醫(yī)學(xué)專題-而血清中還存在凝集素

血型鑒定(jiàndìng)和交叉配血實(shí)驗(yàn)第一頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)目的學(xué)習(xí)ABO血型(xuèxíng)鑒定方法，掌握血型(xuèxíng)鑒定原理。觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。第二頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)原理-血型(xuèxíng)鑒定ABO血型是根據(jù)紅細(xì)胞表面存在的凝集原決定的。存在A凝集原的稱為A血型，存在B凝集原的稱為B血型。而血清中還存在凝集素（ImmunoglobuliM）。當(dāng)A凝集原與抗A凝集素相遇(xiānɡyù)或B凝集原與抗B凝集素相遇時(shí)，會(huì)發(fā)生紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。一般A型標(biāo)準(zhǔn)血清中含有抗B凝集素，B型標(biāo)準(zhǔn)血清中含有抗A凝集素，因此可以用標(biāo)準(zhǔn)血清中的凝集素與被測(cè)者紅細(xì)胞反應(yīng)，以確定其血型（表型）。第三頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理-交叉配血同種動(dòng)物不同個(gè)體的紅細(xì)胞凝集稱為同族血細(xì)胞凝集作用。不同動(dòng)物的血液互相混合有時(shí)也可產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集，稱為異族血細(xì)胞凝集作用。對(duì)于動(dòng)物的天然血型抗體了解不多，而且免疫效價(jià)也很低，所以(suǒyǐ)同種動(dòng)物第一次輸血，一般不會(huì)引起嚴(yán)重后果。但第二次輸血就必須進(jìn)行交配試驗(yàn)，才能決定是否能相互輸血。交叉配血既可檢驗(yàn)血型測(cè)定是否有誤，又能發(fā)現(xiàn)他們的紅細(xì)胞或血清中，是否還存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。在進(jìn)行并叉式配血試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)在37℃下進(jìn)行，以保證可能有的凝集反應(yīng)得以充分顯示。第四頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件交叉(jiāochā)配血交叉配血中紅細(xì)胞懸液和血清的制備方法：靜脈采血3ml，取下針頭，將其中的0.4ml注入已加入106mmol/L枸櫞酸鈉抗凝劑0.1ml的試管中（血液與抗凝劑的比例為4:1），混勻，待用。剩余血液加入另一支試管中，使其自然凝固。分離血清備用。

洗滌紅細(xì)胞：取抗凝血一份，加8－10倍量的生理鹽水，顛倒混勻后，1000r/min離心5分鐘，棄去上清液，再加入8－10倍量的生理鹽水，顛倒混勻后，1000r/min離心5分鐘，如此反復(fù)三次。最后棄去上清液后即得壓積紅細(xì)胞。

配制5%紅細(xì)胞懸液：取壓積紅細(xì)胞1滴，加2ml生理鹽水，顛倒混勻即可。

洗滌紅細(xì)胞的目的：洗脫紅細(xì)胞表面上殘留的血漿蛋白，以免造成血型不符(bùfú)的假象第五頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)對(duì)象、藥品和儀器人雙凹玻片，采血針，竹簽，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蠟筆（記號(hào)筆），尖頭滴管，顯微鏡，消毒牙簽，5ml注射器及針頭(zhēntóu)，生理鹽水，碘酒棉球，滴管，小試管。A、B型標(biāo)準(zhǔn)血清第六頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)方法(fāngfǎ)和步驟1.ABO血型的鑒定

取雙凹玻片一塊，在兩端分別標(biāo)上A和B，中央(zhōngyāng)標(biāo)記受試者的號(hào)碼。在A端和B端的凹面中分別滴上相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)血清少許。75%酒精棉球消毒無(wú)名指端，用采血針刺破指端，用消毒后的尖頭滴管吸取少量血，分別與A端和B端凹面中的標(biāo)準(zhǔn)血清混合，放置1～2

min后，能肉眼觀察有無(wú)凝血現(xiàn)象，肉眼不易分辨的用顯微鏡觀察。根據(jù)凝集現(xiàn)象的有無(wú)判斷血型。第七頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)方法(fāngfǎ)和步驟ABO血型(xuèxíng)的鑒定

A端B端A型標(biāo)準(zhǔn)血清B型標(biāo)準(zhǔn)血清抗B凝集素抗A凝集素黃色藍(lán)色A端B端A端檢出B端檢出判斷未凝集凝集A凝集原A型凝集未凝集B凝集原B型凝集凝集B凝集原A凝集原AB型未凝集未凝集O型第八頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)方法(fāngfǎ)和步驟2.交叉配血實(shí)驗(yàn)

