紫外可見分光光度計1

一、光的吸收定律（三）Lambert-Beer定律當一束平行單色光垂直通過某一具有一定光照面積的、含吸光物質(zhì)的稀溶液時，若該溶液均勻、無散射，則在入射光波長、強度及溶液的溫度等條件保持不變的情況下，該溶液中的吸光物質(zhì)對單色光的吸光度A與溶液的濃度c及溶液液層厚度L的乘積成正比關(guān)系。

Lambert-Beer定律是分光光度法定量分析的理論依據(jù)。一、光的吸收定律（四）吸光系數(shù)1.摩爾吸光系數(shù)在入射光波長一定時，溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時所測得的吸光度稱為摩爾吸光系數(shù)，常用ε表示。2.百分吸光系數(shù)在入射光波長一定時，溶液濃度為1﹪（W/V）、層厚度為1cm時所測得的吸光度稱為百分吸光系數(shù)，常用表示。二者的關(guān)系：

二、偏離Beer定律的因素

1.化學因素:(1)溶液的濃度(2)物質(zhì)的化學變化(3)溶劑的影響

2.光學因素:(1)非單色光

(2)反射光(3)散射光

(4)非平行光

3.儀器因素

第三節(jié)顯色反應及測定條件選擇一、顯色反應在光度分析法中將被測組份轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔锏姆磻Q為顯色反應。

顯色反應:X＋RXR被測物顯色劑

一、顯色反應（一）顯色劑和顯色反應的要求1.被測物質(zhì)與所生成的有色物質(zhì)之間，必須有確定的定量關(guān)系。2.反應產(chǎn)物必須有足夠的穩(wěn)定性。3.顯色劑在測定波長處無明顯吸收。4.反應產(chǎn)物的摩爾吸系數(shù)足夠大(104)，以保證靈敏度。5.顯色反應須有較好的選擇性，才能減免干擾因素。一、顯色反應（二）顯色反應的條件

1.顯色劑的用量顯色劑的用量是通過實驗從A—V曲線來確定。

2.酸度顯色反應最適宜的pH范圍(酸度)是通過實驗由A—pH關(guān)系曲線來確定。3.顯色時間顯色時間是通過實驗從A－t曲線來確定。

4.溫度顯色反應適宜的溫度仍可通過實驗方法從A—T曲線確定適宜溫度。

二、測定條件的選擇

（一）測定波長的選擇選擇原則：吸收最大，干擾最小。

（二）吸光度范圍的選擇吸光度A在0.7～0.2范圍時，測定結(jié)果的相對誤差較小，為測量的最佳區(qū)域。

（三）空白溶液的選擇1．溶劑空白溶液2．試劑空白溶液

3．試樣空白溶液4．平行操作空白溶液第四節(jié)紫外-可見分光光度計的結(jié)構(gòu)與光學性能一、儀器主要部件光源—單色器—吸收池—檢測器—顯示器（一）光源要求：能發(fā)射強度足夠且穩(wěn)定的連續(xù)光譜，壽命長。

1.鎢燈或鹵鎢燈(適用波長范圍是350nm～1000nm)，必須使用穩(wěn)壓電源。

2.氫燈或氘燈(適用波長范圍是150nm～400nm)，必須使用穩(wěn)流電源。一、儀器主要部件（二）單色器

作用：將光源發(fā)出的復色光按波長順序分離成單色光。

組成：狹縫、準直鏡、色散元件(棱鏡、光柵)。一、儀器主要部件（三）吸收池也稱比色杯玻璃吸收池只可以在可見光區(qū)使用，石英吸收池可在紫外-可見區(qū)使用。盛放參比溶液與盛放樣品溶液的吸收池需互相匹配。（四）檢測器1.光電管2.光電倍增管II0一、儀器主要部件（五）訊號處理與顯示器放大器表頭顯示數(shù)字顯示熒屏顯示二、分光光度計的類型(一)單光束分光光度計二、分光光度計的類型(二)雙光束分光光度計(三)光多道二極管陣列檢測的分光光度計二、分光光度計的類型(四)常用分光光度計二、分光光度計的類型(四)常用分光光度計三、分光光度計的光學性能

1.波長范圍2.波長準確度3.波長重現(xiàn)性