免疫學檢驗第十三章凝集反應

早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。--肥達試驗至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學獎。

--血型鑒定凝集反應的發(fā)現(xiàn)當前第1頁\共有39頁\編于星期五\2點凝集反應的定義凝集反應：

顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應抗體特異性結合，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結合成致敏顆粒（紅細胞、聚苯乙烯乳膠顆粒、炭粒）后，它們與相應抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應，在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。當前第2頁\共有39頁\編于星期五\2點可見反應形成當前第3頁\共有39頁\編于星期五\2點陰性？陽性？當前第4頁\共有39頁\編于星期五\2點凝集反應的分型凝集反應直接凝集反應間接凝集反應抗球蛋白試驗當前第5頁\共有39頁\編于星期五\2點第一節(jié)直接凝集反應直接凝集反應：

顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。當前第6頁\共有39頁\編于星期五\2點凝集原(agglutinogen)：凝集反應中的抗原。凝集素(agglutinin)：凝集參與反應的抗體當前第7頁\共有39頁\編于星期五\2點（一）玻片凝集試驗當前第8頁\共有39頁\編于星期五\2點方法評價:定性試驗簡便和快速敏感度低應用:菌種鑒定血清學分型血型鑒定當前第9頁\共有39頁\編于星期五\2點

在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。（二）試管凝集試驗當前第10頁\共有39頁\編于星期五\2點0.50.50.50.50.5棄掉0.5

試管凝集試驗原理結果

1234567菌液當前第11頁\共有39頁\編于星期五\2點

結果+很小的凝集顆?；鞚?無凝集現(xiàn)象與對照相同++小、部分凝集塊中等混濁+++大多凝集管底輕度混濁++++大的凝集塊清亮凝集程度沉淀上清當前第12頁\共有39頁\編于星期五\2點管底沉淀凝集程度當前第13頁\共有39頁\編于星期五\2點方法評價：半定量試驗簡便、快速敏感度低可有假陽性臨床應用：肥達試驗外斐試驗交叉配血試驗當前第14頁\共有39頁\編于星期五\2點第二節(jié)間接凝集反應間接凝集反應:

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.當前第15頁\共有39頁\編于星期五\2點載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒

間接凝集試驗示意圖當前第16頁\共有39頁\編于星期五\2點常用載體紅細胞--間接血凝試驗聚苯乙烯乳膠--膠乳凝集試驗當前第17頁\共有39頁\編于星期五\2點1、正向間接凝集試驗2、反向間接凝集試驗3、間接凝集抑制試驗4、協(xié)同凝集試驗間接凝集反應的類型當前第18頁\共有39頁\編于星期五\2點用抗原致敏載體--檢測抗體正向間接凝集試驗當前第19頁\共有39頁\編于星期五\2點反向間接凝集試驗用抗體致敏載體----檢測抗原當前第20頁\共有39頁\編于星期五\2點間接凝集抑制試驗用抗原致敏載體--檢測抗原當前第21頁\共有39頁\編于星期五\2點間接凝集抑制試驗待測抗原已知抗體特異結合抗原抗體復合物NS＋致敏顆粒無凝集顆粒陽性當前第22頁\共有39頁\編于星期五\2點間接凝集抑制試驗待測抗原已知抗體無結合抗原抗體分散NS＋致敏顆粒有凝集顆粒陰性當前第23頁\共有39頁\編于星期五\2點SPA:SPA-IgG

Fc;SPA抗體致敏------測抗原協(xié)同凝集試驗當前第24頁\共有39頁\編于星期五\2點

原理圖IgGSPASPA-IgG

待測抗原SPA-IgG-待測抗原凝集顆?；旌霞尤氘斍暗?5頁\共有39頁\編于星期五\2點間接凝集反應的應用抗原的檢測

反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分?？贵w的檢測

檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。

當前第26頁\共有39頁\編于星期五\2點抗球蛋白試驗又稱Coombs試驗第三節(jié)

抗球蛋白試驗當前第27頁\共有39頁\編于星期五\2點（一）直接Coombs試驗不完全抗體檢測紅細胞上抗體當前第28頁\共有39頁\編于星期五\2點（二）間接Coombs試驗檢測血清中的抗紅細胞抗體當前第29頁\共有39頁\編于星期五\2點臨床應用：在輸血上的應用血型抗原抗體的檢查對新生兒溶血性貧血性疾病的診斷對溶血性貧血的研究對細菌或立克次體的不完全抗體檢查當前第30頁\共有39頁\編于星期五\2點

冷凝集試驗原理抗原決定簇隱含，不能與抗體結合混合暴露的抗原決定簇與抗體結合混合37℃4℃37℃當前第31頁\共有39頁\編于星期五\2點膠乳凝集試驗--類風濕因子檢測當前第32頁\共有39頁\編于星期五\2點抗自身變性IgG抗體，屬于IgM類，主要存在于血清中。約90%類風濕性關節(jié)炎（RA）患者的RF呈陽性。某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進行性全身性硬化癥、干燥綜合征、SLE等患者都有較高的陽性率；一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出現(xiàn)RF。類風濕因子RF當前第33頁\共有39頁\編于星期五\2點其病因及發(fā)病機制仍不完全明了,機體出現(xiàn)免疫系統(tǒng)紊亂,進而引起關節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的自身免疫性疾病。類風濕性關節(jié)炎RA當前第34頁\共有39頁\編于星期五\2點RF可與IgG的Fc段結合。將變性IgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，此致敏膠乳在與待測血清中的RF相遇時，即可發(fā)生肉眼可見的凝集。乳膠凝集試驗當前第35頁\共有39頁\編于星期五\2點類風濕膠乳診斷試劑RF陰性對照RF陽性對照反應板攪拌棒主要的試劑和器材當前第36頁\共有39頁\編于星期五\2點取陽性血清、陰性血清各1滴于反應板上，然后分別加類風濕膠乳診斷試劑1滴。用攪拌棒充分混勻后，輕輕搖動反應板2～3min，觀察結果。步驟當前第37頁\共有39頁\編于星期五\2點在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出現(xiàn)，且液體澄清者為RF陽性結果觀察和判斷當前第38頁\共有39