分別對(duì)供血者和受血者消毒、靜脈取血，制備成血清和紅細(xì)胞懸浮液。紅細(xì)胞懸浮液是將受檢者的血液1-2滴，加入裝有生理鹽水約1

ml的小試管中，即為2-5%的紅細(xì)胞懸浮液。加蓋備用。取雙凹玻片一塊，在兩端分別標(biāo)上供血者和受血者的名稱或代號(hào)，分別滴上它們的血清少許(shǎoxǔ)。

將供血者的紅細(xì)胞懸浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（稱為主側(cè)配血）；將受血者的紅細(xì)胞懸浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（稱為次側(cè)配血），混合。放置10～30

min后，肉眼觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨的用顯微鏡觀察。交叉配血反應(yīng)結(jié)果判定見(jiàn)p74表第九頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件注意事項(xiàng)指端、采血針和尖頭滴管務(wù)必做好消毒準(zhǔn)備。做到一人一針，不能混用。使用過(guò)的物品（包括竹簽）均應(yīng)放入污物桶，不得再到采血部位采血。消毒部位自然(zìrán)風(fēng)干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。取血不宜過(guò)少，以免影響觀察。采血后要迅速與標(biāo)準(zhǔn)血清混勻，以防血液凝固。在進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要防止將主側(cè)配血和次側(cè)配血搞混。

第十頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)果和討論為什么在配血試驗(yàn)時(shí)，如果主側(cè)發(fā)生(fāshēng)凝集反應(yīng)，不論次側(cè)配血如何都不能輸血？

第十一頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件出血時(shí)間(shíjiān)和凝血時(shí)間(shíjiān)的測(cè)定第十二頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)目的

學(xué)習(xí)(xuéxí)出血時(shí)間和凝血時(shí)間的測(cè)定方法熟悉測(cè)定兩時(shí)間的意義第十三頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)原理(yuánlǐ)-出血時(shí)間出血時(shí)間就是指小血管受到破損后血液流出至小血管封閉自行停止出血所需的時(shí)間，有時(shí)又稱止血時(shí)間。止血的發(fā)生主要與小血管的收縮封住出血口、血小板粘附、聚集和釋放血小板活性物質(zhì)等一系列生理反應(yīng)過(guò)程有關(guān)。觀察出血時(shí)間是檢測(cè)毛細(xì)血管功能(gōngnéng)和血小板數(shù)量及功能(gōngnéng)狀態(tài)是否正常的簡(jiǎn)便而有效的方法。正常人出血時(shí)間約為1～4

min，出血時(shí)間延長(zhǎng)見(jiàn)于血小板數(shù)量減少或毛細(xì)血管功能缺損情況。第十四頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)原理(yuánlǐ)-凝血時(shí)間血液流出血管后，受到刺激的血小板就會(huì)釋放出一系列凝血因子，使血中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成網(wǎng)狀的纖維蛋白，血液發(fā)生凝固。測(cè)定凝血時(shí)間可反映血液本身(běnshēn)出凝血因子是否缺乏或減少。凝血時(shí)間用于檢查血液本身(běnshēn)的凝血過(guò)程是否正常，而與血小板和毛細(xì)血管功能的關(guān)系較小。第十五頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)對(duì)象(duìxiàng)、儀器人小燒杯、酒精(jiǔjīng)棉球、采血針、濾紙片、秒表、玻片第十六頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)方法(fāngfǎ)和步驟1.出血(chūxiě)時(shí)間的測(cè)定2.凝血時(shí)間的測(cè)定（玻片法）第十七頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)結(jié)果(jiēguǒ)和討論報(bào)告該實(shí)驗(yàn)者的出血時(shí)間和凝血時(shí)間。并對(duì)大組的結(jié)果加以統(tǒng)計(jì)，用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。出血時(shí)間長(zhǎng)短與何種因素有關(guān)(yǒuguān)？出血時(shí)間長(zhǎng)的人凝血時(shí)間是否一定延長(zhǎng)？論述測(cè)定出血時(shí)間和凝血時(shí)間的臨床意義第十八頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)注意事項(xiàng)出血時(shí)間(shíjiān)：不可擠壓出血凝血時(shí)間：第十九頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件影響血液凝固(nínggù)的因素第二十頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)目的以血液凝固時(shí)間作為指標(biāo)，了解對(duì)血液凝固影響的因素，加深(jiāshēn)對(duì)生理止血過(guò)程的理解。第二十一頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理血液凝固是一個(gè)酶的有限水解激活(jīhuó)過(guò)程，在此過(guò)程中有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過(guò)程起動(dòng)時(shí)激活(jīhuó)因子來(lái)源不同，可將血液凝固分為內(nèi)源性激活(jīhuó)途徑和外源性激活(jīhuó)途徑。內(nèi)源性激活(jīhuó)途徑是指參與血液凝固的所有凝血因子在血漿中，外源性激活(jīhuó)途徑是指受損的組織中的組織因子進(jìn)入血管后，與血管內(nèi)的凝血因子共同作用而啟動(dòng)的激活(jīhuó)過(guò)程。第二十二頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)對(duì)象(duìxiàng)、藥品和儀器家兔25%氨基甲酸乙酯溶液(róngyè)，肝素（8

