實驗二細胞結構和大小測量

實驗二細胞結構和大小測量第一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二一、目的與要求

1、掌握光學顯微鏡下的細胞形態(tài)與結構特點、了解油鏡觀察自制標本操作方法

2、了解制片技術的種類與用途

3、初步掌握臨時制片的方法與染色方法

4、了解顯微測微尺的使用方法

5、學會利用軟件處理細胞，求各細胞的大小和核質比第二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二二、試劑、材料與器材1、材料：洋蔥，小白菜，新鮮的豬腦、番茄2、藥品：0．1％亞甲基藍染液，0．9％生理鹽水，1％碘液3、器材：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，滴管，擦鏡紙，小刀，顯微測微尺和電腦等第三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二三、操作與觀察（一）制片方法與種類1、玻片分類：臨時玻片標本與永久玻片標本2、制片方法的分類：裝片法和切片法（二）臨時玻片標本制備方法想一想應該怎么制作？第四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二

（三）永久玻片標本制備方法

清潔玻片取材固定沖洗染色脫水封片第五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二（四）幾種臨時裝片的制作

1、洋蔥鱗莖表皮細胞（染劑1％碘液或用0.1%亞甲基藍液)清潔玻片取材滴生理鹽水展平蓋上蓋玻片染色觀察第六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二思考1、為什么說洋蔥表皮細胞的形態(tài)結構特點與功能相適應？2、為什么用0.1%亞甲基藍液染色？它使細胞結構中哪一部分更能觀察清楚？3、如何使用高倍物鏡？怎樣調節(jié)顯微鏡才能更清楚的觀察標本?4、怎樣可避免標本中產(chǎn)生的氣泡？第七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二2、植物的葉肉細胞和果肉細胞

染劑：1％碘液

清潔玻片取材滴生理鹽水涂散開蓋上蓋玻片觀察染色第八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二思考

1）怎樣制作植物葉肉細胞和果肉細胞？我們主要可觀察到什么細胞器？2）想一想果肉細胞與表皮細胞形態(tài)結構有什么不同？其最顯著的特征是什么？第九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二3、人的口腔上皮細胞染劑：0．1％亞甲基藍染液

清潔玻片滴生理鹽水輕刮兩頰壁涂散開染色觀察蓋上蓋玻片第十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二

思考

1）怎么制作人的口腔上皮細胞？關鍵在哪一步？2）比較洋蔥表皮細胞和人的口腔上皮細胞結構上有何差別？第十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二4、動物脊髓神經(jīng)細胞形態(tài)結構觀察

染劑：0．1％亞甲基藍染液清潔玻片滴生理鹽水取材涂散開蓋上蓋玻片染色觀察第十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二HE染色方法：（蘇木精-伊紅染液）

1）含義蘇木精：堿性染料，使細胞核內的染色質及細胞質內的核糖體染成紫藍色。伊紅：酸性染料，細胞質和胞外基質中的成分染成紅色。第十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二第十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二

（1）、0.5~1%的伊紅酒精溶液：

稱取伊紅Y0.5~1g，加少量蒸餾水溶解后，再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過濾，將濾渣在烘箱中烤干后，以95%酒精100毫升溶解。（2）、蘇木精染液配方：(配制3000ml，可按比例減少)

蘇木精

6g

無水乙醇

100ml

硫酸鋁鉀

150g

蒸餾水

2000ml

碘酸鈉

1.2g

冰醋酸

120ml

甘油

900ml

第十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二配制方法：將蘇木精溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水，溶解后將甘油傾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸鈉。

（3）、1%鹽酸酒精分色液：將1毫升濃鹽酸加入99毫升70%酒精中即可第十六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二2）染色的步驟固定：入100%、95%、85%、70%酒精分別脫水2-5min，再入蒸餾水清洗3min。蘇木精染液染色：5-15min脫色：蒸餾水漂洗2min分色：1%鹽酸酒精分色液分色5min，鏡檢脫色:流水沖洗20min，鏡檢漂洗：蒸餾水漂洗2min染色：1%的伊紅酒精液染色3min脫水：70%、85%、95%、100%酒精分別脫水2-5min。第十七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二（五）細胞大小的測量1、顯微測微尺的用法（1）顯微測微尺的組成（2）測量：長度的測量，厚度的測量和對圓形，橢圓形細胞的測量第十八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二1）顯微測微尺的組成分目鏡測微尺和鏡臺測微尺，兩尺配合使用。（1）鏡臺測微尺在一個載玻片中央封固的尺，長1毫米(1000μm)，被分為100格，每格長度是10微米。第十九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二（2）目鏡測微尺是一個放在目鏡像平面上的玻璃圓片。圓片中央刻有一條直線，此線被分為若干格，每格代表的長度隨不同物鏡的放大倍數(shù)而異。因此，用前必須測定。第二十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二2）使用方法將鏡臺測微尺放在顯微鏡的載物臺上夾好，小心轉動目鏡測微尺和移動鏡臺測微尺使兩尺平行，記錄鏡臺測微尺若干格所對應的目鏡測微尺的格數(shù)。第二十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二2、電腦軟件圖象處理系統(tǒng)

（各種不同倍數(shù)下的）啟動圖像處理系統(tǒng)圖像采集窗捕捉靜態(tài)圖像關閉圖像采集窗測量校準向導裝入標準圖像確定物鏡倍數(shù)校準圓直徑（μm）校準標定名保存最小化第二十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二DigilabII-cLogin確定選擇細胞手動拍照拍照打開圖像處理系統(tǒng)點線、點圓、點多邊形尋找目標細胞第二十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二實驗報告要求:

1、計算2—3個細胞的大小

2、計算球形細胞的核質比

3、繪人的