪甲苛對照品峰面積為縱坐標y,黃芪甲苷對照品進樣量為橫坐標戈，進行線性回歸,得回歸方程:y=72.2885戈?4.9025（n=5,r=0.9999，線性范圍為1.408—7.04pg。2.4.2黃芪甲苷含量測定分別測定了批號為20050316,2005l125兩批黃苠藥材中黃芪甲苷的含量。結(jié)果見表l。〃min圖l黃芪甲苷供試晶液褶色譜圖?4l?萬方數(shù)據(jù)蠹軸磊琵菲靄喜萎囊囊年第j辣諾麟j諺IL癸【｝1莖旺A"瞳矗叢:量:悼一心博坫型鎣膏莨莖i袖腎訂謄;—席斥萎警e社鉑鐾V"莖，了i--t堅博％°?i蕊剮番蠶掣謹潮——譖————國————墨————陛————鋈翼朝塹香鏨————熏————籜————翼—熬i霎羹擘?111；一藿謄?簍窶耄妻jls§?ii;｝重羹;.I｝ij的囊；i：11i?f§1；蠢f§?<ll?5fK?|<j;i§i-ii;;j;li;;?囊翌;-§1喜,!§要。ij;,i1囊;》l=.;;<-i§!;三一到?囂蠢一薑霎i2曼妻i§攀煮萎i§甑耋冀<il一%墨i!;?葶艘一1一鐾i1j一融歉玉簍11i一萋蠢萋纂簍萋址li垡萋!I1—i囊毒薑塞i妻蠢1!；一冀霎一§r簍gil~型鏊羹；l萋囂妻：§孽窆耄冀g§2，趕蠢一;j9一凳萋薑羹|§}.奏霧霪謄§；；一鼙霎囊?;一囊委羹髫捌ii型萋ill一耄蠹餮簍耋萋箋;ll一差霉一i一墓ii;一蓄塞譽；；；：iji一囊菱囂,!一蠢萼菱齋基ll蠢嘉>iloi一等藿鎏囊藿ilP—l璧曲蓉囂瘟l臻嚏?i!-堇{一i—j囊震蓉冀鋈耄>；i!一妻翥一妻霉萋ii耋?爹至ii?垂囊一l一薑委薑?iip?漭雩聞曼一一i一臺薹?鎣專?；篁；蠶,至摹妻。髦薹i?孝耋薹.雩妻至?耋矗蠹.薹孝妻i莖薹耋三莖耄薹;莖薹薹i妻童薑?蠢1毫三垂垂霧?；〉孝=霉羹囂遼耋主.萋萋圣.驀墓蠹鐾。手耋莖三薑季墓。耋愛j?專主“;囊;囊、毒叁爭:;a彗,薹墓薹;摹童要i王1妻。耋莖｝二爹囊差.人耄委.章季董。莖孝主。耋蠶i?主蠶耋=三i喜.i耄童，蠹囊零!i型喜j塞墓jj妻驀薹j薹妻霎!薯童萬方數(shù)據(jù)固相萃取-高效液相色譜法測定黃芪中黃芪甲苷的含量作者:楊克迪,李宏,龍云飛,鄭智慧,萬順剛,YANGKe-di,LIHong,LONGYun-fei,ZHENGZhi-hui,WANShun-gang作者單位:廣西大學化學化工學院,廣西,南寧,530004刊名:時珍國醫(yī)國藥英文刊名:LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH年,卷(期:2007,18(1引用次數(shù):2次參考文獻(8條1.張銀娣.王幼林.沈建平黃芪皂苷甲鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用1984(042.張銀娣.王幼林.沈鍵平黃芪皂苷甲的抗炎和降壓作用1984(053.國家藥典委員會中華人民共和國藥典(一部20054.賀福元.劉平安.鄧凱文反相高效液相色譜法測定大鼠血漿中補陽還五湯中黃芪甲苷的含量及藥動學研究［期刊論文］-中國藥學雜志2005(215?伍毅.鄭國燊HPLC測定復聰香液中黃芪甲苷的含量［期刊論文］-中國中藥雜志2005(12張蓮珠.汲立偉.呂雪峰HPLC測定克尼膠囊中黃芪甲苷的含量［期刊論文］-中成藥2005(08戴軍平.劉秀霞.吳沉HPLC法測定黃芪口服液中黃芪甲苷的含量［期刊論文］-西北藥學雜志1998（04郭洪祝.劉曉峰.于侹高效液相色譜法測定胰復康膠囊中黃芪甲苷含量［期刊論文］-中國中藥雜志2000（10相似文獻（10條期刊論文任晉.黃翠玲.趙國棟.蔣可固相萃取-高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機在線分析水中痕量除草劑-分析化學2001,29（8建立了飲用水中痕量除草劑的SPE-LC-MS聯(lián)機測試方法，該方法僅用45min就可完成水樣中7種除草劑（阿特拉津,西草凈,西碼凈,殺草凈,敵稗,乙草胺,甲磺隆的分析，檢測限低于歐共體所要求的飲用水標準（單種農(nóng)藥濃度小于0.1yg/L.比起液液萃取，離線SPE等其他前處理方法，在線SPE的結(jié)果的重現(xiàn)性和精密度方面大大優(yōu)于前者,環(huán)境水樣分析時間大大減少（所需時間為液液萃取的1/60，離線SPE的1/20，而且更安全性和可靠.