U/ml）、2%草酸鉀溶液、生理鹽水，液狀石蠟。免手術(shù)臺(tái)，常規(guī)手術(shù)器械，動(dòng)脈夾，動(dòng)脈插管(或細(xì)塑料導(dǎo)管)，注射器，試管8支，小燒杯2個(gè)，試管架,竹簽1束(或細(xì)試管刷),秒表。第二十三頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)方法和步驟1.靜脈注射氨基甲酸乙酯溶液，按5

ml/kg的量，將兔麻醉，仰臥固定于兔手臺(tái)上。正中切開(kāi)頸部，分離一側(cè)雙凹玻片，采血針，竹簽，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蠟筆（記號(hào)筆），尖頭滴管，顯微鏡，消毒牙簽，5ml注射器及針頭，標(biāo)準(zhǔn)ABO血清，生理鹽水，碘酒棉球，移液管。遠(yuǎn)心端用線結(jié)扎阻斷血流，近心端夾上動(dòng)脈夾。在動(dòng)脈當(dāng)中(dāngzhōng)斜向剪一小切口，插入動(dòng)脈插管(或細(xì)塑料導(dǎo)管)，結(jié)扎導(dǎo)管以備取血。第二十四頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)方法和步驟2.試管準(zhǔn)備好。

試管1

不加任何處理（對(duì)照管）

試管2

用液狀石蠟潤(rùn)滑整個(gè)試管內(nèi)表面

試管3

放少許棉花

試管4

置于有冰塊的小燒杯中

試管5

加肝素(ɡānsù)8U

試管6

加草酸鉀1～2

ml

試管7

加肺組織浸液0.1

ml第二十五頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)方法(fāngfǎ)和步驟3.放開(kāi)動(dòng)脈夾，每管加入血液2

ml。將多余的血盛于小燒杯中，并不斷用竹簽攪動(dòng)直至纖維蛋白形成。4.記錄凝血時(shí)間

每個(gè)試管加血2

ml后，即刻開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔壁15

s

傾斜一次，觀察血液是否凝固，至血液成為凝膠狀不再流動(dòng)為止，記錄所經(jīng)歷的時(shí)間。5、6、7號(hào)試管加入血液后，用拇指蓋住試管口將試管顛倒兩次，使血液與藥物混合。5.如果加肝素和草酸鉀的試管不出現(xiàn)血凝,可再向兩管內(nèi)(ɡuǎnnèi)分別加入0.025

mol?L-1的CaCl溶容液2～3滴,觀察血液是否發(fā)生凝固?第二十六頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件注意事項(xiàng)采血的過(guò)程盡量要快，以減少計(jì)時(shí)的誤差。對(duì)比實(shí)驗(yàn)的采血時(shí)間要緊接著進(jìn)行。判斷凝血的標(biāo)準(zhǔn)要力求一致。一般以傾斜試管達(dá)45度時(shí)，試管內(nèi)血液(xuèyè)不見(jiàn)流動(dòng)為準(zhǔn)。每支試管口徑大小及采血量要相對(duì)一致，不可相差太大。

第二十七頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件實(shí)驗(yàn)(shíyàn)結(jié)果將實(shí)驗(yàn)結(jié)果及各種條件下的凝血時(shí)間(shíjiān)按下表填寫(xiě),并進(jìn)行比較、分析解釋產(chǎn)生差異的原因。

表血液凝固及其影響因素實(shí)驗(yàn)管號(hào)實(shí)驗(yàn)處理凝血時(shí)間1不加任何處理2用液狀石蠟潤(rùn)滑整個(gè)試管內(nèi)表面3放少許棉花4置于有冰塊的小燒杯中5加肝素8U6加草酸鉀1～2ml7加肺內(nèi)組織浸液0.1ml第二十八頁(yè)，共三十頁(yè)。編輯課件思考題血液凝固的機(jī)制及影響血凝的外界因素(yīnsù)？為什么有幾管不凝？為什么有幾管比對(duì)照組管凝血時(shí)間長(zhǎng)？為什么有幾管比對(duì)照管凝血時(shí)間短？第二十九