我們已在華北某地的地表水和地下水中檢測出阿特拉津（1.9yg/L和乙草胺（1.64yg/L.期刊論文許泓.林安清.古瓏.唐丹舟.何佳.XUHong.LINAn-qing.GULong.TANGDan-zhou.HEJia自動固相萃取/高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測動物源性食品中殘留二苯乙烯類激素的方法研究-分析測試學報2007，26（1應(yīng)用自動固相萃取儀（ASPE/高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀（HPLC-MS/MS同時分析動物源性食品中殘留二苯乙烯類激素-己烯雌酚（DES、己烷雌酚（HEX、雙烯雌酚（DEN.樣品凈化采用裝配硅膠固相萃取柱的ASPE，液相色譜分離用C8柱,大氣壓化學模式電離，多反應(yīng)離子監(jiān)測方式檢測,DES-d8同位素標記物做內(nèi)標定量.方法對DES、DEN的檢出限為0.05ng?g-1，在0.5?10ng?g-1范圍內(nèi)回收率為84%?108%;對HEX的檢出限為0.025ng?g-1，在0.25?5ng?g-1范圍內(nèi)回收率為59%?87%.學位論文王文娟固相萃取高效液相色譜紫外檢測法測定血清中結(jié)合型膽汁酸的方法研究與臨床應(yīng)用2009目的:建立一種同時測定血清中9種結(jié)合型膽汁酸的固相萃取高效液相色譜紫外檢測法（SPE-HPLC-UV。2.用SPE-HPLC-UV法測定正常孕婦、輕度和重度妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥（ICP患者母血和臍血中各結(jié)合膽汁酸的濃度，建立ICP的特征膽汁酸譜用于ICP的診斷和分度，初步探討ICP患者母體-胎兒的膽汁酸平衡變化。方法:用ChromabondC18ec固相萃取柱萃取血清樣品。色譜條件:色譜柱:WatersNovaC18色譜柱（3.9x150mm,5ym;柱溫:25°C;流速:0.8ml/min;流動相A:60ymol/L磷酸鹽緩沖液（pH3.3，流動相B為純甲醇（A:B=34:66,v/v;檢測波長197nm;進樣量20yl,檢測時間20min。用SPE_HPLC-UV法測定16例正常孕婦、11例輕度和14例重度ICP患者母血及臍血結(jié)合型膽汁酸。結(jié)果:1.9種結(jié)合型膽汁酸在20分鐘內(nèi)分離完全，各膽汁酸在濃度為5?500卩mol/L范圍內(nèi)線性良好,r為0.9993?0.9998,具有良好的相關(guān)性;最低檢測限為1.25?3.13ymol/L;該方法日內(nèi)變異系數(shù)在1.47%?5.95%之間，日間變異系數(shù)在1.61%?7.92%之間，平均回收率在83.11%?101.34%之間。2.母血:與正常孕婦組的相比:輕度ICP組TCA、TCDCA、TDCA增高有統(tǒng)計學差異;重度ICP組TCA、GCA、GLCA、TCDCA和TDCA增高且有統(tǒng)計學差異。與輕度ICP組相比:重度ICP組TCA、GCA、GLCA、TDCA增高有統(tǒng)計學差異。臍血:與正常孕婦組相比:重度ICP組TCA、GCA和TDCA增高且有統(tǒng)計學差異。與輕度ICP組相比:重度ICP組TCA、GCA、TDCA增高有統(tǒng)計學差異。輕度ICP組的膽汁酸譜與正常孕婦組相比無統(tǒng)計學差異。結(jié)論:1.本研究建立的血清膽汁酸的SPE-HPLC-UV分析法能實現(xiàn)母血與臍血中結(jié)合型膽汁酸的測定,該方法準確、靈敏、快速、特異,適用于實驗室研究和臨床常規(guī)檢測。2?本研究建立了輕度和重度ICP患者母血與臍血中的特征膽汁酸譜，該膽汁酸譜有助于ICP的診斷和分度。本研究發(fā)現(xiàn)正常孕婦、輕度和重度ICP母血與臍血中膽汁酸水平成正相關(guān)，但正常孕婦臍血中總膽汁酸及TCA、GCA含量高于母血，而ICP患者母血中總膽汁酸及TCA含量卻高于臍血。這些現(xiàn)象可能是由于胎盤對膽汁酸的轉(zhuǎn)運機制發(fā)生改變使母體-胎兒的膽汁酸平衡發(fā)生了變化。期刊論文王傳現(xiàn).郭德華.李波.王敏.方曉明.仲帥固相萃取富集凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定飲用水中全氟化合物-衛(wèi)生研究2007，36（6目的建立固相萃取濃縮與高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS測定飲用水中全氟辛酸（PFOA、全氟辛烷磺酸（PFOS、全氟癸酸（PFDA等全氟化合物的方法.方法樣品經(jīng)C18固相萃取濃縮凈化，應(yīng)用負離子電噴霧電離，檢測方式為多級反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM模式，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLCMS/MS進行測定.結(jié)果PFOA、PFOS、PFDA在50?1000pg/ml線性范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)均》0.99.在8、20.0pg/g添加水平的回收率為65%?111%,相對標準偏差為3.6%?14.6%（n=6，定量檢出限為8pg/g.結(jié)論該法適用于飲用水中PFOA、PFOS、PFDA等全氟化合物的測定，具有快速、定量準確、檢測靈敏等優(yōu)點.期刊論文王水.唐琳.郭亦然.顏鈁.陳放.WANGShui.TANGLin.GUOYi-ran.YANFang.CHENFang固相萃取和高效液相色譜相結(jié)合快速測定苦瓜甙A的含量-色譜2001，19（2建立了一個快速、簡單、準確的固相萃取和高效液相色譜相結(jié)合的測定苦瓜甙A含量的方法。樣品經(jīng)石墨碳固相萃取管(3mL/250mg純化后以高效液相色譜檢測。色譜柱為C18,流動相為V(乙腈：V(甲醇：V(50mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液=25:20:60,流速為0.8mL/min,檢測波長為208nm。標準曲線自10mg/L至【」1*!000mg/L呈線形關(guān)系(r2=0.999*!2。該方法具有很好的重現(xiàn)性，日內(nèi)或日間的相對標準偏差和相對平均誤差均小于10%。樣品回收率大于90%。期刊論文邰義萍.莫測輝.李彥文.包艷萍.張艷.姚圓.羅曉棟.TAIYi-Ping.MOCe-Hui.LIYan-Wen.BAOYan-Ping.ZHANGYan.YAOYuan.LUOXiao-Dong固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測土壤中喹諾酮類抗生素-分析化學2009,37(12建立了固相萃取-高效液相色譜-熒光(HPLC-FLD檢測土壤中4種喹諾酮類抗生素的分析方法.樣品采用50%Mg(NO_3_2-10%NH_3?H_2O(96:4,V/V超聲提取，過HLB柱富集凈化,再用乙腈-0.067mol/LH_3PO_4溶液洗脫.采用高效液相色譜-熒光檢測器，以乙腈-0.067mol/LH_3PO_4(用三乙胺調(diào)節(jié)至pH2.5為流動相,于激發(fā)波長280nm、發(fā)射波長450nm處進行檢測.土壤樣品中4種喹諾酮類抗生素的加標回收率在60.4%?99.3%之間，檢出限為0.58~1.0“g/kg蔬菜基地土壤樣品分析結(jié)果表明,本方法能夠滿足實際樣品的分析要求,4種喹諾酮類抗生素均被檢出,土壤中抗生素污染問題值得關(guān)注.期刊論文黃紅林.劉實.張?zhí)抑ス滔噍腿?高效液相色譜測定番茄中的赤霉素GA3殘留-分析科學學報2005,21(1建立了固相萃取-高效液相色譜(SPE-HPLC法分析番茄中赤霉素GA3殘留量的方法.研究了不同填料的固相萃取小柱對番茄中赤霉素的萃取回收率以及各自的純化結(jié)果.該方法線性范圍為0.21?1.05x102mg/L,檢出限為0.011mg/kg，在優(yōu)化條件下，以C18小柱萃取樣品的效果最好,加標回收率為88.45%?95.90%,其RSD為1.15%?6.56%.期刊論文林奇齡.歐仕益.歐云付活性炭固相萃取-高效液相色譜聯(lián)用分析食品中的丙烯酰胺-食品工業(yè)科技2005,""（6實驗建立了活性炭固相萃取-高效液相色譜聯(lián)用分析食品中丙烯酰胺的方法,考察了方法的精密度、準確度和靈敏度,并用該方法獲得了薯條的高效液相色譜圖.結(jié)果表明，該方法的變異系數(shù)為3.439%,平均回收率為91.1%